GC法测定测定消曚眼膏中龙脑和异龙脑的含量

朱雪妍　吕轶峰　冯旭

【摘要】目的：建立GC法测定测定消曚眼膏中龙脑和异龙脑的含量。方法：采用DB-WAX色谱柱（柱长30m，内径0.53mm，膜厚度1μm），载气为氮气，分流比为10：1，柱温为140℃，进样口温度为180℃，检测器温度为200℃。结果：龙脑在0.0317～0.5076μg范围内线性关系良好（r=1.0000），平均加样回收率为99.22%（n=9），RSD为1.69%；异龙脑在0.0196～0.3136μg范围内线性关系良好（r=0.9991），平均加样回收率为98.32%（n=9），RSD为2.22%。结论：本法灵敏、准确，可作为消曚眼膏的质量控制指标。

【关键词】GC；消曚眼膏；龙脑；异龙脑

【中图分类号】R283.6【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2015）20-0014-02

GCDeterminationofBorneolandIsoborneolinXiaomengEyeOintment

ZhuXueyan1LuYifeng1FengXu2

1.GuangxiInstituteforFoodandDrugControl，Nanning530021，China；2.GuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530200，China

Abstract：Objective：ToestablishGCmethodfordeterminationofborneolandisoborneolinXiaomengeyeointment.Methods：TheDB-WAXchromatographiccolumn（30m×0.53mm×1μm）wasadoptedwithnitrogenasthecarriergasandthesplitratioof10：1.Thecolumntemperaturewas140℃，theinjectionporttemperaturewas180℃andthedetectortemperaturewas200℃.Results：Thelinearrangeofborneolwasintherangeof0.0317～0.5076μg（r=1.0000），andtheaveragerecovery（n=9）was99.22%andRSDwas1.69%；Thelinearrangeofisoborneolwasintherangeof0.0196～0.3136μg（r=1.0000），andtheaveragerecovery（n=9）was98.32%andRSDwas2.22%.Conclusion：Thismethodisconvenient，rapid，accurateandreproducible，andcanbeusedforqualitycontrolofXiaomengeyeointment.

Keywords：GC；Xiaomengeyeointment；BorneolandIsoborneol

消曚眼膏是由珍珠粉、冰片及硼砂制成的复方制剂，临床用于角膜炎症，角膜溃疡所致的角膜瘢痕（角膜白班、云翳、斑翳）及角膜混浊，对石灰烧伤、麻疹、水痘、天花、高烧、腹泻等疾病或创伤形成的陈旧性角膜瘢痕等均有良好的疗效。为确保消曚眼膏的临床疗效及有效控制产品质量，研究参考有关文献[1-4]，采用气相色谱法[5-7]对冰片中的龙脑和异龙脑进行测定。该方法专属性强，测定结果准确可靠，适用于消曚眼膏的质量控制。

1仪器与材料

1.1仪器安捷伦公司6890气相色谱仪（FID检测器）；MILLI-Q纯水发生器；梅特勒电子天平。

1.2材料龙脑对照品（批号：110881-200706，含量为99.2%）、异龙脑对照品（批号：1512-200201）由中国药品生物制品检定所提供；消曚眼膏（批号：20111001，广西南珠制药有限公司）；阴性对照样品由广西南珠制药有限公司提供。水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：DB-WAX（柱长30m，内径0.53mm，膜厚度1μm）[8-9]；进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；柱温：140℃；进样量为1μl；分流比：10：1。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取水杨酸甲酯适量，精密称定，加环己烷制成每1ml含5mg的溶液，作为内标溶液。另取龙脑对照品、异龙脑对照品各10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加环己烷使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环己烷至刻度，摇匀，即得。

2.2.2供试品溶液的制备取消曚眼膏约0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入环己烷20ml，称定重量，超声处理（功率320W，频率40KHz）10min，放冷，用环己烷补足减失的重量，摇匀，冷冻离心5min（5000r/min），精密量取上清液10ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环己烷至刻度，摇匀，即得。

2.3系统适应性试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液各1μl注入气相色谱仪，在上述色谱条件下，阴性样品、对照品、样品色谱图见图1。龙脑和异龙脑的保留时间分别为16.3、18.3min；样品中其他成分对龙脑和异龙脑的测定无干扰。各峰与邻近峰达到基线分离，分离度良好（R>1.）。

