紫归子妇炎康泡腾栓5种活性成分的含量测定

武静莲，姜林芬，吴红梅，胡林海，胡芳弟

（1.甘肃省第三人民医院，甘肃兰州 730000；2.甘肃省中医学校，甘肃兰州 730050；3.嘉峪关市第一人民医院，甘肃嘉峪关 730000；4.兰州大学药学院，甘肃兰州 730000）

紫归子妇炎康泡腾栓5种活性成分的含量测定

武静莲1，姜林芬2，吴红梅2，胡林海3，胡芳弟4*

（1.甘肃省第三人民医院，甘肃兰州 730000；2.甘肃省中医学校，甘肃兰州 730050；3.嘉峪关市第一人民医院，甘肃嘉峪关 730000；4.兰州大学药学院，甘肃兰州 730000）

目的探讨紫归子妇炎康泡腾栓中5种活性成分的含量测定方法，并测定5批自制紫归子妇炎康泡腾栓中5种活性成分的含量。方法采用高效液相色谱法，以KromasiL C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），分别以甲醇-水（82∶18）和甲醇-0.5%醋酸（32∶68）为流动相，测定该制剂中左旋紫草素和阿魏酸的含量。以甲醇-0.02%三乙胺水溶液（53∶47）为流动相，测定该制剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量。以KromasilODS保护柱（4.6 mm×10mm，5 μm），以甲醇-0.1%三乙胺水溶液（80∶20）为流动相，测定该制剂中β，β-二甲基丙烯酰的含量。结果实验室自制的5批紫归子妇炎康泡腾栓中阿魏酸、左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、苦参碱、氧化苦参碱的平均含量分别为0.31 mg/枚、0.14 mg/枚、0.28 mg/枚、19.80mg/枚、1.69 mg/枚。结论使用的紫归子妇炎康泡腾栓中阿魏酸、左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、苦参碱、氧化苦参碱的高效液相色谱含量测定方法简单易行，可以用于紫归子妇炎康泡腾栓的质量控制。

紫归子妇炎康泡腾栓；含量测定；质量控制；活性成分

紫归子妇炎康泡腾栓是在传统中医理论的指导下，针对现代妇科中药研究领域学术热点，从当归、紫草、苦豆子3味妇科良药中提取与治疗阴道炎相关的活性成分，即具有清热解毒、祛风除湿、活血化瘀、杀虫止痒功效的活性组分，采用现代技术制成的妇科用栓剂。该制剂中的主要抗炎活性成分包括阿魏酸［1］、左旋紫草素［2］、β，β-二甲基丙烯酰［3］、苦参碱和氧化苦参碱［4］。为了全面系统地控制该制剂的质量，本文采用HPLC（高效液相色谱）方法，对该制剂中的左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、阿魏酸、苦参碱及氧化苦参碱5种成分进行含量测定方法研究。

1 试剂与仪器

1.1 试剂

左旋紫草素（中国药品生物制品检定所提供，批号769-9001）；β，β-二甲基丙烯酰（中国药品生物制品检定所提供，批号116-200503）；苦参碱（中国药品生物制品检定所提供，批号0805-9804）；氧化苦参碱（中国药品生物制品检定所提供，批号0780-9703）；阿魏酸（中国药品生物制品检定所提供，批号110773-200611）；甲醇（山东禹王集团化工分公司生产，色谱纯）；高效液相色谱用三重蒸馏水（经0.45 μm微孔滤膜过滤）；氯仿（天津市星月化工有限公司，分析纯）；三乙胺（天津市凯通，分析纯）；磷酸二氢钾（北京化工厂，分析纯）；氢氧化钠（天津市德恩化学试剂有限公司，分析纯）；溴麝香草酚蓝（中国公司合营新中化学厂，分析纯）；紫草、苦豆子和当归药材购自兰州黄河药市。

