UHPLC法测定香附子中活性成分cyperusphenol A含量*

邓仕任，朱夏敏，王春娇，夏林波，朱江

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600）

分析测试

UHPLC法测定香附子中活性成分cyperusphenol A含量*

邓仕任，朱夏敏，王春娇，夏林波*，朱江

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600）

目的：建立高效液相色谱测定香附子药材中cyperusphenolA含量的方法，为香附子的合理质量控制提供依据。方法：采用Poroshell 120 EC-C18色谱柱（3.0×150mm，1.8μm），流动相乙腈-水（25∶75，V∶V），检测波长280nm。结果：Cyperusphenol A在0.848～8.48μg·mL-1范围内线性关系良好，r=0.9999（n=6），加样回收率99.3%，RSD=1.01%（n=6）；6批香附子药材中cyperusphenol A的含量为3.85～9.94μg·g-1。结论：cyperusphenol A为香附子药材中的特征活性成分，所建立的含测方法操作简便，结果可靠，可作为香附子药材质量控制的指标性成分。

香附子；cyperusphenol A；UHPLC；含量测定

香附子为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎，具有行气解郁，调经止痛的功效，常用于肝郁气滞，胸胁胀痛，经闭痛经等症[1,2]，为中医临床常用中药。其主要成分有挥发油类、黄酮类、糖类、生物碱类、酚类和萜类等[3]。目前，对香附成分及药理活性的研究主要偏重于其挥发油中的倍半萜类小极性成分[4]，最新研究表明，香附中还含有一类二苯乙烯低聚物[5,6]，该类化合物具有较好的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等药理活性，被认为是香附子中的另一类活性物质，cyperusphenol A（一种二苯乙烯三聚体）即为其中的代表性成分。目前，国内外尚未见香附子中cyperusphenol A含量测定的相关报道。本实验拟以cyperusphenol A为指标成分，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，建立了香附子药材中cyperusphenol A的UHPLC分析方法，相对于常规HPLC分析方法而言，该方法具有分离度高、分析时间短、节约溶剂等诸多优点[7]，可为香附子药材的质量控制提供相关依据。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

Agilent 1290 Infinity高效液相色谱仪（美国安捷伦）；METTLERAE 240型十万分之一分析天（瑞士METTLER）；FA1004B电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；KQ-250DB型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。Cyperusphenol A对照品为本实验室自行制备，经检测纯度大于98%（峰面积归一化法）。甲醇，分析纯；乙腈，色谱纯（天津市大茂化学试剂厂）；水为娃哈哈纯净水。香附子购自河北安国药材市场，经辽宁中医药大学中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎。

1.2 色谱条件

安捷伦Poroshell 120 EC-C18色谱柱（3.0× 150mm，1.8μm）；流动相乙腈-水（25∶75，V∶V）；流速0.4 mL·min-1；检测波长280nm；柱温50℃。

1.3 对照品溶液制备及线性关系考察

取cyperusphenol A对照品4.24mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，得浓度为42.4μg·mL-1的对照品储备液。将该储备液用甲醇逐级稀释，配成浓度分别为0.848、2.54、4.24、5.94、7.63、8.48μg·mL-1的系列对照品溶液。将上述对照品溶液依次注入液相色谱仪，进样量为3μL。以峰面积为纵坐标，绝对进样量（μg）为横坐标，得回归方程为y=3.78×104χ+43.1，cyperusphenolA在0.848～8.48μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9995，n=6）。

1.4 供试品溶液的制备

取香附子粉末（过40目筛）约3.0g，精密称定，置于锥形瓶中，加入100mL甲醇浸泡过夜，超声提取3次，每次30min，过滤合并提取液，减压浓缩至干后，以甲醇溶解后转入10mL容量瓶中，定容至刻度，测定前置于4℃保存备用，进样分析前经0.22μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

2 结果与讨论

2.1 精密度实验

精密称取同一香附子药材按1.4项下方法制成供试品溶液，连续进样6次，测得保留时间RSD= 0.56%，峰面积RSD=1.33%，表明仪器精密度良好。

2.2 稳定性

精密称取同一香附子药材按1.4项下方法制成供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h测定峰面积。平均峰面积为233.1，RSD=1.10%（n=6）。表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.3 重复性试验

精密称取同一香附子药材6份，按1.4项下方法制成供试品溶液，测得样品中cyperusphenol A含量的平均值为5.59μg·g-1，RSD=1.78%，证明本方法重复性良好。

2.4 加样回收率试验

取已知cyperusphenol A含量（5.59μg·g-1）的药材9份，每份约3g，精密称量，3份为一组，置具塞锥形瓶中，每组精密加入低、中、高浓度cyperusphenol A对照品贮备液，按2.3项下方法制备供试品溶液，结果平均加样回收率99.1%，RSD=2.13%（n= 9）。

2.5 样品含量的测定

分别取不同产地的香附子药材约3 g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，其色谱峰见图1，记录下峰面积，代入标准曲线，计算出样品中含有cyperusphenol A的含量，结果见表1。

图1 香附子药材HPLC图Fig.1 HPLC of cyperus rotundosl

表1 香附子药材中cyperusphenol A含量测定结果Tab.1 Determination results of cyperusphenol A in cyperus rotundos L.

