云南药用植物鼓槌石斛化学成分研究

陈亚萍，王娅娟, 2, 李玉鹏*, 张 君， 翁瑞旋, 杨晓琳

(1. 昆明医科大学 药学院暨云南省天然药物药理重点实验室,云南 昆明 650500;2. 昆明医科大学第一附属医院 药剂科,云南 昆明 650031)



云南药用植物鼓槌石斛化学成分研究

陈亚萍1，王娅娟1, 2, 李玉鹏1*, 张 君1， 翁瑞旋1, 杨晓琳1

(1. 昆明医科大学 药学院暨云南省天然药物药理重点实验室,云南 昆明 650500;2. 昆明医科大学第一附属医院 药剂科,云南 昆明 650031)

目的：对云南鼓槌石斛化学成分进行研究,发现活性化合物。方法：采用95%乙醇提取活性化合物，经硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化后，以波谱分析(核磁共振氢谱、碳谱和质谱)鉴定其结构。结果：从石油醚萃取部分分离得到7个化合物，结构确定为: stigmasterol (1), β-sitosterol (2), 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3), stigmast-4-en-3-one (4), ergosterol (5), moscatin(6) , daucosterol (7)。结论：化合物4为首次从本植物中分离得到。

鼓槌石斛；药用植物；化学成分

石斛是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)多种植物的新鲜或干燥茎的统称。我国76种石斛属植物中有30多种作药用[1]。在《神农本草经》中, 石斛被列为上品, 具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身等功效[2]。国内学者曾从鼓槌石斛中得到联苄、菲类、芴酮等类型的化学成分[3]。为合理开发和应用该植物的药用价值,对鼓槌石斛化学成分进行研究,以找寻其活性先导化合物。

1 仪器与材料

Bruker DRX-500核磁共振仪,TMS为内标,化学位移(δ)值的单位用ppm, Varian Mat-711质谱仪,青岛海洋化工厂生产硅胶, Sephadex LH-20: 20～80μm (Pharmacia Fine Chemical Co., Ltd.), 高效薄层层析硅胶G板(烟台化工研究院), 10%硫酸乙醇溶液为显色剂，溶剂为工业纯, 重蒸, 其它试剂为化学纯或分析纯。实验样品采自云南思茅, 经昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室刘毅教授鉴定为鼓槌石斛。

2 化合物提取分离

鼓槌石斛全草4.11kg，用95%乙醇浸泡5次，每次2天，浸泡液过滤、减压蒸干，用500mL蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，制得石油醚萃取物 27.2g、乙酸乙酯萃取物192.4g。鼓槌石斛石油醚萃取物, 用硅胶柱层析分离，依次用石油醚-乙酸乙酯(20∶1,10∶1,5∶1,1∶1，0∶1)洗脱，以250mL为单位接收洗脱液，根据TLC检测合并，得到3个部分, 其中第二部分经硅胶柱层析分离，Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化得到化合物1～4；第三部分经硅胶柱层析分离，Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化得到化合物5～7。

3 化合物结构鉴定

3.1 化合物1：stigmasterol

白色针状晶体，MF:C29H48O, MW: 412;1HNMR (CDCl3, 500 MHz): δ 5.21 (1H, dd, J= 8.5, 17.2, H-22), 5.06 (1H, dd, J= 8.5, 17.2, H-23), 0.86 (3H, d, J= 1.5, H-29), 0.82 (3H, d, J= 4.3, H-27), 0.81 (3H, s, H-26), 0.82(3H, s, 18-CH3)。该化合物极性较小，易溶于氯仿，15%H2SO4乙醇显色为紫红色，与豆甾醇标准品进行TLC对照，在多种溶剂系统中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR数据与豆甾醇[4]基本一致，确定其为豆甾醇。

3.2 化合物 2： β-sitosterol

白色针晶体,MF:C29H50O,MW:414;1H-NMR (CDCl3,500 MHz): δ 5.32 (1H, d, J= 5.0, H-6), 3.50 (1H, m, H-3), 0.98 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, d, H-21), 0.85 (3H, d, H-29), 0.82 (3H, t, H-27), 0.80 (3H, d, H-26), 0.70 (3H, s, H-18)。该化合物极性较小，易溶于氯仿,10%H2SO4乙醇显色为紫红色，与标准品进行TLC对照，在多种溶剂系统中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR数据与β-谷甾醇[5]基本一致，确定其为β-谷甾醇。

3.3 化合物3：3,4-dihydroxy-benzoic acid

白色针状晶体,MF:C7H6O4,MW:154;1HNMR (CDCl3,500 MHz):δ 7.50(1H, d, J= 2.0, H-2), 7.45 (1H, dd, J= 8.0, 2.0, H-6), 6.90 (1H, d, J= 8.5, H-5);13C NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 170.5 (-COOH ), 150.2 (C-4), 146.0 (C-3), 124.0 (C-6), 122.0 (C-l), 117.5 (C-2 ), 115.2 (C-5)。氢谱数据和碳谱数据与文献报道基本一致，确定该化合物的结构为3,4-dihydroxy-benzoic acid[6].

3.4 化合物4 ：stigmast-4-en-3-one

白色粉末, MF: C29H48O,MW:412;1HNMR (CDCl3,500 MHz):δ 5.50 (1H, s, H-4),2.32 (2H, m, H-2), 1.15 (3H, s, H-19), 0.89 (3H, d, J= 6.2, H-21), 0.81 (3H, t, J= 6.5, H-29), 0.80(3H, d, J= 6.5, H-26), 0.78 (3H, d, J= 6.5, H-27), 0.67 (3H, s, H-18)。该化合物极性较小，易溶于氯仿,与标准品进行TLC对照，在多种溶剂系统中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR数据与stigmast-4-en-3-one[7]基本一致，确定其为stigmast-4-en-3-one.

