云南省某大学新生中嗜吞噬细胞无形体感染的血清流行病学调查

崔宇晖王艳红宣 群杨志芬何瑞云柳爱华宝福凯▲

1.昆明医科大学热带医学研究所 病原生物学与免疫学系，云南昆明 650500；2.昆明医科大学校医院，云南昆明650500；3.昆明医科大学生物化学与分子生物学系，云南昆明 650500

云南省某大学新生中嗜吞噬细胞无形体感染的血清流行病学调查

崔宇晖1△王艳红1宣 群1杨志芬2何瑞云2柳爱华3▲宝福凯1▲

1.昆明医科大学热带医学研究所 病原生物学与免疫学系，云南昆明 650500；2.昆明医科大学校医院，云南昆明650500；3.昆明医科大学生物化学与分子生物学系，云南昆明 650500

目的 评估云南省某大学新生嗜吞噬细胞无形体的感染情况，间接了解人嗜粒细胞无形体感染在云南省的发生情况。 方法 采集来自云南滇中、滇东北两地区于某大学新生血样标本，用间接荧光免疫法检测Anaplasma phagocytophilum IgG抗体，计算抗体阳性率。 结果 共检测大学新生血清标本45份，检出嗜吞噬细胞无形体血清 IgG抗体阳性7份，其中滇中4份，滇东北3份，阳性率为15.56%。 结论 云南省存在人感染嗜吞噬细胞无形体的情况，滇中地区学生的抗体阳性率与滇东北地区无统计学差异，应进一步加强对人嗜粒细胞无形体病的监测与控制。

嗜吞噬细胞无形体；人嗜粒细胞无形体病；大学新生；云南省

人粒细胞无形体病（HGA）是由嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）感染引起的新发蜱传人兽共患病，主要临床表现包括发热、头痛、疲劳，白细胞、血小板减少，肝酶轻度增高等[1]。本病广泛分布于世界热带和亚热带地区，在南北美洲、非洲、南欧、澳大利亚、中东等地流行，是美国第二大流行的蜱传播疾病[2]。传统认为无形体只感染动物，早在1952年英国科学家Foggie等报道了无形体引起牛、羊感染，经蜱传染的病原体命名为嗜吞噬细胞埃立克体（ehrlichia phagocytophilum）[3]。20世纪90年代后，无形体病流行区扩大，并有人类发病的情况。此时期，第1例人粒细胞无形体病由美国报道[4]。后来发现嗜吞噬细胞无形体对人致病的情况，该病的临床表现无明显特异性，可出现发烧、肌肉痛、头痛、嗜睡、关节痛、白细胞减少以及血液学的异常等。主要传播媒介为蜱虫，在美国以肩突硬蜱和太平洋硬蜱为主；在欧洲和亚洲，以篦子硬蜱和全沟硬蜱为主；我国以全沟硬蜱为主[5]。2006年，我国在安徽省首次发现人嗜吞噬细胞无形体病的病例[3-6]。最近研究显示我国吉林、青海、湖南、甘肃、贵州、河南等8省均有嗜吞噬细胞无形体感染人的情况[7]。2009年边长玲等[8]检测西南地区小型兽类嗜吞噬细胞无形体基因，发现云南香格里拉雪山等林区小型兽类标本无形体检出阳性率为4.44%，证明了当地野生动物携带有无形体。此实验对云南某大学新生中进行了血清流行病学调查，以明确云南地区嗜吞噬细胞无形体感染人类的情况，间接了解人嗜吞噬细胞无形体病在云南省的分布情况。

1 材料与方法

1.1 调查对象

选择云南某大学入学（2008年9月）的本省新生45人，入学体检行外周静脉采集血液样本，分离血清样本于-20℃保存。按地理位置分为滇中、滇东北两组，各组样本数分别为19、26份。滇中地区包括玉溪、昆明、楚雄；滇东北地区包括曲靖和昭通。

1.2 试剂

Focus Technilogies HGA IFA IgG Test Kit购自美国FOCUS公司（Cypress CA USA。REF IF1450G）。

1.3 实验设备

微量移液器（BIOHIT公司）；NW Ultra-pure Water System（Heal Force公司）；SC-316立式冷藏柜（青岛海尔特种电冰柜有限公司）；BC/BD-519HAN卧式冷藏冷冻转换柜（青岛海尔特种电冰柜有限公司）；隔水式电热恒温培养箱（上海市跃进医疗器械一厂）；立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；荧光显微镜NIKON90i（尼康公司）。

1.4 方法

采用间接荧光免疫法，测定检测对象血清中嗜吞噬细胞无形体IgG抗体。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，阴性、阳性对照均设复孔，置于荧光显微镜下观察。

2 结果

2.1 Anaplasm phagocytophi IgG检测结果的判断方法

显微镜的光学系统、光源条件和类型决定了整个荧光强度和端点滴度。按说明书以如下标准读取每个加样孔中桑椹胚的荧光强度和等级见图1。（1）阳性：中度到强度的苹果绿色荧光的桑椹胚。（2）阴性：无荧光或荧光相当于阴性对照的强度。

图1 嗜吞噬细胞无形体IgG抗体间接荧光免疫检测示例

2.2 嗜吞噬细胞无形体IgG检测结果

本次试验共检测45份云南籍新生血清标本，IgG抗体阳性7份，抗体阳性率为15.56%。其中滇中地区阳性4份；滇东北的阳性3份（表1）。

2.3 滇中与滇东北地区阳性率的比较

滇中与滇东北地区某大学入学新生无形体阳性率的比较，用Prism6.0软件做方差分析，差异无统计学意义（P＞0.05）。尚不能认为滇东北地区比滇中地区的发病率高。结果见表1。

