白芨无菌播种快繁体系的建立

朱虹娴，马美兰，戚正华，张悦凯

(东阳市农业科学研究所,浙江东阳 322100)

白芨无菌播种快繁体系的建立

朱虹娴，马美兰，戚正华，张悦凯

(东阳市农业科学研究所,浙江东阳 322100)

通过试验筛选出白芨种子萌发、丛生芽增殖、壮苗生根3个阶段的最佳配方,建立起一套白芨无菌播种快繁体系。结果表明,白芨种子萌发的最佳培养基配方为MS+1.0 mg·L-1NAA+8%土豆+2%蔗糖+ 0.6%琼脂;当添加NAA的浓度为0.5 mg·L-1,6-BA的浓度为2.0 mg·L-1时,白芨丛生芽增殖率达到最高;白芨壮苗生根的适宜培养基为MS+0.5 mg·L-1IBA+0.5 mg·L-1NAA+8%香蕉+2%蔗糖+0.6%琼脂+ 0.5 g·L-1活性炭。

白芨;无菌播种;配方筛选;快繁体系

文献著录格式:朱虹娴,马美兰,戚正华,等.白芨无菌播种快繁体系的建立[J].浙江农业科学,2015,56(9):1409-1410,1523.

DOI 10.16178/j.issn.0528-9017.20150917

白芨(Bletilla striata)又名连及草、甘根、白给、箬兰、紫兰、百笠,是兰科白芨属多年生球根草本植物。花色一般为紫红色,花期4-5月,观赏价值较高。作为中草药具有收敛止血、消肿生肌的功效。随着对白芨功效研究的深入,近年来市场需求量大增,价格也逐年攀升。由于长期无限制地人工采挖,野生白芨资源枯竭,一般采用分割假鳞茎的方式进行繁殖,1个假鳞茎1年仅能形成1～5个新假鳞茎[1],生产效率低,经济效益不佳。经测验,白芨蒴果内含种子数万粒,但自然条件下极难萌发和生长,实生苗的栽培也较为困难[2-3],采用无菌播种则能获得较高的萌发率,可有效促进规模化生产白芨种苗。本试验通过筛选白芨种子萌发、丛生芽增殖及壮苗生根的最佳培养基,建立一套白芨无菌播种快繁体系。

1 材料与方法

1.1 材料

试验采用东阳本地种植户采集提供的白芨成熟蒴果。

试验所需试剂有大量元素,微量元素,有机物,铁盐溶液,75%酒精,升汞,无菌水,蔗糖,琼脂,活性炭,苄基腺嘌呤(6-BA),萘乙酸(NAA),吲哚丁酸(IBA),pH试纸。添加物有土豆,香蕉。

1.2 方法

将成熟未裂开的蒴果先用75%的酒精表面消毒30 s,再用0.1%的升汞消毒10 min,无菌水冲洗5～6次,用无菌滤纸吸干表面水分[4]。置于培养皿中备用。

各种培养基中都添加20 g·L-1蔗糖,6 g·L-1琼脂,调节pH值为5.8～6.0。

种子萌发培养基筛选。以MS为基本培养基,在添加40或80 g·L-1土豆的基础上,再分别加0.0,0.5,1.0 mg·L-1NAA共6个配方。将准备好的成熟种子切开均匀撒在添加不同植物激素的6种培养基上,每个配方10瓶。先放在培养箱进行暗培养7 d,培养温度(25±2)℃,再移至培养室,培养温度(25±2)℃,光照强度2 000～2 500 lx,光照12 h·d-1[4],环境湿度60%～80%。培养10 d后统计发芽情况。

丛生芽增殖培养基筛选。基本培养基配方为MS+0.5 g·L-1活性炭+0.5 mg·L-1NAA,分别加0.5,1.0,1.5,2.0 mg·L-16-BA,以不加激素的作对照(CK)。种子萌发后将培养高1～2 cm的白芨小苗接种于试验培养基中,每个配方重复10次,每瓶接种8个点,培养条件为温度(25± 2)℃,光照强度2 000～2 500 lx,时间12 h·d-1,环境湿度60%～80%。培养30 d,观察增殖情况。

