类风湿因子对免疫测定干扰的研究进展

谢良才，刘天春(综述)，范 文※，许 蓉(审校)

(长江大学附属第一医院 a.检验科，b.骨外科，湖北荆州434000)

类风湿因子(rheumatoid factors，RF)是一种临床常见的自身抗体，常作为类风湿关节炎的重要诊断指标之一［1］，但同样出现在其他自身免疫性疾病［2-3］、感染性疾病［3-4］，甚至健康人血液中［5］。RF是常见的免疫测定干扰物之一［3］，尽管RF对免疫检测的干扰发生率并不高，但RF干扰的潜在性和严重危害性应引起实验室工作人员和临床医师的足够重视和警觉。目前相关研究多限于临床个案的分析和报道，现主要阐述RF对各类不同种类的免疫测定干扰产生的机制及不同的干扰类型，同时阐述干扰的发现、鉴别、处理及减少RF干扰发生的措施，为消除或减少RF对免疫检测的干扰提供参考。

1 RF对免疫测定的干扰

1.1 RF干扰的检测项目 RF对许多免疫测定项目存在干扰。内分泌类:甲状腺激素［6］、甲状旁腺激素［7］;肿瘤标志物:糖类抗原 19.9［8］、糖类抗原 125［9］;心肌标志物:脑钠肽［10］、肌钙蛋白Ⅰ［11］;特异性微生物标志物:乙型肝炎表面抗原［12］、丙型肝炎病毒抗体［13］、风疹特异性免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)M 抗体［14］、结核分枝杆菌抗体［15］;其他:细胞因子［16］、C 反应蛋白［17］及一些药物［18］等。

1.2 对双抗体夹心法免疫检测的干扰

1.2.1 正干扰(假性增高/假阳性) 双抗体夹心法用于大部分抗原、蛋白、激素及药物的检测。研究证实，RF对基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附法［12，19］、固相放射免疫［14］、化学发光法［10，20-21］、微粒子免疫分析［22］等检查系统，均存在不同程度的正性干扰。RF对双抗体夹心法检测系统干扰的可能机制为:双抗体夹心法检测系统中的捕获抗体和信号抗体一般均为IgG，当样本中的RF能同时与这两种抗体Fc段结合时，便会将捕获抗体与信号抗体桥接，形成捕获抗体-RF-信号抗体的复合物，从而产生非特异性的检测信号，造成检测结果的假性增高或假阳性［16，19］，引起这种干扰的可能是IgM-RF、IgG-RF或者其他型别。

1.2.2 负干扰(假性降低/假阴性)RF对双抗体夹心法的免疫分析系统的负干扰在一些文献中被提出［23］，但被试验或临床证实的报道较少［19，24-25］。RF对免疫测定系统负干扰的机制，主要是空间位阻(屏蔽)假说［25］，即当RF只能与捕获或信号抗体中的某一种抗体结合时，会形成空间位阻(屏蔽)，阻碍捕获抗体-抗原-信号抗体复合物的形成，造成检测信号的减弱或缺失，引起假性降低或假阴性的检测结果［24-25］。对于一些三位点免疫检测法，其干扰发生的机制与双抗体夹心法是相似的。由于同时使用两种捕获抗体(或两种信号抗体)，虽然增加了检测的敏感性，但同时也增加了干扰发生率。

1.3 RF对捕获法检测IgM类抗体的干扰 捕获法检测IgM的干扰目前仅见假性增高的报道［13-14］，是否有假性降低的可能尚有待进一步研究。RF对捕获法干扰有两种可能的机制，一种是由IgM-RF引起，由于第一步IgM的捕获是非特异性的，IgM-RF同样被捕获，被捕获的IgM-RF最后与信号抗体(IgG或IgG的抗原抗体复合物)结合，产生检测信号;另一种机制则与双抗体夹心法类似，由RF直接将捕获抗体和信号抗体桥接，同样会引起假性增高或假阳性。这两种机制由哪一种主导目前尚缺乏相关研究和报道。

1.4 RF对其他免疫测定的干扰 RF干扰免疫比浊法和乳胶光度免疫分析法也有报道，RF对免疫比浊法干扰机制主要是发生在反应的第二步，增加抗原抗体复合物聚集形成多聚体，引起检测结果的假性增高［17］。

2 RF对免疫测定系统的干扰特点

2.1 干扰的发生具有随机性 RF对免疫测定系统的干扰是由RF与检测系统中抗体(主要是IgG)Fc段的非特异性结合引起的，但这种非特异性的结合并不是绝对的。某一个体，RF的干扰没有规律可循。而其中的原因可能与RF自身的特异性和同系的特异性有关，一种RF不能与所有的IgG分子Fc部分的抗原结合，只有当RF抗原的决定簇与IgG分子上Fc段对应的空间结构有互补性时才有可能结合，所以RF与IgG Fc段的结合是随机的，没有结合规律可循。因此，某一标本中的RF是否能够引起检测系统的干扰，事前无法预料到［26］。

2.2 干扰程度与RF浓度的剂量效应不明确 无论高浓度还是低浓度的RF均会对免疫检测引起干扰。尽管某些研究证实高浓度的RF较低浓度的RF更易引起干扰，但干扰发生与RF浓度的量效关系目前尚不明确［24-26］。一方面是由于RF本身有IgM、IgG、IgA、IgD、IgE等多种成分，干扰是由哪种或哪几种成分引起，各种成分的干扰效果等均有待进一步研究;另一方面是由于RF能够自身发生聚集，而形成多聚体;另外，RF可与天然IgG反应，但与凝集IgG及免疫复合物中变性IgG亲和力更强［24］。因此，干扰程度可能与分析物浓度也有一定的相关性(因为这些分析物会与检测系统抗体形成抗原抗体复合物)［26］。

