CD151和MMP-9在膀胱癌中的表达及意义

虞伟星　何非平　陈　杰　张　健　章更生

CD151和MMP-9在膀胱癌中的表达及意义

虞伟星何非平陈杰张健章更生

目的 探讨人类白细胞分化抗原151（CD151）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在膀胱癌中的蛋白表达及其与膀胱癌发生﹑发展﹑复发等的关系。方法 采用免疫组织化学染色法检测正常组织与膀胱癌组织中CD151和MMP-9的蛋白表达，并分析两者在膀胱癌中表达的相关性。结果 CD151和MMP-9在膀胱正常组织中表达的阳性率分别为20%和15%，在膀胱癌组织中表达阳性率分别为58%和62%，CD151和MMP-9在膀胱正常组织和膀胱癌组织中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。两种蛋白的阳性表达率与肿瘤的病理分级﹑分期及复发有密切关系（P＜0.05）。膀胱癌中CD151和MMP-9两种蛋白的表达强度具有正相关性（rs=0.356）。结论 CD151和MMP-9在膀胱癌组织中异常高表达并与其发生﹑发展及复发有密切关系，联合检测可作为判断膀胱癌生物学行为的重要指标。

人类白细胞分化抗原 基质金属蛋白酶-9 膀胱癌 免疫组织化学染色

膀胱癌是最常见的泌尿系恶性肿瘤，在美国男性恶性肿瘤发病率中占第4位，女性占第7位［1］。在我国膀胱癌是第1位的泌尿系恶性肿瘤［2］。在所有初诊的非肌层浸润膀胱癌中，全膀胱切除术5年生存率50%左右［3］。研究表明CD151和 MMP-9在癌细胞的侵袭和转移中有重要作用。作者检测白细胞分化抗原151（CD151）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在膀胱癌的表达，以评价两者在膀胱癌发生、发展和复发中的价值。

1　临床资料

1.1一般资料 收集2005年1月至2008年1月本院手术治疗患者膀胱癌组织112例和同期手术的正常组织20例石蜡包埋标本，所有标本临床资料完整，且经病理证实，术前均无放、化疗及免疫治疗史。112例膀胱癌组织中男80例，女32例；年龄45～83岁，中位年龄69岁。20例正常组织为对照组：其中男16例，女4例；年龄45～84岁，中位年龄66岁。收集患者的临床资料包括基本资料，肿瘤大小、数目，病理分级、分期（依据AJCC2002标准）、复发情况等。所有标本常规石蜡切片4μm厚，65～70℃烤片1～1.5h。

1.2试剂 CD151单克隆抗体购自Abcom公司，工作液浓度为1：100，MMP-9为即用型试剂，与SP试剂盒及DAB显色液均购自ADKO公司。石蜡切片机：LEICA RM2135（德国）。光学显微镜：OLYMPUS BX41（日本）。

1.3免疫组化方法 膀胱组织经福尔马林固定，石蜡包埋，厚4μm，石蜡切片常规脱蜡水化，柠檬酸pH6.0 高温修复抗原，切片于二甲苯中脱蜡，以0.3%的H2O2孵育10min，山羊血清封闭，一抗4℃冰箱孵育过夜，依次再加生物素标记二抗和辣根过氧化物标记的三抗室温孵育，DAB显色，苏木精衬染，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4结果判定 （1） 采用半定量积分法判定结果。显色度按细胞着色深浅计分：基本无着色：0分；浅黄：1分；浅棕：2分；深棕：3分。着色面积根据阳性细胞所占百分比计分：无阳性细胞为0分；阳性细胞＜10%为1分；阳性细胞11%～50%为2分；阳性细胞51%～75%为3分；阳性细胞＞76%为4分。两种分值相乘≥3分，为表达阳性，≤2分为表达阴性。（2）Image-ProPlus5.1专业图像分析系统下测量阳性细胞平均光密度值（IODmean），将数据进行统计学分析。

1.5统计学分析 采用SPSS 17.0软件。计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，相关性分析采用等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1CD151及MMP-9蛋白的表达定位 CD151主要分布于细胞膜上（见图1）。本组112例膀胱癌患者中，CD151阳性表达65例（58%），20例正常组织阳性表达4例（20%）。肿瘤组织中CD151阳性表达明显高于对照组（P＜0.05）。MMP-9主要表达于细胞质（见图2），以肿瘤细胞表达为主。112例膀胱癌患者中，MMP-9阳性表达69例（62%），20例正常组织阳性表达3例（15%）。肿瘤组织中CD151阳性表达明显高于对照组（P＜0.05）。

