胃癌组织中SPARC、MMP-9的表达及意义

李杨，吴继锋，赵文娣，张红，秦蓉，王道斌

(1安徽医科大学附属安庆市立医院，安徽安庆246002;2安徽医科大学)

研究发现，富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)可参与组织重建、形态生长、细胞迁移和增殖，从而调节机体的生理和病理过程［1］;其在某些肿瘤中异常表达并可诱导某些基质金属蛋白酶(MMP)的表达［2］。本研究探讨胃癌组织中SPARC、MMP-9在胃癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集1999年3月～2005年5月安徽医科大学第一附属医院诊治的胃癌患者108例，均经手术病理检查证实诊断，男77例、女31例，年龄29～77岁、中位年龄58岁。其中乳头状腺癌14例，管状腺癌33例，低分化腺癌29例，印戒细胞癌19例，黏液腺癌13例;TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期19例，Ⅲ期68例，Ⅳ期12例;分化程度为高分化18例，中分化29例，低分化61例。术前均未接受化疗及放疗。取其手术切除的胃癌组织(观察组)，同时取89例距肿瘤组织＞5 cm的胃黏膜组织(对照组)。

1.2 SPARC、MMP-9表达检测 采用免疫组化SP法。组织标本均经4%甲醛固定，石蜡包埋，切片;常规脱蜡、水化后，枸橼酸缓冲液水浴抗原修复;滴加鼠抗人 SPARC即用型单克隆抗体(浓度为1∶1 200，美国Zymed公司)或兔抗人MMP-9单克隆抗体(即用型，北京中杉生物技术有限公司)，常规免疫组化方法染色。SPARC以人正常皮肤组织为阳性对照，MMP-9以人乳腺癌组织为阳性对照，均以PBS代替一抗作为阴性对照。结果由两名医师独立阅片并评定结果。间质细胞胞质和(或)细胞核出现黄色或黄褐色颗粒为SPARC阳性细胞;癌细胞胞质出现黄色或棕黄色颗粒为MMP-9阳性细胞;无着色或阳性细胞数＜10%为阴性，阳性细胞数≥10%为阳性［3］。分析SPARC、MMP-9表达与胃癌临床病理参数的关系及胃癌组织SPARC与MMP-9表达的关系。

1.3 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件。计数资料比较采用四格表χ2检验、行×列表χ2检验或Wilcoxon秩和检验;相关性分析采用Spearman秩相关法。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组SPARC、MMP-9表达比较 SPARC主要表达于间质细胞，MMP-9主要表达于癌细胞。观察组、对照组 SPARC阳性表达率分别为 88.0%、14.1%(P ＜0.01)，MMP-9 阳性表达率分别为69.4%、19.1%(P ＜0.01)。

2.2 SPARC、MMP-9表达与胃癌临床病理特征的关系 胃癌组织SPARC表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P均＜0.05)，MMP-9与组织学类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P均＜0.05)，二者与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位及远处转移均无关(P均＞0.05)。见表1。

2.3 胃癌组织中SPARC与MMP-9表达的关系胃癌组织中MMP-9与SPARC表达呈正相关(r=0.561，P ＜0.01)。

表1 SPARC、MMP-9表达与胃癌临床病理特征的关系［例(%)］

3 讨论

研究发现，在不同类型肿瘤中SPARC表达的细胞有所不同［4，5］。本研究显示，SPARC 主要表达于间质细胞，少数表达于胃癌细胞，推测可能是间质细胞合成的SPARC被肿瘤细胞内化［6］。SPARC与恶性肿瘤生物学行为密切相关的可能机制:①SPARC直接抑制一些基质蛋白的合成，改变间质的成分和结构;②间接上调基质降解酶类的合成，从而使癌细胞易于突破淋巴管和血管的基底膜而向脉管浸润;③诱导细胞变圆，发挥抗黏附作用，从而增加肿瘤细胞的侵袭能力［7，8］。SPARC 的水解产物——钙离子结合肽能刺激血管生成和细胞生长，外源性SPARC还可以降低血管生成抑制剂的浓度，促进血管生成［9］。本研究结果显示，胃癌间质细胞SPARC的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织，与相关文献一致［10，11］，提示 SPARC 可能参与了胃癌的发生;同时，SPARC表达与淋巴结转移、TNM分期有关，提示其与胃癌的进展有关。研究证实，MMP-9参与多种肿瘤的浸润、转移，可能机制为:①去除侵袭的机械性屏障;②影响细胞间的粘连;③水解蛋白质释放某些生物活性物质;④影响多种生长因子的活性［12］。本研究发现，MMP-9表达与胃癌的组织学类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关，提示MMP-9与胃癌的发生、发展有关，与相关文献结论一致［13］。

肿瘤的浸润、转移涉及复杂的细胞之间以及细胞与间质之间的反应。目前认为间质成分并不是被动的，而是主动地参与肿瘤的生物学行为。SPARC作为细胞外基质成分之一，发挥抗黏附作用，使肿瘤细胞间的黏附特性消失、相互分离，更易于浸润周围组织和远处转移。SPARC能够介导外周血单核细胞表达MMP-1和MMP-9，介导成纤维细胞表达 MMP-1、MMP-3、MMP-9。车轶群等［14］报道，在乳腺癌细胞中SPARC通过上调MT1-MMP进而活化MMP-2。但在SPARC敲除小鼠腹腔内注入卵巢癌细胞后，与野生型小鼠相比可观察到MMP-2和MMP-9上调，人基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)及 TIMP-2下调［15］。本研究也发现胃癌组织SPARC与MMP-9表达呈正相关。因此，我们认为胃癌组织间质细胞分泌的SPARC可能通过上述机制上调肿瘤细胞MMP-9表达，使基底膜及细胞外基质降解而发生浸润、转移。因此，进一步研究SPARC及MMP-9的相互作用及调节机制，可为阐明胃癌实质与间质之间的相互作用提供有力依据，进而为抑制胃癌的浸润和转移提供有效的途径。

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