1.2 仪器

戴安μltimate3000型高效液相色谱仪，Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），二极管阵列检测器（DAD），紫外分光光度计1700型（苏州市莱顿科学仪器有限公司），RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），KQ-400DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DHG-9075A型烘箱（上海一恒有限公司），BS224S型万分之一电子分析天平（德国Sartoriμs赛多利斯），MillinnceQ超纯水机。

2 实验方法

2.1 对照品溶液的配置

（1）精密称取阿魏酸对照品6.32 mg，用甲醇定容制成0.06 mg/mL阿魏酸对照品储备溶液。

（2）精密称取左旋紫草素对照品12.78 mg，用甲醇定容制成0.51 mg/mL左旋紫草素对照品储备溶液。

（3）精密称取苦参碱对照品13.13 mg，用甲醇定容制成0.525 mg/mL的苦参碱对照品储备溶液。

（4）精密称取氧化苦参碱对照品1.01 mg，用甲醇定容制成0.521 mg/mL的氧化苦参碱对照品储备溶液。

（5）精密称取β，β-二甲基丙烯酰4.72 mg，用甲醇配制成0.472 mg/mL的β，β-二甲基丙烯酰对照品储备溶液。

2.2 含量测定

2.2.1 制剂中左旋紫草素的含量测定（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（82∶18）；流速：1.0 mL/min；二极管阵列检测器（DAD）；检测波长：516 nm；柱温：30°C；进样量：10 μL。

（2）标准曲线的绘制：精密吸取0.51 mg/mL的左旋紫草素对照品溶液0.25 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，稀释至10 mL，分别吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按2.2.1项下的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），以左旋紫草素浓度为横坐标（X），得回归方程：Y=0.257 6X-0.233 5，相关系数R=0.999 9，在12.55～408.80 μg/mL范围内，线性关系良好。

（3）制剂中左旋紫草素的含量测定：精密称取紫归子妇炎康泡腾栓2枚，加40 mL 1 mol/L的NaOH溶液，超声溶解30分钟，静置，离心（转速4 000转/分）10分钟，取上清液，用1 mol/L的HCL调节pH值至5.0～6.0，适当搅拌，放置，析出红色固体物质，抽滤，滤饼干燥（40℃）至恒重后，置于5 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。精密吸取样品10 μL，进样，测定。

2.2.2 制剂中β，β-二甲基丙烯酰的含量测定（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil ODS保护柱（4.6 mm×10 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%三乙胺水溶液（80∶20），用磷酸调节pH=3；流速：1.0 mL/min；检测波长：516 nm；柱温：30°C；进样量：10 μL。

（2）标准曲线的绘制：精密吸取0.472 mg/mL的β，β-二甲基丙烯酰对照品溶液0.25mL、1mL、2mL、4mL、8mL，稀释至10mL，分别吸取10 μL注入高效液相色谱仪，按2.2.2项下的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），β，β-二甲基丙烯酰浓度为横坐标（X），得回归方程：Y=4.75×105X-8.06×105，相关系数R=0.999 9，在11.80～70.80 μg/mL范围内，线性关系良好。

（3）制剂中β，β-二甲基丙烯酰的测定：样品处理方式同2.2.1项。

2.2.3 制剂中阿魏酸的含量测定（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%醋酸（32∶68）；流速：1.0 mL/min；二极管阵列检测器（DAD）；检测波长：316 nm；柱温：35°C；进样量：10 μL。

（2）标准曲线的绘制：精密吸取0.06 mg/mL的阿魏酸对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，加5%的甲酸甲醇稀释至10 mL，分别吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按2.2.3项下的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），以阿魏酸浓度为横坐标（X），得回归方程：Y=838.58X-0.022 8，相关系数R= 0.999 9，在3.11～49.84 μg/mL范围内，线性关系良好。

（3）样品中阿魏酸的含量测定：精密称取紫归子妇炎康泡腾栓2枚，置于10 mL容量瓶中，加甲醇，超声溶解30分钟，补足重量，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。精密吸取样品10 μL，进样，测定。

