新疆维吾尔族系统性红斑狼疮与HLA-DQA1等位基因相关性研究

李文政 屈园园 李婷婷 康晓静

新疆维吾尔族系统性红斑狼疮与HLA-DQA1等位基因相关性研究

李文政 屈园园 李婷婷 康晓静

目的 探讨新疆维吾尔族系统性红斑狼疮（SLE）与HLA-DQA1的相关性。方法 用聚合酶链反应-序列特异性引物技术，对56例SLE维吾尔族患者和54例维吾尔族健康对照者的HLA-DQA1基因进行研究。结果 SLE组DQA1*0302频率显著高于对照组（χ2=10.032，P=0.004），而SLE组DQA1*0101频率显著低于对照组（χ2=5.676，P=0.017）。结论 HLA-DQA1*0302可能是新疆维吾尔族SLE的易感基因，HLADQA1*0101可能是新疆维吾尔族SLE的保护基因。

红斑狼疮，系统性；HLA抗原；基因频率；维吾尔族；环境

系统性红斑狼疮（SLE）的发病与多种人类白细胞抗原（HLA）等位基因相关，由于HLA具有高度多态性，不同种族、民族的HLA基因频率分布存在明显差异。为了解新疆维吾尔族SLE患者与HLA-DQA1等位基因的相关性，我们应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术，对新疆维吾尔族SLE患者进行HLA-DQA1等位基因分型研究。

一、对象

维吾尔族SLE患者共56例，其中男5例，女51例，年龄9～50岁。来自新疆各地，就诊于本院皮肤科，均符合1997年美国风湿病协会修订的 SLE诊断标准［1］。54例无血缘关系的维吾尔族人为健康对照组，其中男7例，女47例，年龄7～56岁。两组年龄、性别比较，差异无统计学意义，具有可比性。

二、方法

1.血样采集和处理：采取外周静脉血3 ml，保存于EDTA抗凝管中，置于-80℃冰柜备用。采用上海生工生物工程技术服务有限公司生产的基因组DNA快速提取试剂盒，提取研究对象的基因组DNA。

2.序列特异性引物设计及合成：HLADQA1等位基因分型引物根据1995年公布的HLA-II类等位基因核苷酸序列［2］和Olerup等［3］文献设计，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。共设计9个5′端引物和7个3′端引物。组成12对不同的引物对，能鉴定10种有表达产物的HLADQA1等位基因。各引物对扩增的等位基因见表1。

表1 各引物对扩增的等位基因特异性及大小

3.PCR扩增反应体系：总体系体积为20 μ1，其中DNA模板2 μ1，双蒸水4 μ1，内参照引物上、下游各1 μ1，目标引物上、下游各1 μ1，Master mix 10 μ1。

4.PCR扩增条件及扩增产物的检测：94℃预变性10 min进入PCR循环，95℃30 s，59℃1 min，72℃1 min，30个循环后继续延伸7 min，降温至4℃。PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶（含0.5 mg/L溴化乙锭）中电泳，经紫外透射在泳道中见明显DNA条带为阳性。每个样本同时进行12个独立的PCR反应。每一PCR反应体系中均包括对内参照引物C3：5′-GCATCTTGCTCTGTGCAGAT-3′，C5：5′-TGCCAAGTGGAGC ACCCAA-3′。结果判断必须在有内对照引物扩增带出现的前提下进行，根据特异性引物是否得到相应的PCR扩增带而确定个体的DQA1型别。

5.统计分析：采用SPSS13.0统计软件，HLA-DQA1基因频率采用直接计算法，基因频率组之间比较用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

三、结果

SLE患者HLA-DQA1*0101等位基因频率较健康对照组显著降低（χ2=5.676，P＜0.05），SLE患者HLA-DQA1* 0302等位基因频率较正常对照组显著增高（χ2=10.032，P＜0.01）。见表2。

