银杏叶提取物对热应激小鼠Hsp70 表达的影响

黄诗敏

（江苏省海门市悦来镇畜牧兽医服务站226131）

银杏叶提取物对热应激小鼠Hsp70 表达的影响

黄诗敏

（江苏省海门市悦来镇畜牧兽医服务站226131）

银杏叶提取物的主要成分是银杏黄酮和萜类内酯，研究表明银杏叶提取物具有很好的抗应激的作用。热应激是指机体由于外界环境的高温刺激所做的非特异性的生理应答反应的总和。其中热休克蛋白70是热休克蛋白家族中最保守、最重要的一族，它能够使机体迅速适应环境变化，在热应激下发挥保护作用。就EGB761的抗热应激能力开展实验，证明GB761能提高HSP70的表达水平，从而起到保护心脏、肝脏和抗热应激的作用。

银杏叶提取物；热应激；热休克蛋白70

银杏叶作为一种古老的药材已被广泛运用，明代李时珍所著的《本草纲目》中提到“入肺经，益肺气，定喘咳，缩小便”就是对银杏作用的概括[1]。而银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，EGB761）在20世纪50年代开始被研究，因含有黄酮类、内酯类、酚类等多种活性成分而具有非常重要的药用价值。

在畜牧业生产过程中，由高温等因素造成的热应激会对其机体的造成显著的影响，可导致畜群采食量下降、生长速度缓慢、饲料转化率降低，甚至造成死亡，对畜牧经济有很大的影响。

热休克蛋白（Heat Shock Protein，HSP）是经环境的刺激诱导产生的一类蛋白质，指机体由于外界环境的高温刺激所做的非特异性的生理应答反应的总和。HSP有 HSP100，HSP90，HSP70，HSP60以及小分子热休克蛋白（sHSP）这5类，当机体暴露于高温的时候有助于保护机体自身[2]，其中热休克蛋白70（HSP70）在细胞应激后反应最明显。

在正常情况下，HSP70在细胞内表达水平较低，而在热应激或其他应激作用下迅速增加HSP70合成，以提高抗应激能力。正常情况下HSP70位于细胞浆，当细胞遭受应激作用时，HSP70迅速移入细胞核内并包围核仁，胞浆内只有少量表达，而应激消除后细胞处于恢复阶段时，细胞核内的HSP70又返回胞浆，在细胞浆内呈低水平表达，再次应激又重新返回细胞核。通过以上HSP70的特性，我们就可以借助HSP70的表达看出小鼠的抗热应激的能力。

针对银杏叶提取物已被证实对记忆丢失[3]，心肌缺血，慢性肾功能衰竭[4]，冠心病[5]，青光眼[6]，肿瘤[7]等都有显著的效果，又至今为止尚未出现过不良反应，故作为一种药材很有推广的潜力。

本文旨在研究检测小鼠的心脏、肝脏中热休克蛋白如HSP70的表达变化。在饲喂不同浓度银杏叶提取物溶液后，检测HSP70的变化并对比热应激前后HSP70的含量的变化，旨在研究热应激后银杏叶提取物通过HSP70的变化表现出的对应激的保护作用。

1 实验方法

1.1 实验过程

选用100只健康小鼠，公母各半分为5组饲养（C、C1、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），C、C1组灌胃生理盐水，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别灌胃浓度为0.23g/100ml、0.46g/100ml、 0.69g/100ml的 EGB761， 每天每只小鼠灌胃0.2ml，连续灌胃30天后采血、收集脏器进行实验。

1.2 热应激的环境制作

将恒温箱设置到38±1℃，作为热应激的模拟环境，等温度基本稳定时将热应激部分的小鼠放入，观察小鼠状态，热应激状态2小时后取出小鼠，采样。

1.3 心脏、肝脏的采集

为应激过后的小鼠进行眼球采血，收集血样1～2ml，待放血完全后，剖开小鼠腹部取其心脏和肝脏部分，分别用冷冻管保存，并标示对应编号。采的血放入离心管，随即放入离心机以3000rmp离心10min，用移液枪取上层血清，放入血清管标号并冷冻保存，待检验。

2 检测结果

（1）实验数据以平均值±标准误（Mean±S.E）表示；

（2）采用单因子方差（One-Way ANOVA）分析；

（3）所有统计分析均使用SPSS 16.0统计软件（以P＜0.05作为差异显著的标准）；

（4）利用Excel作图。

通过比较3个不同浓度银杏叶提取物组的HSP70表达，不难发现，HSP70表达与银杏叶提取物浓度的变化有关，一定浓度的银杏叶提取物对HSP70的表达有影响，在实验的3个银杏提取物的浓度下，浓度越大，HSP70表达的值就有越大的趋势，表明小鼠抗热应激能力也不断提高。但小鼠心脏HSP70的表达在银杏叶提取物浓度为0.46g/100ml时达到顶峰，故不能说明当银杏叶提取物浓度不断升高时HSP70的表达也不断上升。就此次实验结果看，银杏叶提取物对小鼠热应激的效果明显。

3 讨论

此次实验证实银杏叶提取物能有效的提高HSP70的表达，能很好的起到抗应激的作用，它作为一种新型的药材，毒副作用小，具有很大的发展空间。

附表 各组热应激后小鼠心、肝脏器的HSP70的表达

[1]高华荣.银杏叶提取物的药理作用[J].中国实用医药,2010,5（16）,168-169.

[2]Zulkifli,A.Al-Aqil,A.R.Omar,A.Q.Sazili,and M.A.Rajion Crating and heat stress influence blood parameters and heat shock protein 70 expression in broiler chickens showing short or long tonic immobility reactions[C].2009 Poultry Science Association Inc.Received July 16,2008.

[3]Anna Walesiuk,Emil Trofimiuk,Jan J.Braszko.Ginkgo biloba normalizes stressand corticosterone-induced impairment of recall in rats[J].Pharmacological Research 53（2006）123–128.

[4]张刚,许丽丽,王海芳.银杏叶提取物治疗早期糖尿病肾病疗效观察[J].现代中西医结合杂志,2009,18（20）:2400-2401.

[5]裴德新,周金彩,杨春英.复方银杏口服液治疗冠心病168例疗效观察[J].中国基层医药,2007,14（3）:465.

[6]马科,徐亮.银杏叶提取物与青光眼视神经保护[J].国外医学眼科分册,2005,29（3）:181-183.

[7]赵刚,和水祥.银杏叶提取物的抗肿瘤作用机制研究进展[J].国外医学中医中药分册,2005,27（5）:276-278.