角鲨烯对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

缪云萍，陈爱瑛，夏志国，诸葛定娟，程　敏，董文彬，郑高利，*

（1．浙江省医学科学院，浙江杭州310013；2.浙江海力生研究院，浙江舟山316000）

角鲨烯对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

缪云萍1，陈爱瑛1，夏志国2，诸葛定娟1，程敏1，董文彬1，郑高利1，*

（1．浙江省医学科学院，浙江杭州310013；2.浙江海力生研究院，浙江舟山316000）

目的：研究角鲨烯对急性酒精性肝损伤的保护作用。方法：60只ICR小鼠随机分为正常组，模型组，阳性组，角鲨烯高、中、低剂量组。正常组和模型组灌胃等体积花生油，阳性组灌胃葵花牌护肝片350 mg/kg；角鲨烯高、中、低剂量组分别灌胃角鲨烯500、250、125 mg/kg，每日1次，30 d后制备急性酒精性肝损伤模型。模型制备16 h后检测肝脏系数，血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和甘油三酯（TG）水平及肝脏丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量。结果：角鲨烯可明显降低血清ALT、AST、TG水平，降低肝组织MDA含量，并提高肝组织GSH含量，且呈明显的剂量依赖性，大剂量还能明显降低肝损伤小鼠的肝脏系数。结论：角鲨烯对小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用，其机制可能与其抗氧化作用有关。

角鲨烯，肝损伤，酒精，抗氧化

角鲨烯（squalene）又名鲨烯，于1906年首次从鲨鱼肝脏中分离得到，化学名为2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯，是一种高度不饱和烃类化合物［1］。角鲨烯具有增强机体免疫能力、抗氧化、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，常被添加到功能性食品和化妆品中［2-3］，但目前尚未见有保肝护肝作用的文献报道。酒精是最常见的肝脏毒物之一，过量饮酒可致肝脏损伤［4］。我国酒类消费人群数量庞大，随着酒类消耗量的增加，人们饮食结构的改变，近年来酒精所致的肝损伤呈逐年上升趋势，酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损伤的第二大病因［5］。目前除戒酒和支持性治疗外，尚无令人满意的酒精性肝损伤防治方法，开发安全有效的防治药物或功能性食品具有重要的临床意义［6］。本研究以酒精灌胃制备小鼠急性酒精性肝损伤模型［7］，观察角鲨烯对急性酒精性肝损伤的保护作用，并探讨其可能的作用机制。

1　材料与方法

1.1材料与仪器

ICR小鼠体重18～22 g，雄性，清洁级，由浙江省实验动物中心提供，动物合格证：0014466，动物许可证SCXK（浙）20080033；角鲨烯含量95%，由浙江海力生生物技术有限公司提供，使用时用花生油配制成25、12.5、6.25 mg/mL的溶液待用；葵花牌护肝片批号：201305197，购自黑龙江葵花药业股份有限公司，碾磨后用花生油配制成17.5 mg/mL的混悬液待用；无水乙醇分析纯，使用时蒸馏水稀释成体积分数50%乙醇；三氯醋酸、硫代巴比妥酸、正丁醇等均为国产分析纯；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）检测试剂盒批号分别为：P1404011、P1310011，购自南京建成生物工程研究所；甘油三脂（TG）检测试剂盒批号：20140328，购自宁波赛克生物科技有限公司；还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒批号：0202251402，购自上海碧云天生物技术有限公司。

BA-815型半自动生化分析仪上海三科仪器有限公司；MagNA Lyser全自动样品匀浆系统美国Roche公司；Sartorius BS100S型电子分析天平北京赛多利斯天平有限公司。

1.2实验方法

1.2.1动物分组与处理小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常组，模型组，阳性组，角鲨烯高、中、低剂量组。小鼠灌胃体积为20 mL/kg，正常组和模型组给予等体积花生油，阳性组给予葵花牌护肝片350 mg/kg，角鲨烯高、中、低剂量组分别灌胃给予角鲨烯500、250、125 mg/kg。动物每天给药1次，连续30 d。末次给药后2 h，模型组及各用药组一次性灌胃给予50%乙醇20 mL/kg，正常组给予等体积蒸馏水。

1.2.2样品采集及指标测定血清处理及指标测定：小鼠在给予酒精后，禁食不禁水16 h，摘眼球取血，于37℃水浴10 min，3000 r/min离心5 min，分离出血清，用生化分析仪测定ALT、AST、TG含量。

肝匀浆处理及指标测定：小鼠取血后脱臼处死，迅速取肝脏，用预冷的0.9%生理盐水清洗，滤纸吸干表面水分，称肝重，并计算脏器系数（脏器湿重/体重× 100）；快速称取0.3 g右叶肝组织，加入预冷的生理盐水，全自动样品匀浆系统制成30%的肝匀浆，硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量，二硫代二硝基苯甲酸比色法测定GSH含量，具体操作按相关说明书进行。

2　结果与分析

2.1一般观察

除正常组外，其余各组小鼠乙醇灌胃后，均表现出不同程度的兴奋、步态不稳、呼吸急促等现象，然后活动开始减少，部分小鼠出现昏睡。角鲨烯各剂量组对酒精诱导的小鼠兴奋及后期的昏睡期状态无明显影响。

