五指毛桃对阿尔茨海默病小鼠学习记忆功能及过氧化损伤的影响

冯劲立，李 想

（1.广东省中山市中医院，广东 中山528400；2.广州中医药大学热带医学研究所，广东 广州210000）

阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）是一种常见于老年人的以进行性认知功能减退为特征的神经系统退行性疾病。 研究发现，其发病与遗传、免疫功能、炎症作用、激素水平的改变、细胞骨架结构改变以及神经递质改变等多因素相关[1]。 由于现有药物对AD 的治疗作用仍不理想，因此寻找新型的AD 治疗药物显得尤为迫切。 五指毛桃是广东地区常用中药,为桑科技物粗叶榕Ficrs hirta 的根，现代研究发现，其具有调节免疫功能[2]、抗炎症反应、抗氧化、抗脑组织缺血性损伤[3]等作用。 本实验利用目前公认的AlCl3造模方式制作阿尔茨海默病小鼠模型， 并以此为研究载体， 研究五指毛桃对阿尔茨海默病的治疗作用以及相关机制。 现将实验结果报道如下。

1 材料

1.1 动物

NIH 小鼠，60 只，雌性，体质量（20±2）g，由广东省医学实验动物中心提供， 许可证号：SCXK （粤）2013-002。 标准环境下饲养： 温度20～25 ℃， 湿度40%～60%，自然光照，标准鼠饲喂食。

1.2 药物及试剂

五指毛桃以蒸馏水煎煮后， 浓缩成浓度为1.8 g/mL 的药液，间歇灭菌后备用。 按照体表面积换算出小鼠所需给药剂量， 以蒸馏水配制成相应浓度使用。 大、 中、 小剂量为分别为36、18、9 g/（kg·d）。AlCl3（分析纯，台山市粤侨试剂塑料有限公司，批号20101101）。 MDA 测定试剂盒 （南京建成， 批号：20140117）。 SOD 测定试剂盒 （南京建成， 批号：20140301）。

1.3 仪器

LW-2Ⅱ型小鼠水迷宫装置（中国医学科学院药物研究所）。

2 方法

2.1 实验分组及给药

NIH 小鼠随机分成5 组，分别为模型组、五指毛桃大、中、小剂量组及空白组，除空白组10 只外的其余各组小鼠均以AlCl3（200 mg/kg） 进行灌胃造模，1次/d，共40 d[4]；空白组以等体积生理盐水灌胃。 造模完成后，五指毛桃大、中、小剂量组小鼠分别以各对应剂量36、18、9 g/（kg·d）五指毛桃水提液进行灌胃，1 mL/次，2 次/d，共20 d；空白组及模型组分别以等体积蒸馏水灌胃。 每组10 只。

2.2 水迷宫测试

水迷宫装置为80 cm×50 cm×20 cm 黑色有机玻璃槽，内设起点、终点(台阶)及4个盲端。 各组小鼠于末次给药后2 h 进行训练，上、下午各进行2 次，每次训练间隔60 s，共3 d，第4 天开始正式测试。正式测试共3 d，1 次/d。 将小鼠面向池壁放入水中，记录2 min 内寻找平台所需时间。若小鼠入水后2 min 内未能找到平台，则将其置于平台上并停留10 s，逃避潜伏期记录为2 min。 到达盲端的则定为错误次数，收集数据后以3 d 平均值进行统计。

2.3 SOD 及MDA 的测定

水迷宫测试结束后， 以断颈法处死小鼠并获取全脑，制备成浓度为10%的脑匀浆。 参照试剂盒说明书方法，测定各组脑匀浆的MDA 及SOD 含量。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 五指毛桃对AD 小鼠记忆功能的影响

与空白组比较， 模型组小鼠的记忆功能均呈显著的下降（P＜0.01）。与模型组小鼠比较，五指毛桃各剂量组小鼠潜伏期缩短，错误次数减少（P＜0.05），其中，五指毛桃中、大剂量组小鼠表现更为明显（P＜0.01）。 结果见表1。

表1 水迷宫实验小鼠潜伏期及错误次数 （±s，n=10）

表1 水迷宫实验小鼠潜伏期及错误次数 （±s，n=10）

注：与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01。

错误次数（次）3.26±1.26 9.82±4.46**7.32±3.16#5.84±3.32##4.51±2.11##组别正常组模型组五指毛桃小剂量组五指毛桃中剂量组五指毛桃大剂量组给药剂量（g/kg）--91 8 36潜伏期（s）14.0±3.36 25.0±4.82**23.0±4.84 20.0±4.36##17.0±3.82##

3.2 五指毛桃对AD 小鼠MDA 及SOD 的影响

与空白组比较， 模型组小鼠的MDA 明显升高，SOD 则明显下降（P＜0.01）。 与模型组比较，五指毛桃各剂量组小鼠MDA 均有所降低， 其中五指毛桃中、大剂量组小鼠表现尤为明显（P＜0.01）；与模型组小鼠比较，五指毛桃中、大剂量组小鼠SOD 均有所升高，大剂量组小鼠表现更明显（P＜0.01）。 结果见表2。

表2 各组小鼠MDA 及SOD 含量的比较 （±s，n=10）

表2 各组小鼠MDA 及SOD 含量的比较 （±s，n=10）

注：与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01。

SOD（U/mL）169.32±5.86 150.46±7.46**152.18±7.12 155.71±5.37#160.28±6.11##组别正常组模型组五指毛桃小剂量组五指毛桃中剂量组五指毛桃大剂量组给药剂量（g/kg）--91 8 36 MDA（nmol/mL）10.02±3.36 19.38±4.43**17.84±6.13#15.71±4.36##13.56±5.05##

4 讨论

随着社会逐渐步入老龄化时代，AD 的发病率逐渐升高，并已悄然成为导致人类死亡的主要疾病之一，严重威胁着老年人的身心健康，影响患者生活质量。 AD 的病因及发病机制至今未完全清楚。 本病多起病于老年期，起病隐匿，呈进行性加重，病理过程复杂。 目前，国内外对于AD的研究主要立足于几个方面，其中“过氧化损伤”备受关注。 现有的研究证实，过氧化损伤是不同病因导致AD 的最终途径[5]，其主要表现为老年斑形成、神经纤维缠结以及神经元缺失3 种特征性病理损害[6-7]。MDA 是自由基作用于脂质发生过氧化反应的最终产物。 而SOD 则是生物体内重要的抗氧化酶，生物体内清除自由基的首要物质。 其具有对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。 二者作为研究药物“抗氧化损伤”的重要指标，已获得医学界公认。

五指毛桃，俗称牛奶木、土黄芪，素有“南芪”之称。现代研究发现，其含补骨脂素、佛手柑内酯、β-谷甾醇、邻苯二甲酸二异丁酯等多种化学活性成分[8-10]。 其中，五指毛桃当中富含的补骨脂素被证实具有类雌激素作用。本实验结果显示， 五指毛桃能有效改善AD 小鼠的记忆功能， 并降低其脑组织中的MDA 含量， 提高SOD活性，从而起到防治AD 的作用。其作用机制可能与其能降低大脑的过氧化损伤有关，有待进一步研究。

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