2.4线性范围精密称取龙脑对照品127.93mg、异龙脑对照品78.41mg，置100ml量瓶中，加环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；分别精密吸取对照品贮备溶液8、6、4、2、1、0.5ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml（浓度5.028mg/ml），加环己烷至刻度，摇匀。进样测定。以对照品进样浓度·内标进样浓度-1为横坐标（X），对照品峰面积·内标峰面积-1为纵坐标（Y）绘制标准曲线，结果龙脑的回归方程为：Y=2.8392X+0.0107（n=6，r=1.0000），在0.0317～0.5076μg范围内线性关系良好；异龙脑的回归方程为：Y=2.7717X-0.0007（n=6，r=0.9991），在0.0196～0.3136μg范围内线性关系良好。

2.5精密度试验对同一供试品溶液，按正文拟订的色谱条件，连续测定6次。结果6次测定龙脑和异龙脑总含量的RSD为0.51%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验精密吸取供试品溶液1μl，分别于0，3，6，9，12，15，18h注入气相色谱仪，测定龙脑和异龙脑总含量，其RSD为0.85%，结果表明供试品溶液在18h内稳定。

2.7重复性试验对同一批样品，分别取样6份，按“2.2.2”项下的方法进行溶液制备，在上述“2.1”项气相色谱条件下进行分析测定，结果龙脑和异龙脑总含量平均值为23.04mg/g，RSD=0.75%（n=6），结果表明，本法的重复性较好。

2.8回收率试验精密称取龙脑对照品127.93mg、异龙脑对照品78.41mg，置100ml量瓶中，加环己烷使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。取九个50ml具塞锥形瓶，分别编号1～9，第1～3精密加入对照品贮备液4.5ml；第4～6精密加入对照品贮备液3ml；第7～9精密加入对照品贮备液1.5ml，用氮气吹干，取已知含量的样品（龙脑含量13.7077mg/g、异龙脑含量9.3323mg/g）约0.25g，共9份，精密称定，分别置以上50ml具塞锥形瓶中，照拟定标准供试品溶液项下的方法制备、测定，计算回收率，结果龙脑和异龙脑回收率分别为99.22%（RSD=1.69%，n=9）、98.32%（RSD=2.22%，n=9）。

2.9样品测定按正文拟订的含量测定方法，测定了6批样品中龙脑和异龙脑含量，样品测定结果见表1。

表16批样品中龙脑和异龙脑含量测定结果

（n=2）

3讨论

3.1样品中的龙脑和异龙脑总含量差异很大，含量最高的为26.2mg/g；含量最低的为7.8mg/g。参照处方量，每1g中含有30mg冰片，由于冰片的挥发性，在生产工艺、贮藏条件及运输过程中均有不同程度的损失而造成龙脑和异龙脑含量差异大。

3.2考察极性柱（DB-WAX）的不同固定液膜厚度、不同内径与弱极性柱（DB-17）对样品测定的影响。结果弱极性柱（DB-17）在相同柱温条件下色谱峰分离不开，而极性柱（DB-WAX）的色谱峰峰形较好，分离良好。由于本品同时对冰片进行樟脑的杂质检查，而使用DB-WAX（30m×0.25mm，0.25μm）樟脑峰与杂质峰分离度欠佳，故选择极性柱DB-WAX（30m×0.53mm，1.0μm）作为测定用色谱柱。另外，本品为油性基质，过多注入气相色谱仪会造成仪器的污染，故选用进样量1μl分流比10：1。

3.3考察水杨酸甲酯和萘两种内标成分，结果二种成分的保留时间分别为24min和23min，二种成分对样品中龙脑和异龙脑峰均无干扰，考虑到萘具有致畸、致癌、致突变作用，故选用水杨酸甲酯作为内标。

3.4由于本品为油性基质，无水乙醇不能将基质分散使测定成分溶解出来，故在无水乙醇溶液中未能检测出龙脑和异龙脑[10]。试验发现，超声处理后，若采用滤过的方式，基质会附在滤纸而使滤过速度极慢，且龙脑和异龙脑都具有挥发性，采用冷冻离心的方式则快速方便。另外，测定结果显示环己烷的提取效果明显优于乙酸乙酯，故选择环己烷作为提取溶剂。

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（收稿日期：2015.07.18）