利奈唑胺含量测定方法的选择

蒋萍萍，张华玲

（杭州华东医药集团生物工程研究所，浙江杭州310011）

分析测试

利奈唑胺含量测定方法的选择

蒋萍萍，张华玲

（杭州华东医药集团生物工程研究所，浙江杭州310011）

［目的］建立测定利奈唑胺的高效液相色谱方法。［方法］采用YMC ODS-AM（150×4.6 mm粒径5 μm）为色谱柱；流动相：0.1%三氟乙酸的水溶液：0.1%三氟乙酸的乙腈溶液=90：10梯度洗脱，柱温：25℃，流速：1 mL/min，检测波长：254 nm。［结果］本方法专属性强，操作方便，结果准确，可用于测定利奈唑胺的含量。

高效液相色谱法；利奈唑胺；YMC ODS-AM；含量测定

利奈唑胺是一种人工合成的唑烷酮类抗生素，为细菌蛋白质合成抑制剂。于2000年获得美国FDA批准，用于治疗革兰阳性（G+）球菌引起的感染。随后在澳大利亚、加拿大、英、法、韩、香港、日本等19个国家和地区上市；2006年9月在中国取得进口药品注册证；于2007年9月在中国上市。本品独特的作用机制，与其它类型的抗菌药无交叉耐药性，同时具有口服生物利用度高、药动学性质好及毒性小的特点，在治疗革兰阳性耐药菌引起的严重感染方面显示出较大的潜力。

利奈唑胺化学结构式

本文优化了在YMC ODS-AM反向色谱柱上分离利奈唑胺的质量检测条件。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260高效液相色谱输液泵，1260DAD型紫外检测器。

已腈（色谱纯ACS）、三氟乙酸、三乙胺（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、磷酸二氢钾（分析纯，湖州胡试化学试剂有限公司）。

1.2 色谱条件

色谱柱：YMC ODS-AM 150×4.6 mm 5 μm色谱柱；流动相：V（0.1%三氟乙酸的水溶液）：V（0.1%三氟乙酸的乙腈溶液）=90：10梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长：254 nm；柱温：25℃；进样量：10 μL。

1.3 不同因素对利奈唑胺检测结果的影响

1.3.1 色谱柱的选择

参照进口注册标准系统进行色谱柱的筛选，150×4.6 mm柱子流速为1.0 mL/min，250×4.6 mm柱子流速相应调整为1.67 mL/min，结果见表1。色谱图见附图1。

表1 色谱柱的选择

图1 不同色谱柱选择的HPLC图

从以上试验可见，使用YMC ODS-AM 150× 4.6 mm 5 μm色谱柱，主峰峰型最好，与杂质分离度最高，理论塔板数最高。故选择YMC ODS-AM 150×4.6 mm 5μm色谱柱。

1.3.2 流动相的选择

1.3.2.1 缓冲盐的选择

在初期选用的YMC ODS-AM 150×4.6 mm 5 μm的基础上，取粗品适量，用乙腈-水（1：9）稀释制成浓度约0.5 mg/mL的供试品，再加入专属性项下酸、碱、氧化降解后的样品适量，作为供试品，对流动相进行选择。结果见表2。

表2 缓冲盐的选择

图2 不同缓冲盐选择的HPLC图

从以上试验可见：流动相2对利奈唑胺的一种降解产物未起到保留作用，流动相3使降解产物的峰型变差，流动相4空白干扰严重。流动相1对各峰都有较为合适的保留能力，峰型较好，基线波动小，更利于杂质的检出。所以最终参考进口注册标准，选择流动相1，色谱图见附图2。

1.3.2.2 梯度时间选择

在其余色谱条件均一致的情况下，取粗品适量，用乙腈-水（1：9）稀释制成浓度约0.5 mg/mL的供试品，调试不同梯度洗脱速度，方法1参考进口注册标准（测定仪器延迟体积为1.1 mL），方法2、3、4为自调方法，结果见表3。色谱图见附图3。

表3 梯度时间的选择

图3 不同梯度时间选择的HPLC图

从以上结果看出，方法4整个梯度时间较长，且各杂质间相邻太近，故首先排除。方法1、2、3无论是对出峰时间、峰型、分离度、杂质检出个数都未见明显差别，说明梯度程序的略微变化对杂质的检出没有明显区别，故无需采用测量延时体积的方法，排除方法1。方法2因为在35 min从梯度洗脱变为等度洗脱，所以可能比方法3产生更多的空白峰，且方法3的洗脱能力比方法2更强，更有利于杂质的检测。故方法3为优选方法。因为在相对保留时间1.73的杂质之后就未见有其他杂质检出，且90%的乙腈2洗脱能力已经足够强，所以最终梯度程序调整为：

