根除幽门螺杆菌对肠化生和上皮内瘤变VEGF表达的影响

王　锐　高会斌　于永强　杨婕琳　李　多

根除幽门螺杆菌对肠化生和上皮内瘤变VEGF表达的影响

王锐高会斌于永强杨婕琳李多

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp）、血管内皮生长因子（VEGF）与肠上皮化生、上皮内瘤变的相互关系，进一步了解Hp根除治疗对肠上皮化生和上皮内瘤变VEGF表达的影响。方法 选取门诊及胃镜室患者根据病理结果分为肠上皮化生和上皮内瘤变二组，分别测定Hp及VEGF的表达，分析比较Hp及根除治疗对胃黏膜肠上皮化生和上皮内瘤变中VEGF表达的影响。结果 在肠上皮化生、上皮内瘤变中VEGF的表达Hp阳性组均较阴性组升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。肠上皮化生组根除前后VEGF表达阳性率分别为76.5%（26/34）、66.7%（20/30），在上皮内瘤变组根除前后VEGF表达阳性率分别为80%（36/45）、73.8%（31/42），可见VEGF的表达均较治疗前下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 Hp对VEGF表达有上调作用，根除治疗后VEGF表达不能降至正常。

血管内皮生长因子 幽门螺杆菌 根除 肠上皮化生 上皮内瘤变

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF）是血管生成的重要因子，可促进细胞增殖分裂、刺激新生血管形成，其表达水平与胃癌的生物学行为密切相关［1］。胃黏膜肠上皮化生和上皮内瘤变是慢性胃炎至胃癌演变过程中的关键步骤，幽门螺杆菌（Hp）感染是两者的重要致病因素。因此了解其机制及制定预防措施对预防并减少胃癌的发生有重要意义。目前Hp对影响肠上皮化生和上皮内瘤变VEGF表达的机制尚不清楚，同时研究多集中在Hp感染对VEGF表达的影响上，而根除Hp对VEGF表达的变化尚未见报道。本资料旨在通过检测Hp和VEGF，探讨Hp及根除治疗对胃黏膜肠上皮化生和上皮内瘤变中VEGF表达的影响。

1　临床资料

1.1一般资料 选取2012年12月至2013年12月本院消化科门诊胃镜室就诊患者120例。其中男68例，女52例；年龄35～72岁，平均年龄58.9岁。根据胃镜及病理结果分为肠上皮化生组和上皮内瘤变组，对个体情况进行询问。其中肠上皮化生组60例，Hp阳性34例，阳性率56%；上皮内瘤变组 60例，Hp阳性45例，阳性率75%。排除标准：（1）有严重心脑血管、肝、肾疾病，肿瘤，血液系统疾病，胃部手术病史等基础疾病患者。（2）对任何一种药物过敏者。（3）1周内接受过抗生素、铋剂或抑酸药物。（4）既往接受过Hp根除治疗者。（5）1周内有上消化道急性出血。（6）随访过程中退出者。

1.2方法 （1）胃黏膜活检标本置于10%甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋切片，阅片由专业病理科医师进行判断。采用免疫组化进行VEGF检测（鼠抗人VEGF单克隆抗体，北京中杉金桥生物有限公司）。（2）Hp检测［2］：检查前1周停用影响Hp活性的药物。检测前空腹，采用13C呼气试验检测Hp。（3）Hp根除方法［2］：采用四联方案：标准剂量奥美拉唑20mg，2次/d+枸橼酸铋钾胶囊600mg，2次/d（餐前0.5h服）+阿莫西林1000 mg，2次/d+克拉霉索500mg/次，2种抗菌药物（餐后服）。14d治疗结束后避免服用抗生素和抑酸药，并记录其他伴随治疗药物服用情况。于治疗结束停药4周后进行复查14C尿素呼气试验和胃镜，Hp阴性表示根除成功。

1.3结果判断 （1）VEGF阳性判定 VEGF主要位于细胞浆，免疫组化阳性反应为黄-棕褐色颗粒。阳性细胞数计算方法：每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计100个细胞中的阳性细胞数，取均值，以百分数表示细胞阳性指数。染色强度：无染色为0 分；浅黄色为1 分；黄色为2 分；棕黄或棕褐色为3 分。阳性细胞百分率：无阳性细胞为0 分；阳性细胞数＜25%为1分；25%～50%为2 分；50%～75%为3 分；＞75%为4分。2 项相加：0 分为（-）；1～2分为（+），3～4分为（++），5～7分为（+++），均为阳性。（2）13C呼气试验结果阳性者判断为Hp现症感染。