2.2角鲨烯对小鼠体重和肝脏系数的影响

由表1可知，连续30 d灌胃给予角鲨烯500、250、125 mg/kg对小鼠体重无明显影响。酒精造模后小鼠肝脏肿胀明显，肝脏系数极显著（p＜0.01）提高。角鲨烯500 mg/kg可抑制酒精诱导的小鼠肝脏肿胀，明显降低肝脏系数。

表1　角鲨烯对小鼠体重和肝脏系数的影响（±s，n=10）Table 1　Effect of squalene on body weight and liver index（±s，n=10）

表1　角鲨烯对小鼠体重和肝脏系数的影响（±s，n=10）Table 1　Effect of squalene on body weight and liver index（±s，n=10）

注：与正常组比较：#代表差异显著（p＜0.05），##代表差异极显著（p＜0.01）；与模型组相比：*代表差异显著（p＜0.05），**代表差异极显著（p＜0.01）；表2、表3同。

0 d　30 d正常组　18.4±2.6　34.1±3.8　3.77±0.13模型组　18.6±2.5　33.5±4.3 4.56±0.28##阳性组　350　18.6±2.9　32.5±4.3 4.09±0.18**角鲨烯高剂量组　500　18.3±2.7　33.6±4.6　4.19±0.30*角鲨烯中剂量组　250　18.3±2.6　33.6±5.8　4.35±0.20角鲨烯低剂量组　125　18.4±2.6　33.3±4.3　4.42±0.56组别　　剂量（mg/kg）体重（g）　　肝脏系数（g/100g）

2.3角鲨烯对血清ALT、AST、TG水平的影响

由表2可知，酒精可诱导肝损伤，使血清中肝功能相关酶ALT和AST水平明显升高，并极显著（p＜0.01）提高血清TG含量。与模型组比较，角鲨烯各剂量组均可显著（p＜0.05）降低血清TG含量，角鲨烯500 mg/kg组的血清ALT和AST水平显著（p＜0.05）降低，250 mg/kg组血清AST水平显著（p＜0.05）降低。总之，角鲨烯可剂量依赖性的降低血清ALT、AST、TG水平。

表2　角鲨烯对小鼠血清ALT、AST及TG水平的影响（±s，n=10）Table 2　Effect of squalene on mouse serum ALT，AST and TG levels（±s，n=10）

表2　角鲨烯对小鼠血清ALT、AST及TG水平的影响（±s，n=10）Table 2　Effect of squalene on mouse serum ALT，AST and TG levels（±s，n=10）

TG（mmol/L）正常组　40.5±7.4　109±36　1.62±0.22模型组　103.7±34.4##171±38#3.17±1.33##阳性组　350　70.3±9.7*　121±37*1.87±0.75*角鲨烯高剂量组　500　76.9±20.4*　132±31*1.77±0.65**角鲨烯中剂量组　250　98.0±32.0　138±29*1.92±0.88*角鲨烯低剂量组　125　89.6±25.8　140±39 1.78±0.83*组别　　剂量（mg/kg）ALT（U/L）AST（U/L）

2.4角鲨烯对肝脏MDA、GSH含量的影响

由表3可知，酒精引起小鼠肝损伤的同时，诱导抗氧化系统损伤，可显著（p＜0.05）降低肝脏GSH水平，并极显著（p＜0.01）提高过氧化产物MDA含量。角鲨烯500、250 mg/kg组均可显著（p＜0.05）升高肝脏GSH含量，降低肝脏MDA水平，呈明显的剂量依赖性。

Protective effects of squalene on acute alcohol-induced liver injury in mice

MIAO Yun-ping1，CHEN Ai-ying1，XIA Zhi-guo2，ZHUGE Ding-juan1，CHENG Min1，DONG Wen-bin1，ZHENG Gao-li1，*
（1.Zhejiang Academy of Medical Sciences，Hangzhou 310013，China；2.Zhejiang Institute of Hailisheng，Zhoushan 316000，China）

Objective：To study the protective effects of squalene on acute alcohol-induced liver injury in mice. Methods：Sixty ICR mice were randomly divided into normal group，model group，positive group，and high，midium，low dose group of squalene.The mice of normal group and model group were given peanut oil，positive group were given 350 mg/kg huganpian，and high，midium，low dose group of squalene were given 500 mg/kg，250 mg/kg，125 mg/kg squalene.After 30 days ethanol were given to all groups except the normal. The level of glutamic-pyruvic transaminase（ALT），glutamic oxaloacetictransaminase（AST），triglyceride（TG）in serum and the content of malondialdehyde（MDA），reduced glutathione（GSH）in liver were detected.Results：Squalene could reduce the level of ALT，AST，TG and MDA，and improve the content of GSH.Conclusion：Squalene could protect against acute alcoholic hepatic injury in mice，possibly due to its antioxidant effect.

squalene；liver injury；alcohol；antioxidant

TS201.1

A

1002-0306（2015）16-0364-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.16.065

2014－12－05

缪云萍（1970-），女，硕士，高级实验师，研究方向：新药开发与评价，E-mail：miaoyp70@163.com。

郑高利（1963-），男，博士，研究员，研究方向：新药药理与毒理，E-mail：gaoli-z@163.com。

国家“重大新药创制”科技重大专项（2013ZX09303005）；浙江省医学重点学科群项目（XKQ-010-001）。