时间A%B% 0 9010 208020 401090

1.3.2.3 溶剂的选择

分别选择水、乙腈、水-乙腈（1：1）、水-乙腈（9：1）作为溶剂，按有关物质项下方法进样，结果见表4。色谱图见附图4。

表4 溶剂的选择

图4 不同溶剂选择的HPLC图

结果表明，用水作为溶剂时利奈唑胺溶解稍慢，乙腈作为溶剂时溶剂效应明显，水-乙腈（1：1）作为溶剂时2 min处有溶剂峰，而水-乙腈（9：1）作为溶剂时以上问题都不存在，峰型较好，故选择作为溶剂。

1.3.2.4 柱温的选择

分别以柱温T=20℃、25℃、30℃、35℃、40℃试验，结果见表5，结果表明温度越高对称因子反而越低，且高温对色谱柱寿命有影响，故选择柱温为25℃。

表5 柱温的选择

1.3.2.5 流速的选择

在其他相同的条件下，分别以流速V=0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 mL/min试验，结果见表6，结果表明：适当增加流速可加快出峰时间，但柱效有所降低，故仍选择常规流速1.0 mL/min作为测定流速。

表6 流速的选择

2 结果与讨论

综上所述，最佳的色谱条件为：色谱柱：YMC ODS-AM 150×4.6mm 5μm色谱柱；流动相：V（0.1%三氟乙酸的水溶液）：V（0.1%三氟乙酸的乙腈溶液）=90：10梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长：254 nm；柱温：25℃。

3 方法评价

在最终优化的色谱条件下，对同一样品重复测定5次。取利奈唑胺对照品适量，用乙腈-水（1：9）溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的对照品溶液两份，各取10 μL注入液相色谱仪，一份重复进样3次，一份重复进样2次，五针样品主峰峰面积与浓度的比值的相对标准偏差不大于2.0%，理论板数按利奈唑胺峰计算应不低于5000。

精密称取利奈唑胺对照品适量，加乙腈-水（1：9）溶解并稀释制成每1 mL中含0.5 mg溶液，精密量取上述溶液用乙腈-水（1：9）稀释制成0.17、0.5、2.5、5.0、7.5、10.0 μg/mL的溶液，分别精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为x轴，峰面积为y轴，进行线性回归，见表6和图6。

图6 利奈唑胺的线性

表6 线性回归结果

结果表明，利奈唑胺在0.17～10.06 μg/mL浓度范围内（相对浓度0.03%～2.0%）与峰面积线性良好。

在本方法条件下测定利奈唑胺化学纯度，可得到稳定可靠的数据，并可在生产过程中对其进行精确的质量控制。

［1］毛桂福.HPLC法测定水杨酸苯酚洗剂中苯酚和水杨酸的含量［J］.药学实践杂志，2005，（4）：226-227.

［2］刘晓云，公方美.HPLC法测定阿奇霉素分散片的含量［J］.齐鲁药事，2005，（11）：668-669.

［3］许妍，周国平，罗跃华，等.HPLC法测定高效风油精中盐酸达克罗宁含量［J］.中国药品标准，2005，（2）：15-16.

Selectivity of Linezolid's Determination Method

JIANG Ping-ping,ZHANG Hua-ling
（Hangzhou Huadong Medicine Group Pharmaceutical Research Institute Co.，Ltd.，Hangzhou，Zhejiang 310011，China）

［Objective］To establish a HPLC method for the determination of linezolid.［Methods］The separation was performed on YMC ODS-AM（150×4.6 mm，5 μm）column，the mobile phase consisted of water-acetonitrile（10∶90）with the flow rate of 1 mL/min，the detection wavelength was at 254 nm and column temperature was 25℃.［Results］The method is simple，quick and specific.

HPLC;linezolid;YMC ODS-AM;determination

1006-4184（2015）7-0045-06

2015-03-17

蒋萍萍（1986-），女，浙江绍兴人，助理工程师，理学学士，本科，从事药物分析工作。E-mail:sxjiangpingping@163.com。