白芍总苷治疗寻常型银屑病疗效评价及对Th17/Treg相关细胞因子的影响

陈星宇王小艳张洪英∗毕健平谢少梅

·论著·

白芍总苷治疗寻常型银屑病疗效评价及对Th17/Treg相关细胞因子的影响

陈星宇1王小艳1张洪英1∗毕健平1谢少梅2

目的： 评价白芍总苷（TGP）治疗寻常型银屑病的疗效，比较治疗前后患者血清Th17/Treg相关细胞因子水平变化。方法： 32例患者给予口服白芍总苷胶囊0.6 g，日3次，治疗8周。ELISA检测患者TGP治疗前后外周血IL-17、IL-22、IL-23和IL-35的浓度。计算治疗前后患者PASI，分析其与细胞因子的相关性。结果： 治疗前PASI评分为10.82±7.75，治疗8周后为2.46±2.24（P＜0.05）。治疗8周后患者IL-17、IL-22和IL-23较治疗前明显降低（P＜0.05），IL-35明显升高（P＜0.05）。治疗前后患者血清IL-17、IL-22、IL-23水平与PASI评分呈正相关。结论： TGP对寻常型银屑病治疗有效，可能通过调节Th17/Treg平衡起到治疗作用。

银屑病； 白芍总苷； IL-17； IL-22； IL-23； IL-35

白芍总苷（TGP）主要有抗炎、调节免疫功能、影响细胞增殖、止痛、保肝等。现在普遍认为CD4+T细胞是银屑病发病的关键细胞。1Th17细胞和调节T细胞（Treg）是新发现的两种新型的CD4+T细胞亚群。较多研究证实Th17细胞和Treg在慢性炎症性疾病和自身免疫性疾病的发生发展中具有重要作用，二者都可以通过细胞因子依赖的方式发挥作用，在功能上互相拮抗，共同维持机体免疫状态的相对稳定。2有报道在银屑病的发病中存在Th17/Treg失衡。3近年研究表明TGP治疗银屑病取得较好疗效，TGP能调节Th1/Th2的平衡，抑制Th17细胞的活化。4-8而TGP对Th17/Treg平衡的作用研究较少，我们检测了TGP治疗前后患者血清中Th17及Treg相关细胞因子水平，以探讨其治疗银屑病的机制。

1　对象和方法

1.1对象 2012年10月至2014年10月我院门诊就诊的寻常型银屑病（psoriasis vulgaris，PV）患者32例，男19例，女13例，年龄14～64岁，平均38.13岁。病程5个月～40年，平均11.28年。银屑病患者的皮损面积和严重程度按PASI评分为2.45～27.11，平均10.82。排除标准：对药物成分有过敏或光敏史、近2个月接受过光疗、全身或局部使用过抗银屑病药物（免疫抑制剂、维A酸类药物、糖皮质激素、维生素D3衍生物等）、妊娠或哺乳期女性、有其他严重器质性疾病。另选31例志愿者作为对照组，男18例，女13例，年龄17～53岁，平均年龄35.26岁。与病例组比较，年龄、性别差异无统计学意义。本研究经过医院伦理委员会批准。患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法 病例组口服白芍总苷胶囊0.6 g，日3次，外用地塞米松尿素乳膏（我院自制，批准文号：鲁药制字H02080130）日2次；治疗开始及治疗4周、8周时检查血、尿常规、肝功能、血脂，对患者进行PASI评分评价，并抽取静脉EDTA抗凝血。

1.3临床疗效评价 对患者治疗前、后进行PASI评分，并对其不良反应进行记录。治愈：PASI评分下降≥90%；显效：PASI评分下降60%～89%；好转：PASI评分下降25%～59%；无效：PASI评分下降＜25%。有效率以治愈加显效计。

1.4主要仪器和设备 清晨空腹抽取静脉血5 mL，肝素钠抗凝，低温离心后取血浆保存于-70℃冻存待检。应用ELISA试剂盒（人IL-17、IL-22、IL-23、IL-35 ELISA试剂盒为美国R&D公司产品）检测IL-17、IL-22、IL-23和IL-35的表达水平，建立标准曲线，具体操作步骤严格按照试剂盒说明进行。采用酶标仪（Model 550型，美国BIO-RAD公司生产）测定450 nm处吸光值，根据标准曲线读取样品浓度。同时设置空白对照和阴性对照以保证检测结果的可靠性。

