春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌联合毒力及防病效果

苗则彦，赵 杨，李 颖，寇永春，白元俊

(1. 辽宁省农业科学院，辽宁省农作物有害生物控制重点实验室，沈阳 110161；2. 新民市农业技术推广中心，辽宁 110300)



春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌联合毒力及防病效果

苗则彦1，赵 杨1，李 颖1，寇永春2，白元俊1

(1. 辽宁省农业科学院，辽宁省农作物有害生物控制重点实验室，沈阳 110161；2. 新民市农业技术推广中心，辽宁 110300)

通过平板菌落计数法测定了春雷霉素和噻霉酮对引起番茄斑疹病的丁香假单胞杆菌番茄致病变种(Pseudomonassyringaepv.tomato)的毒力及两种药剂混配的联合毒力。结果表明：春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌具有抑制作用，EC50值分别为5.32 μg/mL和2.66 μg/mL；联合毒力的测定结果表明：春雷霉素和噻霉酮质量比1∶1的配比增效作用最强。田间试验结果表明：春雷霉素、噻霉酮及春雷霉素与噻霉酮(1∶1)混剂，田间防治效果均达到80%以上，混剂防治效果显著高于单剂。

番茄斑疹病菌； 杀菌剂； 毒力； 联合毒力

番茄斑疹病[Pseudomonassyringaepv.tomato(Okabe)Young, Dye & Wilkie]又名番茄斑点病，是番茄上发生的一种细菌性病害。主要危害番茄叶片、茎秆和果实，造成产量损失可达5%～75%[1-3]。该病害遍及欧洲、北美洲、澳大利亚、非洲[4]等一些国家。在我国的广西[5]、东北三省[6]、甘肃[7]、新疆[8]、福建[9]等多个地区发生，且有逐年加重、逐步蔓延的趋势。目前使用抗病品种、农业防治、化学防治及无菌种子是该病害防治的主要措施[4]。国外学者关注利用甲基杆菌(Methylobacteriumoryzae)[10]以及植物内生细菌中的短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)和解淀粉芽胞杆菌(B.amyloliquefaciens)[11]进行病害防治研究。

生产实践中化学药剂如波尔多液、代森锰锌、代森锌[12-13]、72%农用链霉素、新植霉素、50%琥胶肥酸酮(DT)、氢氧化铜(77%可杀得)、25%络氨铜、20%噻菌铜[14-16]、中生菌素和春雷霉素[17]等广泛应用于病害防治。春雷霉素是(5-氨基-2-甲基-6-(2，3，4，5，6-羟基环己基氧代)四氢吡喃-3-基)氨基-α-亚氨醋酸，由放线菌(Streptomyceskasugaensis)产生的代谢产物，属农用抗菌素类杀菌剂，具有较强的内吸性，有预防和治疗作用。噻霉酮属于有机杂环类化合物，具有高效、广谱、低毒、绿色环保等优良特性，是防治多种细菌、真菌性病害的杀菌剂。目前尚无噻霉酮和春雷霉素复配防治番茄斑疹病的报道。本研究旨在探讨春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌的联合毒力及防病效果，为杀菌剂科学混配提高防病效果、减少用药量、降低成本和延缓病菌抗药性的产生提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试病原菌

