雷炉洗剂微生物限度检查方法及验证

李秀珍，宋秀荣，刘风琴，李　文

（德州市食品药品检验检测中心，山东　德州　253000）

雷炉洗剂微生物限度检查方法及验证

李秀珍，宋秀荣，刘风琴，李文

（德州市食品药品检验检测中心，山东德州253000）

目的建立雷炉洗剂微生物限度检查方法并进行验证。方法分别采用常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法对各试验菌株进行回收率试验，以验证已建立方法的科学性和可行性。结果雷炉洗剂对细菌有很强的抑制作用，采用薄膜过滤法，以pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液900 mL为冲洗液，可降低其抑菌性。结论该方法可用于雷炉洗剂的微生物限度检查。

雷炉洗剂；微生物限度检查；薄膜过滤法

雷炉洗剂（100 mL含炉甘石15％，雷夫奴尔0.1％），具有止痒、收敛、抗感染等作用。用于治疗皮肤湿疹、丘疹、红斑等皮肤炎症。本品为外用洗剂，根据《中国药典》2010年版规定［1］，外用洗剂应进行微生物限度的检查，但笔者查阅资料，未发现有对该药品微生物限度检查方法的报道。经查阅文献，该药品对细菌具有一定抑制作用［2，3］，采用常规法难以反应该药品的真实污染情况［4］。故笔者采用常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法3种方法，对该药品进行微生物限度检查方法的验证［5］，以建立适合该药品的微生物限度检查方法。

1　材料与方法

1.1菌种大肠埃希氏菌［CMCC（B）44102］、金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］、枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］、白色念珠菌［CMCC（F）98001］、铜绿假单胞菌［CMCC（B）26003］为第三代传代菌种，均购于中国食品药品检定研究院。

1.2培养基营养琼脂培养基（批号：121203）、玫瑰红钠琼脂培养基（批号：121119）、胆盐乳糖培养基（批号：1206132）、营养肉汤培养基（批号：121214）均购自北京三药科技有限公司。

2　方法与结果

2.1菌落计数方法验证

2.1.1供试液及菌液的制备供试液制备：样品10 mL，加稀释液（pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）至100 mL，混匀，作为1∶10供试液。

菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中，35℃培养24 h，接种白色念珠菌新鲜培养物至改良马丁培养基中，25℃培养24 h，分别取上述培养物1 mL，加无菌生理盐水9 mL，10倍递增稀释成50～100 cfu·mL-1的菌悬液。

2.1.2常规方法试验组：分别取“2.1.1”项下供试液和菌悬液各1 mL，注入同一个无菌平皿，立即倾注琼脂培养基15～20 mL。

菌液组：不加供试液，其余同试验组。

供试品对照组：不加菌悬液，其余同试验组。稀释剂对照组：以稀释剂替代菌悬液，其余同试验组。

每组平行制备3个平板，营养琼脂培养基的平皿，35℃培养48 h，倾注玫瑰红钠琼脂培养基的平皿于25℃培养72 h，点计菌落数，分别按照中国药品检验标准操作规范［5］计算各试验菌每次试验的菌落回收率。

2.1.3培养基稀释法试验组：取“2.1.1”项下供试液1mL，等量注入5个平皿中，每一平皿加入菌悬液1 mL，其他同常规法操作。

小心滑倒。灯亮了，房间里弥漫着湿濡的气息，还有这句温婉的话。地上潮湿的足迹还在，浴巾斜搭在床角。他能感觉到其间她留下的香波的味道，隐约飘荡在鼻翼间。

2.1.4薄膜过滤法试验组：取“2.1.1”项下供试液1 mL，经孔径0.45 μm滤膜过滤后以稀释液900 mL冲洗滤膜，每次100 mL，在最后1次冲洗液中加菌悬液1 mL，滤干并取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基上培养计数。其他同常规法操作。

2.1.5结果各次试验的稀释剂对照组回收率均大于70％。3种样品处理方法对各试验菌株的回收率结果见表1。

试验结果表明，雷炉洗剂对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，可采用薄膜过滤法降低其抑菌性。笔者在薄膜过滤法中增加稀释液的冲洗量至900 mL，分9次等量冲洗；培养基稀释法取“2.1.1”项下供试液1 mL等量分别注入10个平皿中，两种方法回收率仍均小于70％。表明本品对金黄色葡萄球菌有非常强的抑菌性，不易被金黄色葡萄球菌污染，故应采用接近70％的薄膜过滤法对本品的细菌进行检验［1］。采用常规法对霉菌酵母菌进行检验。

表1　3批雷炉洗剂对各实验菌株的回收率试验结果（％）

2.2控制菌检查的方法验证

2.2.1金黄色葡萄球菌检查方法验证

2.2.1.1常规法试验组：取“2.1.1”项下的1：10供试液10 mL，接种至100 mL营养肉汤中，加入金黄色葡萄球菌10～100 cfu，35℃培养18～24 h，按照《中国药典》2010年版附录ⅪJ检验，应检出金黄色葡萄球菌。