1.5统计学方法 使用SPSS 17.0统计学分析软件进行统计分析，检测结果以 ¯x±s表示，采用t检验和Mann-Whitney非参数检验进行均数的比较，率的比较采用χ2检验，相关性研究采用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1临床疗效比较 见表1。病例组患者治疗前PASI评分为10.82±7.75，治疗4周及治疗8周较治疗前降低（Z=2.59，P＜0.05；Z=5.67，P＜0.01），治疗8周较4周PASI评分差别有统计学意义（Z=4.22，P＜ 0.01）。治疗4周和8周的有效率比较差别有统计学意义（χ2=6.49，P＜0.05）。

表1　白芍总苷治疗银屑病临床疗效评价

2.2不良反应 病例组检查血、尿常规、肝功能、血脂均无明显异常。有3例出现暂时性大便次数增多（3～6次/日）及大便性状改变（黄色软便），约1～2周逐渐改善，患者可以耐受，停药后症状消失。

2.3银屑病病例组和健康对照组的血清Th17/Treg相关细胞因子比较 见表2。病例组IL-17、IL-22、IL-23的水平高于正常对照组，差异均有统计学意义（Z=6.82，Z=6.82，Z=6.42，均P＜0.01；）。病例组外周血IL-35浓度较正常对照降低，但无统计学差异（t =1.98，P＞0.05）。

2.4不同疗程患者血清中Th17/Treg相关细胞因子比较 见表2。治疗4周后患者IL-17、IL-22、IL-23的水平低于治疗前，差异均有统计学意义（t=2.84，t= 30.28，t=30.95，均P＜0.05）。治疗8周后患者IL-17、IL-22、IL-23较治疗前明显降低（t=15.43，t= 30.28，t=30.95，均P＜0.05）。治疗8周较4周患者IL -17、IL-22、IL-23降低明显（t=19.55，t=30.28，t= 30.95，均P＜0.05）。治疗4周后患者IL-35与治疗前无明显差异（t=0.588，P＞0.05）。治疗8周后患者IL -35较治疗前明显升高（t=5.51，P＜0.05）。治疗8周较4周升高明显（t=9.37，P＜0.01）。

表2　白芍总苷治疗前后血清细胞因子比较

2.5治疗前后患者血清中Th17/Treg相关细胞因子水平与PASI评分的相关性分析 32例PV患者治疗前及治疗8周后血清IL-17水平与其PASI评分均呈正相关（r=0.54，P=0.03；r=0.67，P=0.01）。治疗前及治疗8周后血清IL-22水平与其PASI评分呈正相关（r=0.76，P=0.01；r=0.68，P=0.04）。治疗前及治疗8周后血清IL-23水平与其PASI评分呈正相关（r =0.79，P=0.01；r=0.44，P=0.02）。治疗前及治疗8周后血清 IL-35浓度与 PASI评分无相关性（r= -0.048，P=0.78；r=-0.145，P=0.42）。

3　讨论

本研究中，TGP可使寻常型银屑病患者的皮损明显消退，症状缓解，PASI评分随治疗时间的延长而逐步降低。TGP充分发挥作用要在治疗4周之后，且治疗的不良反应少，最为常见的不良反应为腹痛、腹泻，患者可以耐受。

在银屑病的发病过程中，Th17细胞具有很强的促炎作用，产生IL-17、IL-22等细胞因子，其中IL-17是Th17的标志性细胞因子。IL-17与IL-22有协同作用，IL-17诱导IL-22的自分泌，IL-22能促进银屑病炎症和表皮的增厚。IL-23刺激Th17的扩增和维持，是Th17细胞亚群的关键因子。银屑病患者的皮损组织和外周血中均存在Th17细胞及相关因子增多现象。9Treg维持机体自身免疫耐受。Treg可分泌TGF-β、IL-10、IL-35。IL-35是有免疫负调作用的新型细胞因子，主要功能为抑制效应T细胞（Teff细胞）的活性，诱导iTR35，抑制Th17细胞活化。10Treg在银屑病皮损中数量低，而且还存在Treg功能缺陷，在不同病程患者外周血CD4+CD25+Treg的水平存在显著差异，提示其与PV发生和病程发展的密切关系。11，12寻常型银屑病患者外周血Th17细胞及IL-17增多、Treg及IL-10显著下降，证实银屑病的发病中存在Th17/Treg失衡。9本研究中患者外周血中Th17相关细胞因子IL-17、IL-22、IL-23水平高于正常对照，Treg相关细胞因子IL-35较正常对照低，支持上述观点。