3 干扰的发现和确认

3.1 追溯用于检测干扰抗体的存在 结果追溯是指当化验结果受到质疑(因与临床结果不符或超过极端限制的分析结果)时，在发出报告结果之前，依据完善的机制或程序，追索确认干扰的存在［27］。干扰的可能性应始终考虑，即使在管理最好的实验室，尤其当结果出现与临床表现不符合时，早期的调查始终是可取的［28］。追溯方法有明显的缺点，比如很多检测结果本身病理、生理下会出现大的生物学差异，缺乏充分的临床资料及临床表现的复杂性。因此，利用生理学上不合理的阈值做判断，提醒技术人员所有免疫检测的潜在干扰是不实际的。

3.2 积极的用于确认干扰抗体存在的方法

3.2.1 样本连续稀释法 通过对分析样本进行连续稀释，分析稀释系数与浓度梯度改变的线性关系，是较为简单、可行的用于干扰发现和鉴别的方法［10，29］。例如，有报道，利用稀释法可较好地消除由于异嗜性抗体引起的雅培化学发光检测系统测定血清人绒毛膜促性腺激素的干扰［30］。

3.2.2 加标或加样回收实验 加标或加样回收实验也可鉴定和确认干扰的存在与否［29］。通过向检测样本中加入已知量的分析物，计算回收率，如果回收率在检测系统预定回收率范围内，可排除干扰的存在;如果回收率远高于检测系统正常回收率，提示检测结果偏高，样本检测结果可能存在假性增高;如果回收率远低于检测系统正常回收率，提示检测结果偏低，样本检测结果可能存在假性降低［10］。

3.2.3 使用不同方法学或不同厂商的检测系统复查 使用不同方法学或不同厂商的检测系统复查，寻找与测量的替代方法之间的差异［27，31］。由于RF对检测系统的干扰是偶然的，不同检查系统试剂中使用的抗体有一定的差异，因此同一样本对一种检测系统有干扰，但对另一检测系统干扰不一定存在。所以对于一些样本，尤其是当初次检测结果与临床不符时，可采取更换检测系统的方法复查样本，以发现和确认干扰。

3.3 其他发现鉴别干扰存在的方法 对于在生理、病理、临床上有相关性的项目(如肌酸激酶及其同工酶与肌钙蛋白、乙型肝炎e抗原与乙型肝炎表面抗原等)，比较相关检测项目结果之间的一致性也是发现干扰的方法之一。另一种积极的做法是要求提供相关病史(如风湿病史)。实施这一方法也较为困难，且很可能是无效的，因为在未知干扰发生率、程度及干扰物量效关系等信息时，很难预测干扰发生与否。对所有待检样本进行盲筛也是不可取的。实验室和临床工作人员之间应建立良好的沟通，以最大限度地减少因意料之外的干扰而造成错误检测结果的风险。

4 干扰的处理

4.1 样本前处理 在检测和分析前对样本进行预处理以消除或尽可能降低样本中的RF，以达到消除或降低RF对检测系统的干扰。常用的样本预处理方法包括:分析前在样本中加入动物血清或 IgG［7，19］或加入封闭阻断试剂［32］;用包被IgG 的 固 体 颗 粒 吸 附［10，26］;使 用 阻 断 试 管 采 集 检 测 样本［23，33］;使用聚乙二醇 6000［34］处理样本，这样的选择有一个很好的理由，因为与IgG结合形成复合物而干扰免疫检测的RF主要成分被认为是多克隆IgM型RF，而与聚乙二醇6000沉淀的主要是此类较大的复合物，而对其他小分子单体RF沉淀很少;用蛋白L沉淀［16，35］，但价格较高，使得L蛋白不可能用于临床试验。尽管这些方法在减少或消除RF干扰方面被证实是有效的，且其中一些方法也较为简单实用，但这些预处理方法已被证实并不是对所有RF样本都有效［19，26，36］。

4.2 改进检测系统 利用抗体工程，在免疫测定中截断Fc部分(RF的结合位点)，仅保留Fab段的抗体作为检测试剂，或使用活体的生物素单链是一个较为理想的解决RF干扰的方法［37-39］。但检测系统中，无论是捕获抗体的包被固化，还是信号抗体的标记，多在抗体的Fc段，这样的修改可能增加抗体的包被和标记的难度，在工程上依然有一定的困难，因此，目前市场上也无此类检测系统，但其可能成为今后抗体免疫检测抗干扰研究的方向之一［37］。也有报道，RF不与卵黄抗体反应，如果将捕获抗体或信号抗体(或两者)使用卵黄抗体，能够避免 RF 的干扰［40］。

5 小结

尽管对RF免疫检测干扰的研究有了很大的进步，并提出很多干扰鉴定和解决的方法，但到目前为止还没有一种方法可彻底消除RF的干扰。当出现与临床不符的可疑结果时，检验人员应立即告知实验室负责人，及时与临床联系，寻找干扰原因，运用多种检验技术进行检验，力求得出较为准确的结果。相信随着RF相关干扰的进一步研究及免疫检测技术、抗体工程技术的发展，在不久的将来能彻底解决由此带来的困扰。

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