3.5 化合物5 ：ergosterol

浅黄色晶体, EI-MS (rel. int.) m/z: 396([M]+, 100), 378([M-H20]+, 7), 363 (79), 337 (43), 253 (38), 157 (37), 143 (46), 109 (29), 95 (32), 81 (56), 69 (84),55 (87)。该化合物极性较小，易溶于氯仿。10%H2SO4乙醇显色为紫红色，与标准品进行TLC对照，在多种溶剂系统中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR数据与ergosterol[8]基本一致，确定其为ergosterol.

3.6 化合物6 ：moscatin

白色晶体, MF:C15H12O3,MW:240;EIMS m/z (%):240(M+,100),225(49),197(45),139(18);1HNMR[(CD3)2CO,500MHz]: 9.50 (1H,s,5-OH),9.05(1H,s,2-OH),7.61(1H,d,J= 8.8,H-9),7.50(1H,d,J= 8.8,H-10),7.43(1H,dd,J=7.6, 7.6H-7), 7.40 (1H,dd,J= 7.6,2.0,H-6),7.13 (1H,dd,J=7.6,2.0,H-8),7.05(1H,d,J=2.4,H-1),7.00(1H,d,J= 2.4,H-3),4.15(3H,s,4-OMe)。氢谱数据与文献报道基本一致，确定该化合物的结构为moscatin[9]。

3.7 化合物7 ：daucosterol

白色颗粒。MF: C35H60O6, MW:576; EIMS m/z(%): 414(苷元，6)，396 (100), 381 (7), 329 (2), 303 (5), 231 (3), 187 (3), 161 (15), 145 (21), 133 (12), 119 (10), 107 (17), 95 (22)；1HNMR (C5D5N, 500 MHz): δ 5.35 (1H, m, H-6), 5.09 (1H, J= 7.7, H-1), 4.58 (1H, d, J= 9.8), 4.43 (1H, m), 4.33 (2H, m), 4.10 (1H, m), 4.03 (2H, m)。该化合物难溶于氯仿、丙酮、甲醇，易溶于吡啶, 10%的硫酸乙醇显色为紫红色，与胡萝卜苷标准品进行TLC对照,在多种溶剂系统中Rf值均相同。且1HNMR、13CNMR与胡萝卜苷基本一致，所以确定其为胡萝卜苷[10].

[1] 李满飞,徐国钧,徐珞珊,等.商品石斛的调查及鉴定(Ⅱ) [J].中草药, 1991, 22(4):173-180.

[2] 南京中医药大学.中药大辞典 [M].上海：上海科学技术出版社, 1985, 586-589.

[3] 张光浓, 毕志明, 王峥涛, 等.石斛属植物化学成分研究进展[J].中草药, 2003, 34(6): 5-8.

[4] 李玉鹏, 蒋金和, 刘莹, 等.金钗石斛化学成分的研究[J].时珍国医国药,2010,21(1): 39-40.

[5] 乔竹稳，姚旭颖，单喜臣，等.马齿苋化学成分研究 [J].齐齐哈尔大学学报, 2012, 28(1): 58-60.

[6] JIA LING GENG, CHANG AN GENG, JI JUN CHENG. Chemical constituents of Swertis cincta [J].Nat Prod Res Dev, 2012, 24: 42-46.

[7] CHANG S J, LIN T H, CHEN C C. Constituents from the stems of Dendrobium clavatum var. aurantiacum [J].J Chin Med, 2001, 12(3): 211-218.

[8] WU S H, CHEN Y W, Li Z Y, et al. Studies on the metabolites of Endophytic fungus phomopsis sp[J].Nat Prod Res Dev, 2008, 20:1014-1015.

[9] MAJUMDER P L, SEN R C. Structure of moscatin-a new phenanthrene derivative from the orchid Dendrobium moscatum [J]. Indian Journal of Chemistry,1987,26 B (1):18-20.

[10] CHENG W X, CHENG H Y, ZHANG Y P, et al. Chemical constituents of Vitex quinata [J].Nat Prod Res Dev, 2007, 19: 244-246.

(责任编辑：魏 晓)

Research of Chemical Constituents from Dendrobium Chrysotoxum

Chen Yaping1, Wang Yajuan1,2, Li Yupeng1*, Zhang Jun1, Weng Ruixuan1, Yang Xiaolin1

(1. School of Pharmaceutical Science &Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products,Kunming Medical University,Kunming 650500, China; 2. Pharmacy Department,the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650031, China)

Objective:To study the chemical constituents from Dendrobium chrysotoxum and find its bioactive compounds. Methods:The compounds were extracted by 95% alcohol and isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20. Their structures were identified by spectroscopic analysis (1H NMR, 13CNMR and EIMS). Results:Seven compouds were obtained and identified as stigmasterol (1), β-sitosterol (2), 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3), stigmast-4-en-3-one (4), ergosterol (5), moscatin(6) , daucosterol (7). Conclusion:Compounds 3 ,4 was originally isolated from this medicinal plant.

Dendrobium chrysotoxum; Medicinal Plant; Chemical Constituents

2014-10-28

国家自然科学基金项目(21202066); 云南省应用基础研究基金项目(2012FB156)

陈亚萍(1981-)，女，昆明医科大学实验师，研究方向为天然药物化学及药物代谢动力学。

李玉鹏 (1978-), 男, 昆明医科大学副教授,研究方向为天然药物化学和药理学。E-mail：liyupeng26@126.com

R284

A

1673-2197(2015)05-0014-02

10.11954/ytctyy.201505007