牛布鲁氏菌病凝集试验和酶联免疫吸附试验

袁凯　张智瑜　许素秀　赵黎明　徐秀荣（山东省淄博市动物疫病预防与控制中心255000）

刘素玉（山东省淄川区畜牧兽医局）

牛布鲁氏菌病凝集试验和酶联免疫吸附试验

袁凯张智瑜许素秀赵黎明徐秀荣（山东省淄博市动物疫病预防与控制中心255000）

刘素玉（山东省淄川区畜牧兽医局）

本试验用3种检测方法(PBPT、SAT、ELISA)对170份奶牛血清进行检测，结果表明，3种方法的检测阳性率分别为5.29%、100%、14.1%。

牛布鲁氏菌病凝集试验酶联免疫吸附试验

布鲁氏菌病(brucellosis)是由布鲁氏杆菌侵入机体，引起的传染变态反应性人畜共患慢性传染病[1]。近些年来，随着牛肉、奶制品的需求不断增加，导致牛的调运越来越频繁，因此加强牛布病监测，逐步淘汰净化布病阳性牛是预防控制牛布病传播的必不可少的手段之一。牛布病日常检测方法常用虎红平板试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)，但在操作上、敏感性和特异性等方面不太令人满意[2]。笔者用IDEXX公司的牛布鲁氏菌病抗体检测试剂盒与传统的RBPT和SAT进行了比较。具体情况如下：

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1设备酶标仪、恒温箱、试管架、移液器、刻度吸管等。

1.1.2试剂虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原、阴阳性血清由青岛易邦公司提供，牛布鲁氏菌病抗体检测试剂盒由IDEXX公司提供。

1.1.3样本奶牛血清样本为2015年本市春季集中监测的170份样本。

1.2方法

1.2.1虎红平板试验按GB/T 18646-2002方法进行。

1.2.2试管凝集试验按GB/T 18646-2002方法进行。

1.2.3ELSIA方法参照试剂盒说明书。（1）样品加样和孵育：吸取190µl稀释缓冲液加入到酶标板各孔中，在适宜的孔中分别加入未经稀释的阴阳性血清和待检血清各

10µl，覆膜后，18～26℃孵育1h。（2）洗涤：用300µl的洗涤溶液进行洗涤，每个板孔洗涤3次。最后一次洗涤后在吸水材料上拍板吸干。（3）酶标抗体的加入和孵育：每孔中加入100µl酶标抗体，覆膜后，18～26℃孵育30min。（4）洗涤同上。（5）加入TMB底物：每孔加入100µl TMB底物溶液，18～26℃避光孵育20min。（6）终止并读取结果：每孔加入100µl终止液后，测量并记录样品和对照在450nm下的吸光值。（7）结果判断：样品的S/P的百分率小于或等于110%时，为阴性；大于或等于120%时为阳性；两者之间为可疑。

2　结果

170份样本中，RBT方法检测阳性样品9份，对该9份样品用SAT方法进行复核检测，结果9份全为阳性；用ELISA方法进行检测阳性样品24份(其中包括SAT检测阳性的9份)，可疑样品3份(见附表)。

附表　ELISA、RBPT和SAT检测结果

3　讨论

（1）上述试验结果表明SAT试验与ELISA试验相比较，SAT敏感性低于ELISA检测方法，而且前期准备、操作较为繁琐，结果判定上有一定人为因素的影响。（2）三种检测方法的比较：RBPT操作简单，敏感性较高，特异性较低，结果判断上容易受人为因素的影响。SAT操作复杂，敏感性较低，特异性较高，结果判断上容易受人为因素的影响。ELISA操作适中，敏感性较高，特异性有待进一步研究，结果判断较为客观。（3）RBPT检测的9份阳性样品，经SAT和ELISA方法检测也均为阳性，9份阳性样品的三种检测方法复合率为100%，证明了ELISA方法可以替代SAT对RBPT检测阳性的样品进行复核，尤其是检测数量较多时可以大大减少检测时间，并提高结果判断的准确性。因ELISA试验的特异性有待研究，是否可以完全替代SAT方法，还需进一步研究。

[1]王殿滋.兽医传染病学[M].长春: 吉林科学技术出版社,1985, 167-171.

[2]赵智香,康京丽等.OIE标准全乳iELISA与国标全乳环状试验在奶牛布鲁氏菌病检测中的研究[J].中国动物检疫,2007(24): 11.

S858.23

A

1007-1733(2015)10-0008-01

（2015–07–20）