CD44v6蛋白与CD3+T淋巴细胞在食管鳞癌中的表达与预后的关系

张艳芳

CD44v6蛋白与CD3+T淋巴细胞在食管鳞癌中的表达与预后的关系

张艳芳

目的 探讨食管鳞癌组织中CD44v6蛋白和浸润的CD3+T淋巴细胞表达情况及对预后的影响。方法 应用免疫组织化学法（SP）检测CD44v6蛋白、CD3+T细胞在60例食管鳞癌患者中的表达，另选取30例癌旁正常组织为对照，分析其与临床病理参数之间的关系。结果 CD44v6蛋白在食管癌及癌旁正常组织阳性表达率分别为53.3%、16.7%，二者差异有统计学意义（P＜0.05）；CD3+T淋巴细胞在食管癌及癌旁正常组织阳性表达率分别为56.7%、80.0%，二者差异有统计学意义（P＜0.05）；CD44v6蛋白高表达及CD3+T淋巴细胞低表达均与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关（P＜0.05），但与分化程度、病变长度无关（P＞0.05）；食管癌中CD3+T淋巴细胞和CD44V6蛋白的表达呈显著负相关（r=-0.481，P＜0.01）。结论 CD44v6蛋白高表达和CD3+T淋巴细胞低表达与食管鳞癌发生发展、浸润转移密切相关。

食管肿瘤；CD44v6蛋白；CD3+T淋巴细胞；免疫组织化学法；表达；预后

细胞免疫是机体抗肿瘤免疫反应的重要组成部分。肿瘤组织中浸润的淋巴细胞（TILs），主要是指位于肿瘤间质内的T淋巴细胞，TILs的密度、活化状态及类型在一定程度上反映了机体的免疫水平，与临床预后密切相关。同时，又有研究发现，肿瘤组织中虽然有大量TILs，但并未对肿瘤的生长起到抑制作用[1-3]，反而促进了癌细胞的浸润、转移。CD44v6蛋白是属于黏附分子家族成员，研究发现，在肿瘤细胞中呈高表达，而在正常组织中呈低表达或不表达[4-5]，且与肿瘤预后密切相关。因此，本研究通过免疫组织化学法（SP）研究CD44v6蛋白和CD3+T淋巴细胞在食管鳞癌中的表达与关系，进一步明确其与食管癌病理分级、浸润及转移、预后的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料 60例食管癌手术标本来自安阳市肿瘤医院2009年1月1日至2010年1月1日收治的胸科手术患者。所有标本经胃镜或手术病理确诊，术前均未行化疗或放疗，临床病例资料完整。其中男23例，女37例，年龄42～79岁，平均（56±3）岁。参照国际抗癌联盟（UICC）2009年第7版TNM分期标准，Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期12例；鳞癌高、中、低分化者分别为16、29和15例。另选取30例癌旁正常组织（距食管癌原发灶3 cm，并经病理证实）作为对照。

1.2 方法 鼠抗人CD44v6特异性抗体和鼠抗人CD3 特异抗体均购于北京中杉生物技术公司，标本经 4%甲醛固定，石蜡包埋组织连续切片 3张（厚度4～5 μm），进行常规苏木精-伊红（HE）染色，SP检测CD44v6蛋白和CD3+T淋巴细胞的表达情况。常规设阳性对照，并以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作阴性对照，光学显微镜下观察显色结果。

1.3 染色结果判断 以双盲法进行染色判断，CD44v6阳性染色为棕黄色颗粒，主要为胞膜显色，部分胞质显色，CD3+阳性染色为棕黄色，为胞膜显色。每例标本随机选5个高倍视野，染色强度计分：不着色为0分；淡黄色为1分；着色呈黄色为2分；棕褐色为3分。染色阳性细胞百分比计分：＜5%为0分；5%～25%为1分；26%～50%为2分；＞50%为3分。根据染色强度、阳性细胞百分比乘积判断结果：≥2者为阳性，＜2者为阴性。

1.4 统计学分析 所有数据录入计算机，采用SPSS 17.0统计软件进行分析。组间率的比较采用χ2检验；相关性检验行Spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD44v6蛋白与CD3+T淋巴细胞的表达 CD44v6蛋白在癌旁正常食管组织阳性表达率为 16.7%（5/30），在食管原发灶中的阳性表达率为 53.3%（32/60），差异有统计学意义（P＜0.05）。CD3+T淋巴细胞在癌旁组织阳性表达率为80.0%（24/30），在食管原发灶中的阳性表达率为56.7%（34/60），差异有统计学意义（P＜0.05），见表1及图1、2。CD44v6高表达及CD3+T淋巴细胞低表达与食管

鳞癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关（P＜0.05），但与分化程度及病变长度无关（P＞0.05），见表2。

