结外NK/T细胞淋巴瘤检测EB病毒与疗效关系的研究*

2015-11-23刘文硕南飞飞贾思思李素彩张明智张蕾

中国肿瘤临床 2015年2期

刘文硕南飞飞贾思思李素彩张明智张蕾

·临床研究与应用·

刘文硕南飞飞贾思思李素彩张明智张蕾

目的：探讨血浆中EB病毒阳性在评价结外NK/T细胞淋巴瘤近期疗效和远期疗效中的临床意义。方法：收集2011年1月至2014年4月郑州大学第一附属医院经病理及免疫组化确诊为结外NK/T细胞淋巴瘤的患者109例，应用qRT-PCR方法检测其血浆中EBV-DNA拷贝数，比较EBV阴性和EBV阳性患者对治疗疗效与预后的差异。结果：109例结外NK/T细胞淋巴瘤患者，53例阳性患者中有34例（64.2%）为晚期（Ⅲ～Ⅳ期），56例阴性患者中22例（39.3%）为晚期（Ⅲ～Ⅳ期），EBV阳性组中伴有B症状33例（62.3%），阴性组患者21例（37.5%），EBV阴性患者与EBV阳性患者在分期及B症状方面均具有统计学意义（P＜0.05）。34例（60.7%）EBV阴性结外NK/T细胞淋巴瘤患者达到客观缓解率，显著高于EBV阳性患者的客观缓解率（22例，41.5%）（P＜0.05）。EBV阴性组与EBV阳性组相比，其2年无进展生存期更高（P＜0.05）。结论：检测结外NK/T细胞淋巴瘤患者血浆中EB病毒对评价其近期疗效及2年无进展生存期具有重要的临床意义。

结外NK/T细胞淋巴瘤 qRT-PCR方法 EB病毒无进展生存期

结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（extranodal NK/ T-cell lymphoma，nasaltype）是非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphoma，NHL）的一种少见类型，约占非霍奇金淋巴瘤的2%～10%。其发病具有地域性，多见于亚洲和南美，中国、韩国、日本、墨西哥、秘鲁等国家发病率高，约占总发病例数的70%，而北美、欧洲发病率低，约占总发病数的21%［1-3］。多数患者原发于鼻腔和咽喉部以上部位，少数病例原发于鼻外，如皮肤、胃肠道、肺等，无明显鼻腔受累［4-5］。其病理表现独特，具有以血管为中心的多形性淋巴细胞浸润、瘤细胞浸润破坏血管继而引起坏死等特点［6］，多数病例与EB病毒感染有关［7-9］。近来国内外部分

研究表明，结外NK/T细胞淋巴瘤的发病与EBV-DNA拷贝数相关［10-11］，但有关EBV-DNA拷贝数与结外NK/T细胞淋巴瘤疗效及预后的相关研究甚少，且病例数较少。本研究通过检测结外NK/T细胞淋巴瘤患者血浆中EBV-DNA拷贝数，探讨不同EBV-DNA拷贝数对评价其疗效及预后的临床意义。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1一般资料收集2011年1月至2014年4月郑州大学第一附属医院经病理确诊为结外NK/T细胞淋巴瘤患者109例。其中男性68例，女性41例，中位年龄为40岁，Ann Arbor分期早期（Ⅰ+Ⅱ）53例，晚期（Ⅲ+Ⅳ）56例，β2微球蛋白正常者72例，升高者37例，乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）正常者84例，升高者25例，无B症状者（发热、体重减轻、盗汗）55例，有B症状者（发热、体重减轻、盗汗）54例。1.1.2试剂与仪器EB病毒核酸扩增（PCT）荧光定量检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司；酶标仪（Thermo公司，Multiskon，Mk3），核酸提取仪（罗氏MagNA Pure LC 2.0），PCR仪（ABI Prism 7500）。

1.2方法

1.2.1检测方法抽取结外NK/T细胞淋巴瘤患者外周血2 mL于EDTA抗凝管中，3 500 r/min离心5 min，分离其上层血浆，提取50 μL血浆与50 μL DNA提取液（试剂盒内提供）混匀，浸入100℃金属浴10 min，12 000 r/min离心分离上清液，取2 μL上清液与样本行PCR检测，操作方法参照试剂盒说明书。

1.2.2EBV-DNA拷贝数分析根据血浆EBV-DNA拷贝数将其分为EBV阴性组（EBV-DNA＜5×102copies/mL）和EBV阳性组（EBV-DNA≥5×102copies/mL）（5×102～8.67×107copies/mL），EBV中位拷贝数为2.32×104copies/mL。

