消炎止咳片质量标准的研究

熊灿琼 曹素云

消炎止咳片质量标准的研究

熊灿琼 曹素云

目的 探讨消炎止咳片的质量控制标准。方法 采用薄层色谱法鉴别方中百部、桔梗，采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果 百部、桔梗薄层鉴别效果好；穿心莲内酯9.021～108.250 μg，具有良好的线性关系（r=0.9997），脱水穿心莲内酯10.070～120.840 μg，具有良好的线性关系（r=0.9999）；穿心莲内酯平均回收率为97.9%，RSD为2.4%，脱水穿心莲内酯平均回收率为98.0%，RSD为2.0%。结论 该方法简单、快速、准确、重现性好，能够较好地控制该制剂的质量。

消炎止咳片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；高效液相色谱；薄层色谱鉴别

消炎止咳片由胡颓子叶200 g、桔梗150 g、太子参200 g、百部100 g、罂粟壳12.5 g、麻黄25 g、黄荆子125 g、南沙参37.5 g、穿心莲125 g等组成，具有消炎、镇咳、化痰、定喘的功效，用于咳嗽痰多、胸满气逆、气管炎。所采用的标准为《卫生部药品标准中药成方制剂》第5册，对主成分无定性、定量分析。为更好地控制其质量，笔者通过查阅大量资料，采用薄层色谱鉴别法（TLC）对桔梗、百部进行鉴别[1]；高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量[2]，为本制剂提供可定性、定量的依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695 Separations Moduie高效液相色谱仪（四元泵、二极管阵列检测器 1260 Infinity、自动进样器）；紫外检测器（2998 PDA Detector）；色谱数据工作站（Empower）；AY120电子天平（SHIMADZH）；洁康TM超声波清洗器。

1.2 试药 脱水穿心莲内酯对照品（中国食品药品检定所研究院，批号：110854-201308，含量：99.7%）；穿心莲内酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110854-201108，含量：98.7%）；百部对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：200402）、桔梗对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：

121028-200909）；消炎止咳片同一生产厂家4个批号：130120、140213、140227、140306；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 百部的鉴别

2.1.1 样品溶液的制备 取本品20片，研细，加浓氨水l0 ml湿润，加三氯甲烷50 ml，回流提取2 h，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使其溶解，作为供试品溶液[3]。

2.1.2 对照药材溶液的制备 取百部对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例取缺百部的其他药材，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.1.4 薄层色谱鉴别结果 吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以苯-三氯甲烷-甲醇-氨水（5:2:2:0.2）为展开剂，展开、取出、晾干，喷以0.5茚三酮溶液（紫外光灯365 nm下检验）。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点[4]，阴性对照溶液无干扰，见图1。

图1 百部薄层色谱图（1百部对照药材溶液； 2.3.4供试品溶液；5缺百部的阴性对照溶液）

2.2 桔梗的鉴别

2.2.1 样品溶液的制备 取本品 l0 片，去糖衣，研碎，取细粉l.5 g，加盐酸l ml与三氯甲烷20 ml，加热回流1 h，冷却，分取三氯甲烷层，滤过，蒸干，残渣加乙醇l ml溶解，即得。

2.2.2 对照药材溶液的制备 取桔梗对照药材2 g，按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例取桔缺梗的其他药材，按样品溶液。制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4 薄层色谱鉴别结果 吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇（10:8:0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%磷酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中，在与对照药材溶液相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无干扰。见图2。

图2 桔梗薄层色谱图（1缺桔梗的阴性对照溶液；2.3.4供试品溶液；5桔梗对照药材溶液）

2.3 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定

2.3.1 色谱条件 Diamonsil C18（5 μm，200×4.6 mm）色谱柱。流动相：甲醇-水（52:48）；检测波长：穿心莲内酯225 nm，脱水穿心莲内酯254 nm[5]；流速为1.0 ml/min；柱温35 ℃。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取穿心莲内酯对照品18.28 mg，经P2O5减压干燥12 h的脱水穿心莲内酯对照品20.20 mg，加甲醇制成每1毫升含穿心莲内酯0.3656 mg、脱水穿心莲内酯0.4040 mg的溶液，作为对照品储备液。分别精密量取上述两种储备液1 ml置同一10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品 20片，除去糖衣，精密称定，研细，称取粉末3.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入40%甲醇25 ml浸泡1 h，超声处理（250 w，25 kHz）30 min，用40%的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 ml，置中性氧化铝柱（200～300目，5 g，内径1.5 cm）上，用甲醇15 ml洗脱，收集洗脱液，置25 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液[6]。

同法按处方比例取不含穿心莲的其他药材制备阴性空白溶液。

2.3.4 色谱行为与系统适应性实验 分别取 2.3.2与2.3.3项下制备的对照品、供试品、阴性对照溶液，按照2.3.1项下的色谱条件进样，如图3所示，阴性对照溶液无干扰。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算不低于2 000[7]，其他均符合2010年版《中国药典》的要求。

