高原大通牦牛脑中磷脂含量的测定分析

李艳梅（青海省西宁市畜牧兽医站西宁810003）赵美盈（青海省大通县黄家寨镇畜牧兽医站）

高原大通牦牛脑中磷脂含量的测定分析

李艳梅（青海省西宁市畜牧兽医站西宁810003）赵美盈*（青海省大通县黄家寨镇畜牧兽医站）

采用钼蓝比色法测定牦牛脑中磷脂含量，并对提取工艺进行了分析讨论。钼蓝比色法测得牦牛脑组织中磷脂含量为7.49%，用红外光谱(IR)对提取物进行定性，提取物为磷脂。

磷脂测定提取

磷脂是一种含磷的类脂物质，主要集中在动物的大脑、神经系统、免疫系统及心、肝、肾、生殖腺等重要器官内。我国磷脂的研究，始于上世纪六十年代，但多处于初级研究阶段，到本世纪初，食品级、医药级的磷脂才刚刚兴起，目前，磷脂在食品、化妆品、医药等行业中已广泛的应用[1]，对其生物学功能的研究，国内外学者做了大量的工作[2-5]，关于提取与纯化，其报道多限于利用蛋黄和大豆[6-7]。鉴此，笔者以大通牦牛的脑组织为材料，通过工艺进行探索分析讨论，为哺乳动物脑组织的综合开发利用开辟一条可行的途径提供依据。

1　材料与仪器

1.1仪器

751分光光度计、恒温水浴锅、马福炉、BIO-RAD Win-IRFTS-185傅立叶变换红外光谱仪。

1.2试剂

磷脂标准品、钼酸钠、石油醚、乙酸、丙酮、乙醚、氢氧化钾、浓硫酸等(试剂均为分析纯)。

1.3试验材料

试验样品均来自大通县某牛羊屠宰场宰杀后的5头牦牛脑组织5份。

2　试验方法

2.1钼蓝比色法

2.1.1钼酸钠稀硫酸溶液制备量取140ml硫酸加入300ml蒸馏水中，冷却至室温，再加入12.5g钼酸钠，并加蒸馏水至500ml刻度，摇匀，静置24h后备用。

2.1.2磷标准液制备准确称取0.4391g无水磷酸二氢钾，加适量蒸馏水溶解后，移入1000ml容量瓶中并稀释至刻度(含磷0.1mg/ml)，然后再将溶液稀释成含磷为0.01mg/ml的量。

2.1.3样品制备取新鲜牦牛脑放入组织捣碎机中捣碎后，放入索氏提取器中加过量的蒸馏水提取，然后离心，去上清液，待测。

2.1.4制备被测液用坩埚称取牦牛脑约10g。加氧化锌2g，先在电炉上加热炭化，然后放入600℃的马福炉中灼烧至灰分成白色。取出，加入5ml热盐酸(1:1)溶解灰分，并加热微沸5min，将溶解液滤入100ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，并将滤液冷却至室温，用氢氧化钾溶液中和至出现浑浊，慢慢加入盐酸使氧化锌全部溶解后，再滴2滴，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，备用。2.1.5计算公式磷脂含量=P×V2×26.31×100/(V2×m× 1000)×100%。(式中：P为标准曲线查得的磷量(mg)；V2为样品灰化后稀释的体积(ml)；V1为比色时所吸取取的被测液体积(ml)；26.31为每毫克相当于磷脂的质量(mg))。

2.2磷脂的提取

精密称取剔除脑膜及凝血块的牦牛脑浆15.00g，加入60ml石油醚，在45℃的恒温水浴锅中持续加热70min后，离心，取上层清液置于烧杯中，并加入丙酮使磷脂沉淀，再通过离心浓缩、干燥，即得到磷脂。

2.3磷脂的定性分析

用傅立叶变换红外光谱仪测定其图谱。

3　结果

3.1磷脂含量

钼蓝比色法：（1）线性范围的确定：准确吸取磷标准溶液(含磷0.01mg/ml)1.0，2.0，4.0，6.0，8.0ml于50ml比色管中，分别加入蒸馏水至10.0ml，再各加入8.0ml硫酸联氨和2ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞摇匀后，将5只比色管去塞，置于沸腾的水浴中加热10min，冷却至室温，用蒸馏水稀释至50ml，摇匀，静置10min后，用650nm波长的分光光度计进行测定，其吸光值见表1。根据计算得回归方程：y=1.55x+0.0053(r=0.9989)，表明磷在0.01～ 0.05mg/ml范围内与吸光值具有良好的线性关系，见图1。（2）精密度试验：在其范围内，进行5次样品的平行测定，其偏差为RSD=1.5%，证明本试验方法较理想，见表2。（3）样品测定：称取被测样品5份，灼烧，按程序进行测定，结果见表3。

表1　磷标准液浓度与吸光度

图1　磷标准回归曲线

表2　精密度试验

表3　样品测定结果

3.2磷脂成分

红外光谱分析(IR)：取适量提取物粉末，研磨，并用红外光谱仪测定，其图谱见图2。

图2　提取物红外光谱图

表4　磷脂各基团的波数*

由图2和表4可知，提取物为磷脂。

4　讨论

（1）钼蓝比色法的原理是将有机磷转变成无机磷（即以磷酸盐的形式留存在灰粉中），并加入酸溶解，生成磷钼酸钠，在硫酸联氨的作用下被还原成钼蓝。钼蓝颜色的的深浅与磷的含量成正比，将被测液与磷标准液在相同条件下比色定量即可测得磷的含量。笔者所测的是牦牛脑中的磷脂，脑组织中也含有一定量的无机磷酸盐，尽管在前期进行了处理，但不可能完全被去除，所以造成钼蓝比色法的测定结果较高。（2）试验中用钼蓝比色法测得大通牦牛脑组织的磷脂含量为7.49%，并利用红外光谱证明了提取物就是磷脂。中国是世界上的畜牧生产大国，畜产品加工中利用的主要是动物的胴体，而浪费了磷脂含量很高的动物脑组织，本试验为哺乳动物脑组织的综合利用提供文献资料。

[1]石煌.大豆磷脂的性质、应用及美国大豆磷脂产品[J].食品与发酵工业. 1984. 4

[2]Proksch E. Barrioer function regulates epidermal DNA synthesis[J].J Clin Invest,1991,87.

[3]Man M. Fatty acids are required for permeability barrier homeostasis[J].J Clin Invest,1993,92.

[4]Jackson SM. Role of exogenous oxygen in cutaneous barrrepair[J]. Skin Pharmacol.1994,7.

[5]曹宗顺.磷脂的提取与精制[J].中国医药工业杂志,1995,26(1).

[6]李良铸等.生化制药学[M].北京: 中国医药科技出版社,1991,10.

[7]张洪飞等.磺化大豆磷脂的结构和性质研究[J].中国皮革,2004(7): 48-51.

[8]郑朝华,季一兵,陈玉英.分光光度法测定卵磷脂注射液中总卵磷脂的含量[J].海峡药学,2001,13(4):35-37.

S823.8+5

A

1007-1733(2015)10-0003-02

及执笔

（2015–07–09）