番茄斑疹病菌(Pseudomonassyringaepv.tomato)为从沈阳地区保护地番茄发病叶片和茎秆上分离纯化并已通过生理生化和分子鉴定的菌株[18]。

1.2 供试药剂

76.44%春雷霉素原药：延边春雷药业有限公司提供；用无菌水配制成1%母液备用，梯度质量浓度设计为：4.5、5.0、5.5、6.0、6.5 μg/mL。

84%噻霉酮原药：陕西西大华特科技实业有限公司提供；用丙酮配制成1%母液备用，梯度质量浓度设计为：2.4、2.5、2.6、2.7、2.8 μg/mL。

1.3 供试药剂对病原菌的毒力测定

通过预备试验，选择供试杀菌剂使番茄细菌性斑疹病菌在带药平板上生长菌落数为20～200之间的5个质量浓度。参照游文莉试验方法[19]，用平板菌落计数法测定。将供试细菌菌株在KB培养基上27 ℃培养48 h，刮取菌苔制备细菌悬浮液，测定A600值，对照本实验室测定病原菌浓度-吸光度标准曲线，将菌悬液浓度调为3×107cfu/mL(约150～250 cfu/皿)，将灭菌的50 mL KB培养基热溶化完全，冷却至45 ℃左右，迅速吸取1 mL配制好的细菌悬浮液加入培养基内，再分别加入1 mL不同梯度浓度药剂，充分混合均匀后迅速倒入培养皿中，设置清水CK，即加入1 mL细菌悬浮液和1 mL无菌水于培养基内，4次重复，72 h后调查菌落数量；计算杀菌剂不同质量浓度下病菌菌落的抑制率并转换为抑制率几率值，以供试杀菌剂浓度对数为横坐标，以抑制率几率值为纵坐标，利用DPS数据处理系统3.01专业版求出毒力回归方程、相关系数和EC50值。

1.4 药剂不同配比对病原菌的联合毒力测定

春雷霉素和噻霉酮的质量比为：1∶1、1∶3、1∶5、1∶7和1∶9,每个质量比设5个质量浓度，每个质量浓度接种4皿，接种后置于27 ℃培养箱培养72 h后，计算菌落数量(cfu/mL)和混剂抑菌率，分别求得药剂不同混配比例的毒力回归方程、EC50和相关系数。

并根据Wadley 公式计算SR值，确定不同比例混剂的相互作用。EC50理论值=(a+b)/[(a/ EC50A)+(b/ EC50B)]，R=EC50理论值/ EC50实际值，式中A、B 分别代表春雷霉素和噻霉酮；a、b分别代表春雷霉素和噻霉酮在混剂中含量的比率；以R值代表相互作用程度。当R值≤0. 5 时，表示拮抗作用；当R值≥1.5时，表示增效作用；当R=0.5～1.5时，表示加和作用。

1.5 田间试验

1.5.1 供试药剂

2%春雷霉素水剂：北兴化学工业株式会社提供，施药量为2 632 mL/hm2；1.6%噻霉酮涂抹剂：陕西西大华特科技实业有限公司，施药量为750 g/hm2；春雷霉素和噻霉酮混剂，按照质量比1∶1混配(两个商品制剂按照质量比1∶4.39)混配制剂的施药量为1 095 g/hm2。

1.5.2 试验地概况

试验在辽宁省农业科学院植物保护研究所温室内完成，土壤为壤土，中等肥力。试验期间未使用杀虫剂和其他杀菌剂。

1.5.3 人工接种及药剂处理方法

番茄品种为‘L402’，每个处理30株，4次重复，植株长到4片真叶时进行病原菌喷雾接种。接种时以将叶片正反面喷湿为准，对照喷清水。接种后立即保湿，白天温度控制在25～27 ℃，夜间15～20 ℃，保湿24 h后，进行1次喷施药剂处理，喷药时以将叶片正反面喷湿为准，对照喷清水，15 d后按照如下病害分级标准调查发病情况和计算药剂防病效果。

病情分级标准[20]：0 级，无病斑；1 级，病斑1～10个/ 株；2 级，病斑11～20个/ 株；3 级，病斑21～ 40个/ 株；4 级，病斑多于40个/ 株。

病情指数(DI)=Σ(病级数值×该病级株数)×100/(病级最高值×调查株数);

防病效果(%)=[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100。

2 结果与分析

2.1 两种杀菌剂对靶标病菌生长的抑制作用

结果显示，春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌均有抑制作用，EC50值分别为5.32 μg/mL和2.66μg/mL，番茄斑疹病菌对两种药剂敏感，结果见表1。

表1 春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌室内毒力测定结果

2.2 两种药剂配比对病原菌的联合毒力

由表2可看出，春雷霉素与噻霉酮的5个配比均表现出增效作用，增效系数为1.98～2.38，其中春雷霉素∶噻霉酮(1∶1)表现最优，增效系数达到2.38。

表2 春雷霉素和噻霉酮对番茄斑疹病菌联合毒力测定结果

2.3 不同处理田间试验

田间试验结果表明，春雷霉素、噻霉酮及春雷霉素和噻霉酮(1∶1)混剂，田间防治效果均达到80%以上。在α=0.05和α=0.01水平上春雷霉素和噻霉酮混剂的防效均显著高于春雷霉素和噻霉酮。

