赶黄草对大鼠酒精性脂肪肝的保护作用及机制

李国春 (泸州医学院附属中医医院静脉用药调配中心，四川 泸州 646000)

酒精性脂肪肝是因酒精及其代谢产物导致的肝损害，已经成为造成我国慢性脂肪肝发病的首要原因。赶黄草性平，味苦、略辛，是经典苗族草药，有清热利湿、平肝健脾之功效，被普遍用于各类肝炎、肝病的治疗〔1，2〕。本文研究赶黄草对大鼠酒精性脂肪肝的干预作用和作用机制，旨在筛选治疗酒精性脂肪肝的有效药物。

1 材料与方法

1.1材料 全自动生化分析仪和光学显微镜购自日本Olympus公司，药材赶黄草取自四川省广元市，并经本医学院两名教授鉴定为正品;槲皮素购自本地生物技术有限公司，总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及无水乙醇均购自成都某生物技术有限公司。选择Wistar大鼠140只，均为母鼠，体重(205±18)g，由本医学院动物实验中心提供。

1.2方法

1.2.1制备赶黄草提取物 用8倍的浓度为95%的乙醇将赶黄草提取3次，将提取液混合后减压并回收，干燥后获得提取物，测得赶黄草提取物中的槲皮素含量约1.25%。

1.2.2模型的复制、分组及给药 将140只大鼠随机分为七组，每组20只。正常对照组、模型组，均予等容量生理盐水;硫普罗宁组予硫普罗宁50 mg/kg;提取物低剂量组予赶黄草提取物2 000 mg/kg;提取物高剂量组予赶黄草提取物4 000 mg/kg;槲皮素低剂量组予槲皮素25 mg/kg;槲皮素高剂量组予槲皮素50 mg/kg。所有组别均给予含1.5%硫酸亚铁的颗粒饲料喂养，并自由饮水及进食，于24℃温度、75%湿度室内分笼饲养，除正常对照组外，各组在适应性喂养结束后于每日上午9时肌注50%乙醇8 g/kg，容量为10 ml/kg;正常对照组予等量生理盐水肌注。4 w后随机处死模型组6只，病理证实无肝脏脂肪变，6 w后随机处死模型组6只，病理证实有肝脏脂肪变，此时停止乙醇肌注。每日上午9时肌注相应药物，持续6 w，对大鼠食欲、行为、状态、毛发与死亡情况进行观察。实验结束前大鼠禁食12 h后处死，分离血清，取出肝脏称重并冰冻切片。

1.2.3观察指标 计算肝脏系数，肝脏系数=肝湿度/体重×100%，肝组织油红O染色，光镜下观察肝脏脂肪浸润情况并对肝细胞脂滴面积。采用全自动生化分析仪检测ALT、AST、TC及TG含量。

1.3统计学方法 应用SPSS13.0软件，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。

2结果

2.1赶黄草提取物对模型大鼠肝脏系数及体重的影响 正常对照组大鼠毛色光滑，行动活跃，体重增长明显，其余各组大鼠均出现食欲减退，行动减少，体重增长缓慢表现。相比正常对照组，模型组大鼠反应迟钝，体重明显减轻，肝脏指数明显增加(P＜0.05)，相比模型组，各用药组大鼠体重增加显著，肝脏指数明显下降(P＜0.05)。见表1。

表1 赶黄草提取物对模型大鼠肝脏系数、体重及染色面积的影响(s，n=20)

表1 赶黄草提取物对模型大鼠肝脏系数、体重及染色面积的影响(s，n=20)

与正常对照组相比:1)P＜0.05;与模型组相比:2)P＜0.05;下表同

组别 体重(g)肝脏系数 染色面积(%)313±14.8 2.41±0.21 0模型组 278±8.61) 3.03±0.411) 18.3±1.42提取物高剂量组 306±13.92) 2.43±0.462) 5.82±0.861)提取物低剂量组 299±20.12) 2.67±0.522) 10.3±1.041)槲皮素高剂量组 293±14.72) 2.51±0.532) 6.31±1.171)槲皮素低剂量组 289±15.62) 2.72±0.662) 11.2±1.811)硫普罗宁组 313±21.82) 2.53±0.512) 8.22±0.971)正常对照组

2.2赶黄草提取物对大鼠肝脏组织病理学的影响 光镜下正常对照组肝小叶结构清晰，可见肝细胞内有极少数红色脂滴存在，模型组有明显较多的红色脂滴，赶黄草提取物各组存在不同程度红色脂滴减少，进行油红O染色脂滴半定量分析后显示，赶黄草提取物各剂量组同模型组比较均有明显差异(P＜0.05)。见表1。