壮苗生根培养基筛选。共设置3组试验:在MS+0.5 g·L-1活性炭+8%香蕉的基础上,添加0.5,1.0 mg·L-1NAA;在MS+0.5 g·L-1活性炭+8%香蕉+0.5 mg·L-1IBA的基础上,添加0,0.5,1.0 mg·L-1NAA;在MS+0.5 g·L-1活性炭+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA的基础上,分别添加0,40,80 g·L-1的香蕉。取由增值培养所得2～3 cm高的种苗,弃去黄化和发育不良的个体,接种于试验培养基中。每个配方重复10次,每瓶接种8个点。在室温为(25±2)℃,环境湿度60%～80%,光照强度2 500～3 600 lx,光照12 h·d-1的条件下进行培养。30 d后进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 种子萌发培养基

表1表明,以MS为基本培养基,不添加NAA的白芨种子萌发状态不佳;随着NAA浓度的增大,萌发时间缩短,NAA添加量为1.0 mg·L-1时,萌发数量最多,时间最短。另外,添加土豆的配方,萌发的芽都可以转绿,土豆添加量80 g·L-1优于40 g·L-1,种子萌发快、芽较绿。结果显示,MS +1.0 mg·L-1NAA+80 g·L-1土豆的培养基利于白芨种子萌发。

2.2 丛生芽增殖培养基

表2表明,直接在MS培养基上培养的白芨小苗增殖不明显;添加6-BA配合一定量的NAA有利于小苗的增殖;当6-BA 2.0 mg·L-1和NAA 0.5 mg·L-1配比时白芨小苗增殖最佳。结果显示, MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 g· L-1活性炭的培养基利于白芨小苗增值。

表1 白芨种子在不同基本培养基上的萌发表现

表2 白芨小苗在不同培养基上的增殖表现

2.3 壮苗生根培养基

表3表明,不添加任何植物激素时,白芨苗长势最弱;当添加IBA 0.5 mg·L-1和NAA 0.5 mg· L-1时,生根时间最短,且苗长势粗壮,块根膨大最明显。香蕉的量对白芨生根状况有影响,当添加80 g·L-1的香蕉时,白芨生根情况最好。结果显示,MS+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+ 80 g·L-1香蕉+0.5 g·L-1活性炭的培养基利于白芨壮苗生根。

表3 白芨苗在不同培养基上壮苗生根的表现

3 小结与讨论

试验建立了一套从白芨蒴果无菌播种到壮苗生根的快繁体系。种子萌发培养基以MS+1.0 mg· L-1NAA+8%土豆+2%蔗糖+0.6%琼脂为最佳,有利于种子萌发转绿长成小苗,张燕等[5-6]认为土豆对白芨种子的萌发效果最佳,本试验也证明了这点;丛生芽增殖率最高的配方为MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 g·L-1活性炭+2%蔗糖+0.6%琼脂,增殖的白芨小苗叶绿、长势好;壮苗生根以MS+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+80 g·L-1香蕉+0.5 g·L-1活性炭+2%蔗糖+0.6%琼脂为好,能够培养出块根膨大、苗壮根多的白芨优质苗。

[1] 和寿星,徐中志,薛润光,等.白芨无菌播种育苗技术[J].云南农业科技,2010(6):38-39.

[2] 张亦诚.白芨的生物特性及栽培技术[J].中药材,2007 (10):45.

[3] 韩学俭.白芨药用及其栽培技术[J].农村经济与科技, 2004,15(10):31-32.

[4] 叶静,郑晓君,管常东,等.白芨的无菌萌发与组织培养[J].云南大学学报:自然科学版,2010,32(增刊1): 422-425.

[5] 袁宁,何俊蓉,何锐,等.白芨组培快繁育苗技术研究[J].西南农业学报,2009,22(3):781-785.

[6] 张燕,黎斌,李思锋.不同培养基上白芨的种子萌发与幼苗形态发生[J].西北植物学报,2009,29(8): 1584-1589.

(责任编辑：张才德)

S 567

A

0528-9017(2015)09-1409-02

2015-06-15

东阳市科技局(14-206)

朱虹娴(1990-),女,助理农艺师,主要从事植物组培技术研究工作。E-mail:739540610@qq.com。