表3 不同处理对番茄斑疹病的田间防治效果1)

1) 1,2,3,4表示4次重复。同列数据后不同小写字母和大写字母分别表示0.05水平下和0.01水平下差异显著。

The number 1,2,3,4 represented four replicates. Different lowercase and uppercase letters in the same column indicated significant difference at 0.05 and 0.01 levels, respectively.

3 结论与讨论

室内毒力测定结果表明，春雷霉素和噻霉酮EC50值分别为5.32 μg/mL和2.66 μg/mL，番茄斑疹病菌对两种杀菌剂具有敏感性，可以作为田间防治的理想药剂。春雷霉素、噻霉酮及春雷霉素和噻霉酮混剂田间药效试验显示较好的防病效果，其中混剂防效显著高于两个单剂，建议在田间防治实践中进行示范应用。

春雷霉素属农用抗菌素类杀菌剂，急性经口、经皮毒性低，是绿色食品生产用药，在试验中曾加大春雷霉素使用比例，减少噻霉酮用量，但无增效作用。春雷霉素和噻霉酮质量比(1∶1)在室内外均表现最好，在保证防效的同时，最大限度混用春雷霉素。

另在试验中发现，代森锰锌、新植霉素、50%琥胶肥酸酮(DT)虽在各类文献中被广泛推荐，但这3种药剂对番茄斑疹病菌几乎不抑制。氢氧化铜(77%可杀得)、中生菌素对病菌虽有抑制效果，但已产生一定抗药性，不建议施用。72%农用链霉素无论室内外试验均表现出很好的防治作用，建议与春雷霉素和噻霉酮轮换使用。

任建国2011年研究报道，供试药剂波尔·锰锌(科博)、二氯异氰尿酸钠和新植霉素对病原菌有明显的抑制作用，其EC50值分别为1.109 4、1.116 9和1.074 8 mg/L[21]。采用的试验方法是将滤纸片浸泡在药液中，然后再放到含病原菌的培养基中，通过测定抑菌直径计算EC50值。不同药剂在培养基中的扩散能力可能不同，对试验结果会产生直接影响。如抑菌效果好的春雷霉素，采用这种试验方法对病原菌几乎无抑制作用。对于波尔·锰锌、二氯异氰尿酸钠两种药剂的室内毒力情况，将采用菌落计数法进一步研究。

在辽宁地区该病多为突发性，与种子带菌有直接关系，Bashan研究证实该病害为种子传播[22]，种子处理是防治该病害的关键，关注田间药剂防治的同时，侧重研究处理种子的药剂种类和方法，对番茄斑疹病的防治将起到重要作用。

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Co-toxicity of kasugamycin and benziothiazolinone to Pseudomonassyringaepv.tomatoand its control effect

Miao Zeyan1, Zhao Yang1, Li Ying1, Kou Yongchun2, Bai Yuanjun1

(1.Liaoning Academy of Agricultural Sciences, Liaoning Key Laboratory of Crop Pest Management, Shenyang 110161，China； 2.Agricultural Technology Extension Center of Xinmin, Liaoning 110300，China)

The toxicity and co-toxicity of kasugamycin and benziothiazolinone toPseudomonassyringaepv.tomatowere tested by method of plate colony-counting.The results showed that kasugamycin and benziothiazolinone were inhibitory againstP.syringaepv.tomatowith the EC50values of 5.32 μg/mL and 2.66 μg/mL, respectively. The mixture of kasugamycin and benziothiazolinone with the ratio of 1∶1 had the best synergism. The control effect of kasugamycin, benziothiazolinone and their mixture were all above 80%, and the mixture had significantly higher efficacy.

Pseudomonassyringaepv.tomato; fungicide; toxicity; combined toxicity

2014-03-13

2014-09-18

辽宁省沈阳市农业科技共建项目(2013019)

S 482.2

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.042

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