表2 新疆维吾尔族SLE患者与健康对照组等位基因分析表

四、讨论

SLE作为一种自身免疫性疾病，与HLA的相关性研究从20世纪70年代开始一直未间断过。由于HLA抗原分布因人种、民族、地理环境等因素可出现较大的差别，其与SLE相关的抗原型与基因型亦存在较大差异。有研究显示，美国白人SLE与DQA1*0501相关，英国人则与DQA1*0201相关，而黑人主要与DQA1*0401和DQA1*0501相关［4］。陈跃华等［5］通过检索文献，应用Meta分析，结果显示，HLA-DQA1*0102可能是中国汉族人群SLE的易感基因。刘栋华等［6］报道，HLA-DQA1*0101可能是广西壮族SLE的易感基因。苏家光等［7］报道HLA-DQA1*0102可能是广西壮族SLE患者的易感基因。我们通过应用PCR-SSP技术获得了新疆维吾尔族SLE患者和正常人群的基因频率，结果发现，新疆维吾尔族SLE患者HLA-DQA1*0302等位基因频率较健康对照组显著增高（χ2=10.032，P=0.004），提示HLA-DQA1*0302可能是新疆维吾尔族SLE的易感基因。同时我们发现，新疆维吾尔族SLE患者HLA-DQA1*0101等位基因频率较正常对照组显著降低（χ2=5.676，P=0.017），提示HLA-DQA1*0101可能是新疆维吾尔族SLE的保护基因。

本研究结果为探讨维吾尔族人的免疫遗传背景、疾病关联及与其他群体比较提供有价值的参考资料。鉴于本研究病例数尚少，HLA-DQA1*0302是否为新疆维吾尔族SLE的易感基因，HLA-DQA1*0101是否为新疆维吾尔族SLE的保护基因，尚待进一步研究。

［1］Hochberg MC.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum,1997,40（9）:1725.

［2］Marsh SG,Bodmer JG.HLA class II region nucleotide sequences, 1995［J］.Tissue Antigens,1995,46（3（Pt 2）:258-280.

［3］Olerup O,Aldener A,Fogdell A.HLA-DQB1 and-DQA1 typing by PCR amplification with sequence-specific primers（PCR-SSP）in 2 hours［J］.Tissue Antigens,1993,41（3）:119-134.

［4］De Juan D,Martín-Villa JM,Gómez-Reino JJ,et al.Differential contribution ofC4 and HLA-DQ genesto systemic lupus erythematosus susceptibility［J］.Hum Genet,1993,91（6）:579-584.

［5］陈跃华,陈明,范昌斌.中国汉族人群系统性红斑狼疮HLADQ基因多态性的Meta分析［J］.安徽医学,2006,27（3）:175-177.

［6］刘栋华,梁伶,苏家光,等.广西壮族系统性红斑狼疮与HLADQA1基因相关性研究［J］.中国皮肤性病学杂志,2004,18（8）: 449-450,481.

［7］苏家光,梁伶,郑文军,等.广西壮族系统性红斑狼疮与HLADQA1等位基因相关性研究［J］.中华皮肤科杂志,2006,39（4）: 220.

Association of HLA-DQA1 alleles with systemic lupus erythematosus in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region

Li Wenzheng,Qu Yuanyuan,Li Tingting,Kang Xiaojing.Department of Dermatology and Venereology,People′s Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830000,China
< class="emphasis_italic">Corresponding author:Li Wenzheng,Email:pfklqr@163.com

Li Wenzheng,Email:pfklqr@163.com

Objective To assess the association between HLA-DQA1 alleles and systemic lupus erythematosus（SLE）in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.MethodsPolymerase chain reactionsequence-specific primers（PCR-SSP）were used to analyze the HLA-DQA1 gene in 56 patients with SLE and 54 unrelated healthy controls of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.ResultsCompared with the healthy controls,the SLE patients showed significantly increased frequency of HLA-DQA1*0302（χ2=10.032,P=0.004）,but decreased frequency ofHLA-DQA1*0101（χ2=5.676,P=0.017）.ConclusionHLA-DQA1*0302 may be a susceptibility gene,while HLA-DQA1*0101 may be a protective factor for SLE in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.

Lupus erythematosus,systemic;HLA antigens;Gene frequency;Uygur nationality;Environment

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.10.017

新疆维吾尔自治区卫生厅青年科技人才专项基金（2007Y28）

830000乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院皮肤性病科

李文政，Email：pfklqr@163.com

2014-12-11）

（本文编辑：吴晓初）