阴性对照组：除不加金黄色葡萄球菌外，其余同试验组，应不得检出金黄色葡萄球菌。

2.2.1.2培养基稀释法取“2.1.1”项下的1∶10供试液10 mL，分别接种至200、500、1 000 mL营养肉汤中，其余同常规法。

2.2.1.3薄膜过滤法取“2.1.1”项下的1∶10供试液10 mL，每膜加入金黄色葡萄球菌10～100 cfu，以0.9％的无菌氯化钠溶液900 mL分9次冲洗，滤后将薄膜置于100 mL营养肉汤中，其余同常规法，结果见表2

2.2.2铜绿假单胞菌检查方法验证

2.2.2.1常规法试验组：取“2.1.1”项下的1∶10供试液10 mL，接种至100 mL胆盐乳糖培养基中，加入铜绿假单胞菌10～100 cfu，35℃培养18～24 h，按照《中国药典》2010年版附录ⅪJ检验，应检出铜绿假单胞菌。

阴性对照组：除不加铜绿假单胞菌外，其余同试验组，应不得检出铜绿假单胞菌。

2.2.2.2培养基稀释法取“2.1.1”项下的1∶10供试液10 mL，分别接种至 200、500 mL营养肉汤中，其余同常规法，结果见表2。

试验结果表明，金黄色葡萄菌可采用薄膜过滤法检验，铜绿假单胞菌可采用培养基稀释法检验。

表2　雷炉洗剂控制菌检查方法验证结果

3　结论

笔者采用薄膜过滤法，分别以100、300、500、900 mL为冲洗液，结果显示冲洗液低于900 mL时，回收率不满意，故最终确定冲洗体积为900 mL。

雷炉洗剂具有抑菌性，采用常规法检查会抑制其菌株的生长［6］，不能反映药品真实污染情况，笔者查阅相关文献［7～11］采用培养基稀释法与薄膜过滤法均可降低其抑菌性。试验最终确定采用薄膜过滤法对细菌进行检验，常规法对霉菌酵母菌进行检验。采用薄膜过滤法进行控制菌金黄色葡萄球菌的检验，采用培养基稀释法对铜绿假单胞菌进行检验。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅪJ.

［2］金涛.炉甘石洗剂微生物限度检查方法［J］.中国生化药物杂志，2011，32（6）：480-481.

［3］王菊芳.雷夫奴尔冷湿敷治疗葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征的临床观察［J］.家庭护士，2008，6（8）：2195-2196.

［4］陈婷，唐跃年，胡燕锋.硫酸新霉素口服溶液微生物限度检查方法及验证［J］.医药导报，2013，32（Suppl）：207-208.

［5］中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范［S］.北京：中国医药科技出版社，2005：325-334.

［6］钟长鸣，陈希，吴燕红.微生物限度检查和无菌检查方法验证中存在的问题［J］.中国药品标准，2011，12（1）：12-13.

［7］杜平华，朱世真.抗菌药物微生物限度检查方法的验证［J］.中国抗生素杂志，2003，28（5）：311-313.

［8］刘鹏，马仕洪，戴翚，等.普那霉素片微生物限度检查方法的建立［J］.药物分析杂志，2010，30（2）：303-306.

［9］刘广桢，张冕，胡文红，等.5种洗剂类医疗机构制剂微生物限度检查方法验证［J］.药学研究，2015，34（6）：332-334.

［10］易大为，陈野，潘强.薄膜过滤法在局部给药制剂微生物限度检查中的应用［J］.中国药事，2008，22（4）：342-345.

［11］韦曦，邱双成，王翠荣.29种医院制剂微生物限度检查方法验证［J］.中国药房，2008，19（1）：52-54.

The method of microbial limit examination and verification of Ray Furnace Lotion

LI Xiu-zhen，SONG Xiu-rong，LIU Feng-qin，LI Wen
（Dezhou Municipal Food and Drug Inspection Center，Dezhou 253000，China）

Objective To establish and validate the method of microbial limit test of Ray Furnace Lotion.Methods Routine method，membrane filtration method，culture medium dilution method were used for each test strain recovery experiments，to verify the scientific and feasible of the established method.Results Ray Furnace Lotion had a strong inhibitory effect on bacteria，membrane filtration method was used with pH 7.0 sodium chloride-peptone buffer 900 mL as flush fluid，can reduce its antibacterial activity.Conclusion The method can be used for microbial limit test of Ray Furnace Lotion.

Ray Furnace Lotion；Microbial limit test；Membrane filtration method

R927.11

A

2095-5375（2015）12-0709-003

李秀珍，女，研究方向：药学检验，E-mail：lixiuzhen019851216@163.com