1.4统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1肠上皮化生和上皮内瘤变中Hp检查和VEGF表达情况 在肠上皮化生、上皮内瘤变中VEGF的表达Hp阳性组均较阴性组升高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1　Hp对肠上皮化生、上皮内瘤变中VEGF表达的影响（n）

2.2在肠上皮化生和上皮内瘤变中根除Hp前后VEGF表达情况 共有79例Hp阳性患者接受根除治疗，成功根除72例、失败7例，根除率91.1%。其中肠上皮化生4例，上皮内瘤变组3例。分别对两组根除前后VEGF表达情况比较分析，结果提示肠上皮化生组根除前VEGF表达阳性率76.5%（26/34），根除后VEGF表达阳性率66.7%（20/30）。在上皮内瘤变组根除前VEGF表达阳性率80%（36/45），根除后VEGF表达阳性率73.8%（31/42），可见根除前后两组VEGF表达均较治疗前下降，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2　根除Hp对肠上皮化生、上皮内瘤变中VEGF表达的影响（n）

3　讨论

胃黏膜肠上皮化生和上皮内瘤变作为慢性胃炎至胃癌演变过程中的关键环节，始终被国内外学者所关注。在分子遗传学水平以及临床均做了较多工作，，其中VEGF是研究热点之一。李慧臻等［3］发现VEGF在胃癌前病变中呈过度表达，VEGF的表达随胃黏膜腺体萎缩及肠上皮化生的加重逐渐增强，认为VEGF参与了胃癌前病变的发生及发展过程。贺庆娟等［4］发现VEGF在高级别上皮内瘤变呈一定水平的表达，随着胃黏膜病变程度的加重，COX-2的表达逐渐增强，且COX-2与VEGF的表达成正相关，推测在胃癌的形成过程中，COX-2可能促进了VEGF的表达。Hp是人类胃癌的Ⅰ类（即肯定的）致癌原。既往研究显示Hp感染与胃黏膜炎症、肠上皮化生、上皮内瘤变发生、发展密切相关。可以上调多种致癌因子的表达。本资料结果显示，在肠上皮化生、上皮内瘤变中VEGF的表达Hp阳性组均较阴性组升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示Hp感染可使胃组织中VEGF表达升高。与闻淑军等［5］报道相一致。体外研究亦表明［6］，Hp可上调人胃癌MKN45细胞COX-2的表达，进而导致VEGF的表达增高。但Taghizadeh S等［7］发现，在胃溃疡及胃癌中虽Hp阳性组比阴性组VEGF的表达增高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。Hp感染引起病变组织VEGF高表达机制尚不完全清楚，目前认为可能有以下几种途径：（1）Hp在胃上皮细胞通过低氧诱导因子1α（HIF-1α）依赖性途径诱导的VEGF的产生［8］。（2）可能长期持续Hp感染的刺激，可导致损害黏膜侵袭因素与黏膜自身的防御因素之间失去平衡，吸引中性粒细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞等到达，炎症细胞浸润，释放IL-1、IL-8［9］等细胞因子，启动炎症反应及细胞转化的过程，通过促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，加速血管生成等其他机制，参与促进各种肿瘤的形成过程。（3）Hp诱导VEGF的表达是通过对p38蛋白介导的COX-2及PGE2途径［10］。VEGF表达还可能受其他因素调节［11］，如：高酸和（或）葡萄糖缺乏的微环境；激素包括黄体酮、孕激素、促甲状腺素释放激素等激素均可使VEGF的表达增强；癌基因和抑癌基因有调控其表达的作用，活化了的ras、src、erB2/neu/HER22等癌基因也能上调VEGF，增强体内血管生成；甚至某些肿瘤细胞可以直接激活VEGF基因启动，促进VEGF的合成。由此可见，诱导VEGF分泌的因素可能是多方面的，Hp可能为诱导表达的因素之一。

既往多项研究均发现根除Hp后常可减缓肠上皮化生、上皮内瘤变等胃黏膜病变的发展［12，13］，有利于预防胃癌的发生，根除Hp后是否可逆转胃黏膜萎缩及肠上皮化生方面一直存在争议。本资料根除Hp后VEGF蛋白表达情况结果提示：在根除Hp后VEGF的表达阳性率在肠上皮化生、上皮内瘤变中虽均有下降，但两者差异无统计学意义（P＞0.05）。考虑Hp感染所引起的局部炎症反应以及胃黏膜上皮微环境的改变在分子水平上启动了某些因子，参与了肠上皮化生的形成和维持，导致不可逆的过程。作者认为下列因素可能影响结果：（1）未对Hp的菌株和毒力等因素进行分类。（2）由于胃黏膜从肠上皮化生到癌变是一个漫长的过程。而Hp诱导VEGF上调也需较长时间。是否在根除Hp后一段时间VEGF的表达能够继续下降还要进一步研究。（3）当样本量较大时，结果尚不能确定。寻找拮抗Hp上调VEGF的因子，明确其对肠上皮化生和上皮内瘤变的作用，可能为逆转肠上皮化生的治疗提供新的思路，是今后的研究方向。因此，进一步研究Hp对肠上皮化生及上皮内瘤变的细胞分子调控机制，可能助于阐述胃黏膜病变的逆转问题。