表1 癌旁正常食管组织和食管鳞癌组织中CD44v6蛋白及CD3+T淋巴细胞的表达

图1 食管鳞癌组织中CD44v6蛋白的表达（×400）

图2 食管鳞癌组织中CD3+T淋巴细胞的表达（×400）

表2 CD44v6蛋白及CD3+T淋巴细胞与食管鳞癌临床病理参数间的关系

2.2 CD44v6蛋白与CD3+T细胞在食管癌中表达的相关性分析 60例食管鳞癌组织中，CD44v6蛋白与CD3+T淋巴细胞同时表达阳者11例（18.3%），同时表达阴性者5例（8.3%），仅CD44v6蛋白表达者21例（35.0%），仅CD3+T淋巴细胞表达者23例（38.3%）；采用 Spearman相关分析结果显示，CD44v6蛋白与 CD3+T淋巴细胞之间呈负相关（r=-0.481，P＜0.01）。

3 讨论

CD44具有不同亚型，分为标准型 CD44（standard CD44）即CD44s，变异型即CD44v，其中CD44v又可根据其外显子拼接方式、种类不同分为CD44v1～10等10多种。CD44v可与透明质酸结合，介导参与细胞与细胞外基质结合及细胞伪足形成，从而使细胞运动能力增强。研究发现，CD44v6在多种肿瘤中表达上调，与肿瘤的不良预后相关。目前，关于CD44v6在食管癌中的研究结果不一。有学者发现，食管癌中CD44v6的表达明显高于正常组织，且在淋巴结转移阳性组及T3/T4组患者中，CD44v6的表达明显升高，差异有统计学意义[6]。也有报道认为，CD44及CD44v6在淋巴结转移癌中的表达明显比对应的原发灶弱，转移淋巴结的数目越多，表达也越弱[7]。本研究显示，CD44v6在食管癌组织中表达高于正常组织，且阳性表达者较易发生脉管浸润和远处转移，研究结果与文献[7]报道相似，CD44v6随淋巴结转移及浸润深度加深而增高，肿瘤的浸润深度（T1-2/T3-4）、淋巴结有无转移（N0/N+）表达之间存在差异，表明CD44v6在食管癌的浸润、淋巴结转移中起重要作用。CD44v6过表达提示预后不良，可作为判断食管癌预后的一项指标。

淋巴细胞的浸润需要肿瘤微环境内一系列黏附分子、趋化因子的参与。本研究发现，大多数TILs主要位于食管癌间质内，在癌旁组织内可见较多的CD3+T淋巴细胞浸润，而在癌巢内CD3+T淋巴细胞减少，提示肿瘤组织内存在T淋巴细胞的排斥现象。同时发现，在中晚期肿瘤组织内，浸润的淋巴细胞明显减少，提示肿瘤微环境内存在负向调节因子，阻止了T淋巴细胞向肿瘤内的浸润。从CD44v6蛋白和CD3+T淋巴细胞的表达发现，CD44v6蛋白与CD3+T淋巴细胞在食管癌中同时出现，但呈负相关，并且均与淋巴结转移、浸润深度有关，提示肿瘤细胞产生的CD44v6蛋白，可促使淋巴细胞归巢，从而使肿瘤组织中浸润的淋巴细胞明显减少，进一步削弱了免疫反应，肿瘤细胞逃脱了免疫系统的监视与清除[8]，促进了肿瘤的进展。

因此，通过检测食管癌组织中CD44v6蛋白和CD3+T淋巴细胞的表达情况，筛查高危复发患者，能更好地判断食管癌患者的预后，指导临床辅助治疗。

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Relationship CD44v6 protein Expression and CD3+T lymphocytes and Prognosis in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Zhang Yanfang

Objective To explore the expression of CD44v6 protein and CD3+T cells and their prognostic value in esophageal squamous cell carcinoma.Methods Immunohistochemical method(SP)detection of CD44v6,CD3+T cells expressing esophageal squamous cell carcinoma in 60 cases,and another 30 cases selected normal tissues adjacent to cancer as control,analyze its relationship with clinicopathological parameters.Results CD44v6 protein in esophageal cancer and adjacent normal tissue expression rate was 53.3%,16.7%,respectively,the difference was statistically significant(P＜0.05);CD3+T lymphocytes in esophageal cancer and adjacent normal tissue expression rate respectively 56.7%,80.0%,the difference was statistically significant(P＜0.05);CD44v6 protein expression and CD3+T lymphocytes were associated with low expression in esophageal squamous cell invasion,lymph node metastasis was positively correlated(P＜0.05)However,the degree of differentiation, independent of lesion length(P＞0.05); esophageal cancer in CD3+T lymphocytes and CD44V6 protein expression

Esophageal neoplasm;CD44v6;CD3+T cells;Immunohistochemistry;Expression;Prognosis

R735.1

A

1673-5846(2015)06-0073-03

安阳市肿瘤医院内五科，河南安阳 455000

showed a significant negative correlation(r=-0.481,P＜0.01).Conclusion CD44v6 protein expression and low expression of CD3+T lymphocytes in the development of esophageal squamous cell carcinoma occurs in closely related to invasion and metastasis.