2.3赶黄草提取物对ALT、AST、TC、TG水平的影响 相比正常对照组，模型组血清 ALT、AST、TC、TG水平均增加(P＜0.05);相比模型组，各用药组血清 ALT、AST、TC、TG水平均降低(P＜0.05);相比槲皮素各组，赶黄草各提取物组ALT、AST、TC、TG水平均降低(P＜0.05)。见表2。

表2 大鼠血清ALT、AST、TC、TG水平比较(s，n=20)

表2 大鼠血清ALT、AST、TC、TG水平比较(s，n=20)

组别ALT(U/L)AST(U/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)78.3±4.2 159±9.3 3.8±0.24 1.9±0.39模型组 110.4±7.61)223±10.28 7.6±0.411)4.2±0.441)提取物高剂量组 80.4±2.22)173±14.22)4.3±0.672)2.3±0.232)提取物低剂量组 91.2±5.52)186±12.22)5.2±0.542)2.5±0.292)槲皮素高剂量组 92.8±6.22)196±11.62)5.1±0.832)3.2±0.472)槲皮素低剂量组 101.4±8.72)204±8.32) 6.2±1.02 3.6±0.282)硫普罗宁组 93.6±6.92)199±10.62)5.2±0.402)3.3±0.622)正常对照组

3讨论

酒精性脂肪肝是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病，临床症状为非特异性，可无症状，或有右上腹胀痛、食欲不振、乏力、体重减轻等。导致酒精性脂肪肝在我国慢性脂肪肝发病中占有较大比例，约占慢性脂肪肝患者40%，已经成为影响人们健康的重要的消化系统疾病。酒精性肝损害的发生，主要由于酒精与其代谢产物对肝细胞的毒性作用，乙醇毒性的早期靶器官首先为线粒体，其次为微粒体。由于肝脏是储存铁的的重要器官，亦为铁诱发损伤的主要靶器官，由于乙醇毒性先后作用于线粒体及微粒体，影响了脂肪酸的β氧化，使蓄积脂肪酸的清除受阻，进而导致了脂肪肝。此时肝铁含量进一步增加，促进肝组织脂质过氧化损伤，导致脂肪肝继续加重〔3，4〕。酒精性脂肪肝可经脂肪性肝炎、肝纤维化最终转化为肝硬化，迄今尚无防治该病的特效药物。本文通过复制大鼠酒精性脂肪肝模型，对赶黄草对大鼠酒精性脂肪肝的干预作用和作用机制进行了研究，旨在筛选治疗酒精性脂肪肝的有效药物。

本研究提示长期摄入酒精可致大鼠脂质代谢紊乱，进而形成酒精性脂肪肝。赶黄草提取物各剂量组则显著改善了酒精性脂肪肝的病理改变，显著治疗酒精所致大鼠肝脏脂肪性变〔5〕。本研究发现槲皮素在赶黄草提取物中平均含量约1.25%，在赶黄草中平均含量约0.2%，而已有研究证实槲皮素对大鼠酒精性脂肪肝有明显效果〔6〕，本组研究表明赶黄草提取物相比单纯槲皮素治疗酒精性脂肪肝效果更好，可能与其中含有协同治疗酒精性脂肪肝的化学成分有关，同既往研究结果有相似之处〔7〕。

综上所述，赶黄草对大鼠酒精性脂肪肝有明显保护作用，与其中含有的槲皮素有显著相关性，但相比单纯槲皮素治疗效果更好，或许与其中可能存在其他具有预防酒精性脂肪肝化学成分有关，亦可能与其中存在与槲皮素有协同作用的预防酒精性脂肪肝的化学成分有关。

1 杨文吉，崔旭妍，郑晟琳，等.有氧运动对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞PPARα mRNA表达的影响〔J〕.现代生物医学进展，2014;14(10):1855-60.

2 张中贤，黄剑臻.赶黄草水提取物利胆退黄作用的研究〔J〕.热带医学杂志，2008;8(2):125-7.

3 袁叶飞，胡祥宇，欧贤红，等.赶黄草对体外诱导的酒精性脂肪肝细胞的影响〔J〕.泸州医学院学报，2013;36(1):35-8.

4 柯发敏，侯杰荣，刘 剑，等.赶黄草中槲皮素提取方法比较研究〔J〕.现代医药卫生，2014;30(14):2118-9.

5 梁志清，白纪红，秦 青，等.槲皮素对非酒精性脂肪肝大鼠血清白介素18和白介素10比值的影响〔J〕.时珍国医国药，2013;24(5):1112-4.

6 罗华丽，汪 莹.双葛解酲丸对酒精性脂肪肝大鼠保护作用的实验研究〔J〕.重庆医科大学学报，2012;37(2):125-9.

7 杨 芳，韩玉翠.大鼠酒精性脂肪肝两种建模方法的比较〔J〕.山东医药，2011;51(13):15-7.