1.2.3观察指标及疗效评价结外NK/T细胞淋巴瘤患者每化疗2个周期复查EBV拷贝数、LDH、β2微球蛋白及影像学检查进行疗效评价。根据2007年WHO恶性淋巴瘤疗效评价的修订标准，分为完全缓解（complete response，CR）、部分缓解（partial response，PR）、病情稳定（stable disease，SD）、疾病进展（progressive disease，PD）。以CR+PR计算客观缓解率（objective response rate，ORR），以CR+PR+SD计算疾病控制率（disease control rate，DCR），并观察两组的2年无进展生存期（progression-free survival，PFS）情况。

1.3统计方法

采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，不同EBV-DNA拷贝数组间客观缓解率及疾病控制率的比较均采用χ2检验。EBV-DNA拷贝数与2年无进展生存期的关系采用Kaplan-Meier法和Breslow检验。

2 结果

2.1结外NK/T细胞淋巴瘤患者EB病理感染率

109例结外NK/T细胞淋巴瘤患者中，EBV阳性53例，阴性56例，EBV感染率为48.6%。

2.2结外NK/T细胞淋巴瘤患者的临床病例资料分析

109例结外NK/T细胞淋巴瘤患者53例阳性患者中有34例（64.2%）为晚期（Ⅲ～Ⅳ期）患者，56例阴性患者中22例（39.3%）为晚期（Ⅲ～Ⅳ期）患者，两组比较差异有统计学意义（P=0.009）；EBV阳性患者伴有B症状者33例（62.3%），明显高于阴性组患者的21例（37.5%，P=0.01）。而EBV阳性组与EBV阴性组患者在年龄（P=0.185）、性别（P=0.98）、β2微球蛋白（P= 0.105）及LDH（P=0.08）方面均无显著性差异（表1，P＞0.05）。

表1 结外NK/T细胞淋巴瘤患者的临床病理特征分析例Table 1Analysis of the clinical and pathological characteristics of patients with extranodal NK/T-cell lymphoma

2.3结外NK/T细胞淋巴瘤患者EB病毒感染与近期疗效关系

109例结外NK/T细胞淋巴瘤患者中，EBV阴性组的客观缓解率和疾病控制率分别为60.7%（34/56）和78.6%（44/56），EBV阳性组分别为41.5%（22/53）和62.3%（33/53），二者比较客观缓解率有显著性差异（P=0.045），而疾病控制率无显著性差异（P=0.062，表2）。

表2 EB病毒与近期疗效的关系n（%）Table 2Relationship between EB virus infection and short-time effects

2.4EB病毒阳性与结外NK/T细胞淋巴瘤患者2年PFS关系

109例结外NK/T细胞淋巴瘤患者能进入2年PFS评价的患者共59例，其中EBV阴性者36例，EBV阳性者23例，两组病例均无失访。EBV阴性患者2年PFS为38.9%，EBV阳性患者2年PFS为17.4%。EBV阴性组与EBV阳性组2年PFS分别为33.5个月和13.3个月，中位生存期分别为12.5个月和7.8个月，差异有统计学意义（P=0.01，图1）

图1 两组患者2年无进展生存期比较Figure1Comparison of the 2-year PFS rates between the two groups of patients

3 讨论

Epstein－Barr病毒（EBV）由Epstein和Barr于1964年在Burkitt淋巴瘤标本的体外传代细胞中发现，是人疱疹病毒γ亚科嗜淋巴细胞病毒属的DNA病毒，具有嗜淋巴细胞和上皮细胞的特性。在细胞外成熟的病毒颗粒为球形，直径为150～180 nm，EBV病毒基因是线性双链DNA，基因组长平均为172kb，EBV以潜伏感染最为常见，人群普遍易感，EBV可长期潜伏在被感染的B细胞内，形成持续的潜伏感染，仅极少数可发展为EBV相关的上皮细胞恶性肿瘤和淋巴瘤［12-13］。本研究中EBV阳性率为48.6%，低于Kanavaros等［14］研究报道，可能与本研究中统计的病例包括鼻腔及鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者及地域差异有关。