2.3.5 线性关系考察 精密量取2.3.2对照品贮备液适量，加甲醇稀释至浓度分别为：脱水穿心莲内酯浓度分别为10.07、20.14、40.28、80.56、120.84 μg/ml，穿心莲内酯浓度分别为9.02、18.04、36.08、72.17、108.25 μg/ml的对照品溶液，按2.3.1项下的色谱条件进样，分别测定脱水穿心莲内酯和穿心莲内酯峰，以峰面积（A）作为纵坐标，以进样浓度（C）为横坐标，分别得回归方程为 A=1.7173×104C－9.9377× 103，r=0.9999，脱水穿心莲内酯在 10.07～120.84 μg/ml范围内线性关系良好；A=2.0809×104C－3.6576×103，r=0.9997，穿心莲内酯在9.02～108.25 μg/ml范围内线性关系良好。

2.3.6 稳定性实验 将2.3.3项下的溶液室温放置，分别于0、3、6、9、12 h测定，记录峰面积，结果RSD分别为1.9%和0.8%（n=5）。可见供试品溶液在12 h内稳定。

2.3.7 精密度实验 精密量取 2.3.2项下对照品溶液，按2.3.1项下色谱条件重复进样5次，记录峰面积，RSD分别为1.5%和0.7%。

2.3.8 重复性实验 取同一批号的样品6份，按样品溶液制备方法及测试条件测定，结果脱水穿心莲内酯和穿心莲内酯RSD的平均含量分别为1.8%和0.9%（n=6），表明本法重复性良好。

图3 穿心莲HPLC图谱

2.3.9 加样回收率实验 取同一批样品（批号：130120）6份，分别为1.5087g、1.5114g、1.5093g、1.5201g、1.5107g、1.5041g。按照2.3.3项下制备，至“精密加入40%甲醇25ml浸泡1h”，按大、中、小3个浓度分别精密加入对照品贮备液脱水穿心莲内酯各1.0、1.5、2.0 ml，穿心莲内酯各2、3、4 ml。同法处理即得。按2.3.1项下色谱条件进样。记录色谱图，计算回收率，结果见表1、2。

表1 脱水穿心莲内酯回收率试验结果

表2 穿心莲内酯回收率试验结果

3 讨论

3.1 原计划对制剂中麻黄和罂粟壳进行研究，查阅大量相关资料，发现有不少研究该制剂中麻黄和罂粟壳的文献；为能更好地控制该制剂的质量，保证其疗效，选择其中桔梗和百部进行鉴别，并测定穿心莲的含量[6]。

3.2 试验过程中，对供试品溶液提取对比不同方法和不同溶剂，结果表明本文方法提取简单、完全；方法专属性强，阴性无干扰，可作为该制剂的质量控制方法。

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国中国药典· 1部[S].北京,2010:251-252.

[2]赵秀玲.桔梗的化学成分、药理作用及资源开发的研究进展[J].中国调味品,2012,27(2):5-9.

[3]刘飞,杨晓芬,龚玲.消炎止咳片的薄层色谱鉴别[J].贵州医药杂志,2004,28(10):935-935.

[4]黄良勤.消炎止咳片薄层色谱鉴别方法的研究[J].遵义医学院学报,2007,30(4):474-475.

[5]黄良勤.高效液相色谱法测定消炎止咳片中穿心莲内酯的含量[J].遵义医学院学报,2007,30(2):194-196.

[6]罗秀华,李增文,孙玉滨,等.RP-HPLC法测定消炎止咳片中脱水穿心莲内酯的含量[J].中药研究与信息,2005,10(7):14-15.

Quality Standard of Xiaoyanzhike Tablets

Xiong Canqiong Cao Suyun

Objective To establish the quality standard of Xiaoyanzhike Tables.Methods TLC method was used in the prescription of stemona root,Platycodon grandiflorum,content by high performance liquid chromatography determination of andrographolide and dehydroandrographolide.Results Stemona root,Platycodon grandiflorum TLC identification effect is good;andrographolide has good linear relationship in the range of 9.021～108.250 μg (r=0.9997);dehydroandrographolide have good linear relation in the range of 10.070～120.840 μg(r=0.9999); andrographolide the average recovery was 97.9%,RSD was 2.4%,dehydroandrographolide,the average recovery was 98%,RSD was 2%.Conclusion The method is simple,rapid,accurate and reproducible,and can better control the quality of this preparation.

Xiaoyanzhike Tablets;Andrographolide and dehydroandrographolide;HPLC;TLC

R927.11

A

1673-5846(2015)05-0017-03

毕节市食品药品检验所，贵州毕节 551700