图1　膀胱癌中CD15表达阳性（SPx200

图2　膀胱癌中MMP-9表达阳性（SPx200）

2.2CD151及MMP-9在膀胱癌与正常膀胱组织中的蛋白表达比较 见表1。

表1　CD151和MMP9在膀胱癌组织和正常组织中的平均光密度值比较（x±s）

2.3CD151及MMP-9蛋白表达与膀胱癌临床病理特征的关系 见表2。

表2　膀胱癌CD151和MMP-9蛋白表达与临床病理学因素之间的关系［n（%）］

2.4CD151和MMP-9在膀胱癌中表达的相关性 据CD151和MMP-9在膀胱癌中表达IODmean进行相关性分析，两者具有明显正相关性（rs=0.356）。

3　讨论

3.1CD151在膀胱癌发生、发展过程中的意义 CD151是四跨膜蛋白家族（TM4SF）重要成员。越来越多的学者认为CD151可以作为肿瘤预后的一个新的指标［4］。本资料显示CD151在膀胱癌中的表达明显高于对照组，差异有统计学意义。CD151的表达与肿瘤分期、分级及复发有关，而与年龄、性别、肿瘤数量、大小无关，且CD151在这些肿瘤组织中的表达越高，患者的肿瘤分级越高，恶性度越高，这与多数文献报道结果一致。本资料结果提示CD151可能在膀胱癌的发生发展中起重要作用，初步判断CD151蛋白在膀胱癌中的表达可作为膀胱癌进展、演化有关的重要指标之一，对膀胱癌的预后评估及靶向治疗等有一定指导意义。

3.2MMP-9在膀胱癌发生、发展过程中的意义 MMP-9又称明胶酶B（gelatinase B），研究表明，MMP-9在多种恶性肿瘤的发生、发展和侵袭、浸润过程中发挥着重要的作用［5］。本资料MMP-9阳性表达率61.6%，其表达与分级、分期、有无复发显著相关，而与年龄、性别、肿瘤大小、数目无关。实验中发现MMP-9阳性表达主要分布在细胞间质、血管临界面以及癌侵入膀胱深层组织前缘，特别是呈浸润性生长的癌组织周围表达较强，呈不均匀性分布，这或许表明膀胱癌细胞可能通过分泌MMP-9直接破坏基底膜和肿瘤基质，从而浸润周围组织并进行的肿瘤浸润和转移。表明MMP-9的过表达对膀胱癌的进展可能具有非常重要的意义，进一步研究MMP-9的作用机制对揭示膀胱癌初期进展中的生物学基础具有重要意义。

3.3CD151和MMP-9相关性的意义 膀胱癌的进展和演化是一个多基因、多因子共同作用的复杂过程。最新研究表明CD151是MMPs的重要调控子，它通过调节MMPs促进浸润转移［6］。本资料显示CD151和MMP-9蛋白在膀胱癌中的表达成正相关（rs=0.335，P=0.026 ），提示两者可能有协同作用，结合以上研究，作者推断CD151可能通过激活基质金属蛋白酶MMP-9对膀胱癌的进展、演化以及复发发挥重要作用。但二者的具体作用机制还有待进一步研究。

综上所述，CD151和MMP-9在膀胱癌的发生、发展过程中具有重要的作用，联合检测CD151和MMP-9表达可为膀胱癌的诊断及治疗提供参考依据。有助于指导临床治疗，从而进一步提高膀胱癌的治疗效果。

1 Jemal A， Siegel R， Xu J. Ward E. Cancer statistics.CA Cancer J Clin，2010，6（10）：277～300.

2 Zhang W， Xiang YB， Liu ZW， et al. Trends analysis of common urologic neoplasm incidence of elderly people in Shanghai.Cancer，2012，23（4）：555～558.

3 Zlotta AR， Roumeguere T，Kuk C， et al. Select screening in a specific high-risk population of patients suggests a stage migration toward detection of non-mscle-invasive bladder. Cancer Eur Urol，2010， 59（5）：1026～1031.

4 Zoller M Z. Gastroenterol.Gastrointestinal tumors： metastasis and tetrasp anins，2006，44（7）：573～586.

5 Zeng ZS.Prediction of colorectal cancer relapse and survival via tissue RNA levels of matrix metalloproteinase 9.J Clin Oncol， 1996， 14（12）：3133～3140.

6 Li ZJ， Jiang WG， Wang JO. CD151 and MMP-7 Expression and Its Significance in Colorectal Cancer. Chinese J Clin Oncol， 2012，39（7）：392～395.

312300 浙江省绍兴市上虞人民医院泌尿外科