结外NK/T细胞淋巴瘤与EBV感染有密切关系，大多数患者表现为EBV阳性，且与种族和发病部位无关，提示EBV是致病因素或起到病原学的作用［15］。随着分子生物学技术的进展及淋巴瘤发病机制及预后研究进展，越来越多的研究发现EB病毒在结外NK/T细胞淋巴瘤的发生发展过程中起重要作用，Au等［16］研究报道，通过qRT-PCR定量检测患者血清中EBV-DNA［17］，DNA拷贝数高者临床分期较拷贝数低者增高，预后差，提示EBV-DNA检测可作为判断NK/ T细胞淋巴瘤预后的重要指标。本研究中EBV阳性与EBV阴性组患者在Ann Arbor分期及B症状方面有统计学差异，EBV阳性患者可能更易表现出发热、体重减轻、盗汗等症状，且EBV阳性的结外NK/T细胞淋巴瘤患者分期可能较晚。我们将进一步研究，是否可以通过抑制EB病毒或通过降低EBV-DNA复制率来缓解患者发热、盗汗等伴随症状，及提高结外NK/T细胞淋巴瘤患者的疗效。

本研究比较了EBV阴性组及EBV阳性组间近期疗效及2年无进展生存期，研究结果提示EBV-DNA阴性者较EBV-DNA阳性者客观缓解率及2年无进展生存期均更佳，客观缓解率分别为60.7%和41.5%，中位生存期分别为12.5个月和7.8个月，2年无疾病进展期分别为33.5个月和13.3个月。结果与刘阳等［17］报道相似。但EBV-DNA阴性组与EBV-DNA阳性组疾病客观控制率间无明显统计学差异，可能是由于本研究病例资料较少有关。

本研究提示检测EB病毒对评价结外NK/T细胞淋巴瘤近期疗效及2年无进展生存期有一定临床意义，有无EB病毒感染有望成为评价结外NK/T细胞淋巴瘤近期疗效的指标之一。动态监测血浆中EBV-DNA拷贝数对评价疾病近期疗效有一定的意义。但因EB病毒可以存在于正常人血浆中，不能单纯以EBV-DNA拷贝数作为评价疾病疗效的指标，需结合影像学及骨髓穿刺等结果判断。

本研究结果示，EB病毒在评价结外NK/T细胞淋巴瘤疾病控制及疗效中具有一定的临床意义，但是否可以通过抗病毒或其他方法抑制血浆中EBV-DNA拷贝数，以期提高结外NK/T细胞淋巴瘤疾病有效率及无进展生存期，需要进行更深一步的研究。有关结外NK/T细胞淋巴瘤治疗过程中EBV-DNA拷贝数的动态变化与疾病转归的关系，现尚无相关报道，需要更多的学者继续研究。

因本研究时间较短，绝大多数患者处于疾病缓解状态，故EB病毒阳性在评价结外NK/T细胞淋巴瘤患者中位PFS和OS中的意义尚不能统计，将继续观察，并对相关资料做进一步的统计及研究。

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（2014-10-21收稿）

（2014-01-05修回）

（编辑：郑莉）

Detecting EB virus to determine curative effect in extranodal natural killer/T-cell lymphoma

Wenshuo LIU,Feifei NAN,Sisi JIA,Sucai LI,Mingzhi ZHANG,Lei ZHANG

Lei ZHANG;E-mail:zl2909@163.com

Objective:To investigate the clinical significance of detecting Epstein Barr virus(EBV)infection in evaluating recent curative and long-term effects in patients with extranodal natural killer(NK)/T-cell lymphoma.Methods:The EBV-DNA copies in the plasma of 109 patients,who were pathologically and immunohistochemically diagnosed with extranodal natural killer/T-cell lymphoma in the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University between January 2011 and April 2014,were monitored via quantitative real-time polymerase chain reaction.Subsequently,the difference in recent curative and long-term effects between EBV positive and EBV negative patients was compared.Results:Among the 109 patients with extranodal NK/T-cell lymphoma,34(64.2%)cases of EBV positive patients were at the advanced stage(Ⅲ～Ⅳstages),and 22(39.3%)cases of EBV negative patients were at the terminal stage (Ⅲ～Ⅳstages).EBV positive patients who accompanied by B symptoms were 33(62.3%),and there were 21(37.5%)cases with B symptoms in EBV negative patients,the differences between stages and B symptoms were statistically significant.The attained objective response rate of the EBV-DNA negative patients(34,60.7%)was significantly higher than that of the EBV-DNA positive patients (22,41.5%)(P<0.05).Similarly,the 2-year progression-free survival(PFS)rate of EBV negative patients was better than that of EBV positive patients(P<0.05).Conclusion:Detecting EBV in plasma has clinical significance in evaluating the recent curative effect and the 2-year PFS rate in patients diagnosed with extranodal NK/T-cell lymphoma.

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