1 张征，毛伯能，钱佶.胃癌组织血管内皮生长因子家族与胃癌转移的关系.中华消化杂志，2012，32（12）：866～867.

2 第四次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告.中华医学会消化病学分会幽门螺杆菌学组/全国幽门螺杆菌研究协作组.中华消化杂志，2012，32（10）：655～661.

3 李慧臻，刘琳.VEGF与胃癌前病变程度相关性的研究.内蒙古中医药，2014，33（4）：102～103.

4 贺庆娟，张博，赵亚楠.不同级别胃黏膜上皮内瘤变组织COX-2和VEGF同步表达的差异性及临床意义.中外健康文摘，2014，7（1）：22.

5 闻淑军，张志广，李熳，等.Hp感染与胃癌组织中MVD及VEGF表达的相关性研究.天津医药，2008，36（2）：99～102.

6 Wu CY， Wang CJ， Tseng CC， et al. Helicobacter pylori promote gastric cancer cells invasion through an NF-kappa B and COX-2-mediated pathway.World J Gastroenterol，2005，11（21）： 3197～3203.

7 Taghizadeh S，Sankian M，Ajami A，et al.Expression levels of vascular endothelial growth factors a and C in patients with peptic ulcers and gastric cancer. J Gastric Cancer，2014，14（3）：196～203.

8 Kang MJ，Song EJ，Kim BY， et al.Helicobacter pylori Induces Vascular Endothelial Growth Factor Production in Gastric Epithelial Cells Through Hypoxia-Inducible Factor-1α-Dependent Pathway. Helicobacter，2014，19（6）： 476～483.

9 Kitadai Y，Sasaki A，Ito M，et al.Helicobacter pylori infection influences carcinoma of genes related to angiogenesis and invasion in human gastric earcinoma cells.Biochemical and Biophysical Research Communications，2003，311（4）：809～814.

10 Liu N，Wu Q，Wang Y，et al.Helicobacter pylori promotes VEGF expression via the p38 MAPKmediated COX2PGE2 pathway in MKN45 cells.Mol Med Rep，2014，10（4）：2123～2139.

11 赵丽微，杨淑艳，方青. VEGF表达的调节及与肿瘤的相关研究.吉林医药学院学报，2007，28（3）：167～169.

12 Wang J，Xu L，Shi R，et al.Gastric atrophy and intestinal metaplasia before and after Helicobacter pylori eradication：ameta-analysis. Digestion，2011，83（4）：253～260.

13 Kodama M，Murakami K，Okimoto T，et al.Ten-year prospective follow-up of histological changes at five points on the gastric mucosa as recommended by the updated Sydney system after Helicobacter pylori eradication.J Gastroenterol，2012，47（4）：394～403.

Objective To investigate the relationships Helicobacter pylori，VEGF，intestinal metaplasia，and intraepithelial neoplasia，to further understand the mechanisms of H. pylori pathogenic mechanisms in intestinal metaplasia and intraepithelial neoplasia. Methods Patients from outpatient and endoscopy room were divided into intestinal metaplasia and intraepithelial neoplasia groups based on pathological fi ndings. Helicobacter pylori and VEGF expression were measured respectively.and the change was analysised and compared VEGF expression after Hp eradication for gastric intestinal metaplasia and intraepithelial neoplasia. Results The VEGF expression of H. pylori-positive tissues was higher than H. pylori-negative ones in intestinal metaplasia and neoplastic epithelial groups，the difference was statistically signifi cant（P＜0.05）. The expression of VEGF compared before and after the eradication was 76.5 %，66.7% in intestinal metaplasia group and 80%，73.8%.In intraepithelial neoplasia.The VEGF expression decreased after Helicobacter pylori eradication treatment，but the difference was not statistically significant（P＞0.05）.Conclusion Helicobacter pylori upregulated of VEGF expression，however VEGF expression after eradication therapy is not returned to normal.

VEGF Helicobacter pylori Eradication Intestinal metaplasia Intraepithelial neoplasia

075000 河北 北方学院附属第一医院