不同发酵类型的茶叶茶多酚含量的比较分析

侯冬岩，刁全平，李铁纯，武晓英，回瑞华

(鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁鞍山114007)

茶多酚又叫茶单宁，茶鞣质，是茶叶中酚类及其衍生物的总称．茶多酚具有很强的抗氧化能力，其抗氧化能力可达L－抗坏血酸的100倍．现代科学研究认为人体衰老的原因在于人体的细胞在代谢过程中连续不断地产生具有高度活性的自由基和细胞自身的抗氧化酶及超氧化物歧化酶(SOD)不断消除作用的失衡，使自由基浓度过剩．茶多酚具有很强的清除人体自由基的作用，是极强的消除有害自由基的天然物质．茶叶中含有丰富的茶多酚，已有不少研究结果发表［1～6］，而不同发酵类型茶叶中茶多酚的含量的分析少见报道．本文采用高效液相色谱法测定3种不同发酵类型茶叶中茶多酚的含量，为进一步开发利用不同发酵类型的茶叶提供科学参考．

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

Waters 1525-2996-tcm液相色谱仪(美国Waters公司);KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);HH-SIS电热恒温水浴锅(金坛市大地自动化仪器厂)．

EGCG(标准品，天津一方科技有限公司);甲醇(色谱纯，天津市大茂化学试剂厂);二次蒸馏水，自制．

1．2 实验样品

样品:玉带绿茶、青茶王子冠、滇红工夫红茶，均产于云南．

1．3 实验方法

1．3．1 标准溶液配制 从EGCG标准品中精确称取0．012 5 g置于25mL容量瓶中，加入少量甲醇溶液在超声波仪器中震荡使标准品充分溶解后，用甲醇定容至刻度线，得0．50 mg/mL的EGCG标准品溶液，备用．

1．3．2 样品前处理及样品溶液的制备 将茶叶样品用高速中药粉碎机粉碎，过0．45 mm筛子．取2．00 g样品粉末放入100 mL小烧杯中，加入90 mL沸水在100℃水浴锅中保温1 h，取出冷却后抽滤，将滤液用水定容至100 mL容量瓶中．从容量瓶中取出15 mL置于25 mL容量瓶中，加入0．01 mol/L的盐酸溶液8 mL，用水定容至刻度线［7］．从容量瓶中吸取部分溶液，经0．45μm的混纤维孔滤膜过滤，得滤液备用．

1．3．3 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18(150×4．6 mm);流动相:V甲醇∶V水=30∶70;柱温:30℃;流速:1．0 mL/min;进样量:10．0 μL;检测器:紫外检测器;扫描波长:210～400 nm;检测波长:280．0 nm．

1．3．4 测定方法 将茶样分别按1．3．2处理，按1．3．3色谱条件进行测定，每个样品测定3次．

2 结果与讨论

2．1 标准曲线的绘制

从1．3．1配制的EGCG标准品储备液中精确移取0．80，1．60，2．40，3．20，4．00，4．80 mL 于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度．配制好的标准溶液进样前分别通过0．45 μm 的混纤维孔滤膜过滤，在 1．3．3的色谱条件下分别进样，进样量为10μL，记录峰面积．以EGCG的积分峰面积为横坐标，以质量浓度为纵坐标，绘制标准曲线．如图1所示，求得二者关系的线性回归方程为:Y=4×10－7X－0．025 8，相关系数r=0．999 9，标准品在 0．04～0．24 mg/mL 范围内，峰面积与EGCG浓度呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析．

2．2 精密度实验

从1．3．1的EGCG标准品储备液中精确量取1．80 mL制成一定质量浓度的溶液，通过混合纤维孔滤膜过滤，在1．3．3的色谱条件下分别进样10μL，记录峰面积．相同条件下测定9次，求得其标准偏差和变异系数，方法精密度结果如表1．

表1 方法精密度

2．3 回收率实验

从1．3．2的样品储备液中精确移取2．00 mL至10 mL容量瓶中，分别加入3个不同浓度的EGCG标准品的溶液，混合均匀，加水定容至刻度．3个配制好的样品分别通过混合纤维孔滤膜过滤．在1．3．3的色谱条件下分别进样10μL，记录峰面积，计算该方法下测定EGCG的方法回收率，结果列于表2．

表2 方法回收率

2．4 最低检出限

取1．3．1中的EGCG标准储备液1．00mL，连续不断稀释，通过混合纤维膜过滤后进样进行HPLC分析检测，当响应值为基线噪音2倍时，测定其峰面积，计算此时EGCG标准品溶液的浓度，即为该仪器对茶多酚的最低检出限为0．02μg/mL．

2．5 样品中茶多酚含量的测定

按1．3．2处理样品，每个样品进样3次，进样10μL，求出3次的积分峰面积的平均值，然后带入标准曲线，得到3种不同发酵类型茶叶茶多酚的含量，结果如表3所示．

表3 样品中茶多酚的含量

3 结论

实验结果表明3种不同发酵类型的茶叶中茶多酚的含量由高到低的顺序是:不发酵的绿茶—半发酵青茶—全发酵红茶，说明茶叶中原茶多酚的含量随着发酵程度增大而减少．

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，它是混合物，有文献报道EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)是儿茶素的主成分．茶叶中茶多酚的含量的定量分析可以直接用EGCG的含量做代表来测定．采用HPLC法分别测定不同发酵类型茶叶中茶多酚，说明了发酵方式和程度的不同会引起茶多酚的含量的变化，为饮用人群和开发利用不同发酵类型茶叶提供科学参考．

［1］侯冬岩，回瑞华，刘晓媛，等．红茶茶多酚及抗氧化性能测定［J］．食品科学，2005，26(8):367－370．

［2］周卫龙，孙安华，钟萝．GB/T 8313－87．中华人民共和国国家标准［S］．北京:中国标准出版社，2002．

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