3 结论

（1）香附子为莎草科植物莎草的根茎，由于莎草之根相附连续而生，可以合香，所以称为“香附子”。香附分布很广，历史上曾以广东的三水、横江为最，而今主产鲁与浙，山东产者称东香附，浙江产者称南香附，品质均佳，其特点是个大，色棕褐，质坚实，香气浓。香附具有行气解郁，调经止痛的功效，明代李时珍《本草纲目》称香附“乃气病之总司，女科之主帅也。”

（2）香附中的化学成分主要有挥发油、糖类、生物碱、黄酮和多酚类。目前，对香附的成分及药理活性的研究大多集中在其挥发油中的单萜、倍半萜等化合物上，而挥发油成分也被认为与香附的镇痛、抗炎、解热作用相关。然而，近期日本学者从香附中分离鉴定出一系列二苯乙烯三聚体和二聚体化合物，该类化合物骨架由白藜芦醇和白皮杉醇聚合而成。该类化合物具有较好的抗自由基、抗肿瘤和抗炎等药理活性，因而也被认为是香附的活性成分之一，其代表性特征成分即为cyperusphenol A，具有较高的研究价值。

（3）本文首次采取UHPLC法，对6批不同产地的香附子药材中的cyperusphenol A进行了含量测定，结果分布在3.85～9.94μg·g-1范围内。检测结果表明，不同产地的香附子中cyperusphenol A的含量有所差异，其中山东、浙江产药材的含量较高，这也说明道地药材的质量的确较优。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：化学工业出版社，2010，241.

［2］李英霞，侯立静，严军，等.近5年国内外香附化学成分及药理作用研究新进展［J］.现代中药研究与实践，2013，（2）：80-83.

［3］黄险峰，彭国平.香附的化学成分及药理研究进展［J］.中药材，2003，26：65-68.

［4］解宇环，沈映君，纪广亮，等.香附、藿香挥发油抗炎、镇痛、解热作用的实验研究［J］.四川生理科学杂志，2005，（3）：132-135.

［5］Ito T,Endo H,Oyama M,et al.Novel isolation of stilbenoids with enantiomeric and meso forms from a cyperus rhizome［J］.PhytochemistryLetters,2012,5（2）:267-270.

［6］Ito T,Endo H,Shinohara H,et al.Occurrence of stilbene oligomers in Cyperus rhizomes.［J］.Fitoterapia,2012,83（8）:1420-9.

［7］FeketeS,SchapplerJ,VeutheyJL,et al.Currentandfuturetrendsin UHPLC［J］.TracTrendsinAnalyticalChemistry,2014,63:2-13.

Determination of cyperusphenol A in fruit of Cyperus rotundus L.from different originby

UHPLC method*
DENG Shi-ren，ZHU Xia-min，WANG Chen-jiao，XIA Lin-bo*，ZHU Jiang

（College of Medicine,Liaoning Uniuer sity of Traditional Chinese Medicine，Dahan 116600,China）

Objective:An HPLC method for determination of cyperusphenol A in fruit of Cyperus rotundus L. was developed,to provide a quality control method for Cyperus rotundus L.Methods:The chromatography was carried out on a Poroshell 120 EC-C18column（3.0×150mm，1.8μm）with acetonitrile-water（25∶75,V∶V）as the mobile phase,the detection wavelength was set at 280 nm.Results:Cyperusphenol A could be successfully determined and the linear rang was 0.848～8.48μg·mL-1（r=0.9995）.The average recoveries（n=6）of the cyperusphenol A was 99.3%，RSD=1.01%.The content of cyperusphenol A in 6 batches was 3.85～9.94μg·g-1.Conclusion:Cyperusphenol A was the specific ingredient in fruit of Cyperus rotundus L.The method is accurate,reliable and sensitive for quality control of fruit of Cyperus rotundus L.

cyperus rotundus L.；cyperusphenol A；UHPLC；determination

O657.7

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20151223

2015-09-09

国家自然科学基金项目（81202857）；辽宁省高等学校优秀人才支持计划（LJQ2015070）；2014年辽宁省大学生创新创业训练计划项目（201410162055）

邓仕任（1979-），男，博士，副教授，研究方向为中药药效物质基础研究。

夏林波（1977-），女，博士，副教授。