2.2.4 制剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.02%三乙胺水溶液（53∶47）；流速：1.0 mL/min；二极管阵列检测器（DAD）；检测波长：205 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。

（2）标准曲线的绘制：精密吸取0.525mg/mL的苦参碱对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，加甲醇稀释至10 mL，分别吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按2.2.4项下的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），以苦参碱浓度为横坐标（X），得回归方程：Y=2.100 1X-0.391 2，相关系数R=0.999 9，在26.25～420.00 μg/mL范围内，线性关系良好。精密吸取0.521 mg/mL的氧化苦参碱对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，加甲醇稀释至10 mL，分别吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按2.2.4项下的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），以氧化苦参碱浓度为横坐标（X），得回归方程：Y=1.723 6+3.460 2，相关系数R=0.999 5，在26.05～416.08 μg/mL范围内，线性关系良好。

（3）样品中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定：精密称取紫归子妇炎康泡腾栓2枚，置于10 mL容量瓶中，加甲醇，超声溶解30分钟，补足重量，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。精密吸取样品10 μL，进样，测定。

2.3 方法学实验

2.3.1 稳定性实验取同一批自制紫归子妇炎康泡腾栓，分别在0小时、3小时、6小时、9小时、12小时、18小时、24小时进样20 μL，记录峰面积。苦参碱、氧化苦参碱、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰的RSD分别为2.08%、1.33%、1.89%、1.50%、1.57%。

2.3.2 精密度实验精密吸取一定浓度的苦参碱、氧化苦参碱、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰对照品溶液20 μL，连续进样5次，记录峰面积。苦参碱、氧化苦参碱、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰RSD分别为0.74%、0.63%、0.34%、1.26%、1.53%。

2.3.3 重复性实验取同一批自制紫归子妇炎康泡腾栓供试品5份，按样品测定方法测定。供试品中苦参碱、氧化苦参碱、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰RSD分别为1.96%、1.62%、2.61%、1.41%、2.38%。

2.3.4 回收率实验精密称取已知含量的紫归子妇炎康泡腾栓制剂5份，每份1.25 g，分别加入苦参碱对照品储备溶液9.95 mL、氧化苦参碱对照品储备溶液1.32 mL、阿魏酸对照品储备溶液0.755 mL、左旋紫草素对照品储备溶液0.206 mL、β，β-二甲基丙烯酰对照品储备溶液0.292 mL。按上述方法进行处理和测定，计算紫归子妇炎康泡腾栓中5种活性成分的回收率平均为99.78%，RSD为3.12%。

3 含量测定结果

5批制剂样品中左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、阿魏酸、苦参碱、氧化苦参碱的含量测定结果见表1。

表1 样品中5种活性成分的含量（mg/枚）

4 结语

本文采用高效液相色谱法测定了自制紫归子妇炎康泡腾栓中5种活性成分的含量，所采用的方法简单易行。为全面高效地控制制剂的质量提供了保证。实验室自制的5批紫归子妇炎康泡腾栓中阿魏酸、左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、苦参碱、氧化苦参碱的平均含量分别为0.31 mg/枚、0.14 mg/枚、0.28 mg/枚、19.80 mg/枚、1.69 mg/枚。

［1］蒋伟，王长虹，王峥涛.当归水溶性成分研究［J］.中国药学杂志，2010，45（2）：101-103.

［2］徐新刚，王宝珍，孙志蓉，等.新疆紫草的主要化学成分［J］.吉林大学学报，2010，48（2）：319-322.

［3］林建峰，吴珊.紫云金的抗炎镇痛作用［J］.海峡药学，2000，12（1）：25-27.

［4］胡慧香，张智敏.复方苦豆子栓剂的制备及临床应用［J］.山西中医，2009，25（5）：50-51.

（*通讯作者：胡芳弟）

R28

B

1671-1246（2015）24-0151-03

甘肃省卫生厅2013年资助中医药科研课题（GZK-2012-15）