表1 云南省部分地区新生嗜吞噬细胞无形体IgG抗体间接荧光免疫检测果及两地阳性率的比较

3 讨论

本实验对嗜吞噬细胞无形体特异性IgG抗体检测，获得滇中、滇东北入学新生IgG血清阳性率分别为16.67%和14.09%。上述感染率略高于天津的农村普通人群感染率8.8%[9]，以及程周祥[10]提出的与死亡病例（首例患者）病后有过密切接触的人员感染率14.3%等。但低于福建北部林区人群感染率17.1%[11]，以及近来报道的新疆和硕、石河子、博乐3个地区人群IgG血清阳性率分别为42.6%、35.2%、56.0%[12]。该病的发生受多种因素的影响，如蜱虫的分布、密度与种群类别，云南是典型的立体气候分布地区，热带、亚热带地区占全省很大比例，植物覆盖率高，利于蜱虫的生长繁殖。目前，普通人群对蜱虫传播疾病缺少了解，防护意识低，对人嗜吞噬细胞无形体病临床表现认识不够，治疗不及时，延长感染窗口期，也会影响嗜吞噬细胞无形体的感染情况。该实验目前仅是一个初步实验，实验标本数量仍有不足，后续实验有待改善。本实验进一步证明云南省存在嗜吞噬细胞埃立克体感染人的情况。关于HGA在云南省的流行特征和疫源地性质，有待进一步研究。

热带虫媒传染病远距离传播的情况越来越常见，一些热带虫媒传染病在东南亚严重流行。云南是典型的立体气候分布地区，热带、亚热带地区占全省很大比例。加之有漫长的国境线，国外传染病容易传入。随着云南改革开放力度加大、桥头堡建设提速，以及面对全球气候变暖，新发和再发热带虫媒传染病有随时暴发的可能[13]。热带虫媒传染病不仅危害人类健康，而且给发展中国家和地区的畜牧业、旅游业造成毁灭性打击，造成极大的经济损失。所以，我们必须重视和加强对新发和再发热带虫媒传染病的预防和控制[14]。

[1] 张丽娟.中国嗜吞噬细胞无形体及无形体病研究进展[J].疾病监测，2014，29（5）：409-414.

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[3] 宝福凯，柳爱华，施明.人类无浆体病的临床表现诊断和治疗研究进展[J].中国热带医学，2009， 9（12）：2322-2324.

[4] Kiewra D，Zaleny G，Czuowska A. The prevalence of Anaplasma phagocytophilum in questing Ixodes ricinus ticks in SW Poland[J].Pol J Microbiol，2014，63（1）：89-93.

[5] 宝福凯，柳爱华，马海滨.人类无浆体病的病原学和流行病学研究[J].热带医学杂志，2008，8（11）：1193-1195.

[6] Zhang L，Liu H，Xu B，et al. Rural residents in China are at increased risk of exposure to tick-borne pathogens Anaplasma phagocytophilum and Ehrlichia chaffeensis[J]. Biomed Res Int，2014，2014：313867.

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[10] 程周祥，杨小祥，李群，等.皖南地区2006年一起人传“粒细胞无形体病”疫情的流行病学特征[J].中华疾病控制杂志，2009，13（1）：4-7.

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[12] 赵焱，刘然，张桂林，等.新疆地区人嗜吞噬细胞无形体病的人群血清流行病学调查[J].寄生虫与医学昆虫学报，2013，20（4）：235-238.

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Serological seroepidemiological investigation of Anaplasma phagocytophilum in newly-enrolled college students in yunnan province

CUI Yuhui1WANG Yanhong1XUAN Qun1YANG Zhifen2HE Ruiyun2LIU Aihua3BAO Fukai1
1.Department of Pathogen Biology and Immunology,the Insitute for Tropical Medicine,Kunming Medical University,Kunming 650500,China; 2.Hospital for Staff and Students, Kunming Medical University, Kunming 650500,China; 3.Department of Biochemistry and Molecular Biology,Kunming Medical University, Kunming 650500,China

Objective To assess the prevalence and characterization of Anaplasma phagocytophilum infection in new college students from two regions of Yunnan province. Methods Serum samples were collected from newlyenrolled college students, The IgG antibody against Anaplasm phagocytophilum in samples was detected with indirect immunofluorescence assay, positive rates were calculated. Results The total 45 newly-enrolled college students from two regions of Yunnan Province were enrolled in this study. The positive rate of A. phagocytophilum IgG was 15.56%. The positive rate of central region of Yunnan was 16.67%. The positive rate of northeast region of Yunnan was 14.09%. Conclusion There are Anaplasma phagocytophilum infection cases in Yunnan province. The positive rate of A. phagocytophilum IgG from two regions was insignificance. The surveillance, prevention and control for Human granulocytic anaplasmosis (HGA) should be strengthened.

Anaplasma phagocytophilum; Human granulocytic anaplasmosis; Newly-enrolled college students; Yunnan province

R978

A

2095-0616（2015）07-214-03

2014-11-27）

国家自然科学基金项目（81060134，81371835）；云南省自然基金项目（2007C069M）。

△昆明医科大学2012级硕士研究生

▲通讯作者