白芍总苷药理作用广泛，研究证实TGP可以降低银屑病关节炎患者血清中Th1相关细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α水平。4TGP治疗寻常型银屑病安全有效，且随着病情好转，患者外周血IL-17 mRNA、IL-23 mRNA水平下降，外周血清IL-17、IL-22、IL-23水平降低，提示TGP可调节Th17相关细胞因子的表达。5-8我们同样发现白芍总苷降低Th17相关细胞因子的表达，且随疗程延长，Th17相关细胞因子水平明显降低。同时白芍总苷可以升高Treg相关细胞因子IL-35水平，4周时无明显差异但8周时升高明显。有报道称IL-35在炎症后期迅速高表达，消退期寻常型银屑病外周血清IL-35显著高于进展期、稳定期及正常对照，推断IL-35在疾病早期可能无明显作用，在疾病恢复期，伴随Treg细胞功能修复呈现高表达趋势，发挥抑炎效应，13本研究的结果支持上诉观点。IL-35与PASI评分无相关性，说明血清IL-35与银屑病严重程度无明显关联，不能将其作为评价疾病严重程度的指标还是因样本量小、观察时间短等因素导致研究结果未能反映实际，有待今后进一步研究。伴随着治疗时间延长，TGP可以降低患者外周血Th17相关细胞因子IL-17、IL-22、IL-23，增高Treg相关细胞因子IL-35的水平，从而促进Th17/Treg趋于平衡，达到治疗PV的目的。TGP促进Th17/Treg平衡的作用在治疗4周之后才可充分发挥。这在一定程度上与临床观察到TGP起效较慢符合。我们前期体外实验证实TGP可以抑制 HaCaT细胞的增殖及VEGF和IL-23、IL-18的表达，呈现低浓度促进和高浓度抑制的双向调节作用。14，15本实验发现TGP体内对细胞因子作用存在治疗时间依赖性，药物浓度是否在其中有影响，尚需进一步证实。

综上所述，Th17/Treg参与了寻常型银屑病发病，白芍总苷通过对Th17/Treg的作用，在一定程度上逆转病程，但调节的具体机制，尚待进一步研究明确。

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（收稿：2015-05-25 修回：2015-07-09）

Therapeutic efficacy of total glucosides of paeony in the treatment of psoriasis vu lgaris and the effects on the levels of cytokines related to Th17 and Treg cells

CHEN Xing-yu，WANG Xiao-yan，ZHANG Hong-ying，et al.Department of Dermatology，Qingdao Municipal Hospital，Qingdao，266011

Objective：To assess the efficacy of total glucosides of paeony（TGP）in the treatment of psoriasis vulgaris（PV）and the effects on the levels of cytokines related to Th17 and Treg cells.M ethods：Thirty two patients were treated with TGP，0.6 g，three times one day for 8 weeks.The levels of IL-17，IL-22，IL -23 and IL-35 in serum were detected by ELISA.PASIwas assessed and the correlations between PASIand cytokines were analyzed before and after treatment.Results：PASIwas 10.82±7.75 before the treatment and was declined to 2.46±2.24 after treatment for 8 weeks（P＜0.05）.The levels of IL-17，IL-22 and IL-23 were significantly decreased and the level of IL-35 was increased after 8 weeks treatment（P＜0.05）.There was a positive correlation between the levels of IL-17，IL-22 and IL-23，and PASI.Conclusion：TGP is effective in the treatment of psoriasis vulgaris，which may be through regulating Th17/Treg balance.

psoriasis；total glucosides of paeony；IL-17；IL-22；IL-23；IL-35

青岛市科技局课题（编号：10-3-3-4-20-nsh）

1青岛市市立医院皮肤科，260011

2青岛莱西市皮肤病医院，266600