速效牙痛宁酊中芫花酯甲的限量测定

杜仙娥 付联群

（湖北省荆门市第二人民医院，湖北 荆门 448000）

速效牙痛宁酊中芫花酯甲的限量测定

杜仙娥 付联群

（湖北省荆门市第二人民医院，湖北 荆门 448000）

目的 研究速效牙痛宁酊中芫花酯甲的限量测定方法。方法 采用Agilent HC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈：0.01%醋酸溶液为流动相，采用梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温35 ℃，检测波长238 nm，芫花酯甲在7.50～150.0 μg/mL浓度范围内有良好线性关系（r=0.9999），平均加样回收率为98.9%，RSD为1.09%。结果 经HPLC测定其芫花酯甲的含量为5.02 μg/mL对10批制剂进行检测其含量均＜6.0 μg/mL。 结论 本方法灵敏度高、准确、重复性好、专属性强，可用于测定速效牙痛宁酊中芫花酯甲的限量。

芫花酯甲；速效牙痛宁酊；限量测定

速效牙痛宁酊为原卫生部颁药品标准中药成方制剂第17册（WS3-B-3315-98）收载。本方由芫花根、地骨皮两味草药组成。具有活血化瘀，理血止痛。用于风虫牙痛，龋齿性急、慢性牙髓炎，牙本质过敏，楔状缺损［1］。原标准中只有理化鉴别和检查项，缺乏对制剂中药材的定性定量控制，无法对制剂原料药材进行品质管控，制剂工艺的科学性和稳定性无法提供科学依据，更是无法控制成品的内在质量，临床用药疗效及安全得不到保障。本制剂在使用过程中未见不良反应。芫花根为瑞香科植物芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.的干燥根，用于治疗水肿等，外用可用于治疗风火牙痛。但芫花根具有一定毒性，在本制剂中应严格控制其毒性成分——芫花酯甲的含量。有报道在临床应用芫花根的时候可以去除体积较大的木心，直接应用根皮，或用水浸渍后再使用［2］。为了提高本制剂用药的安全性，有必要对痕量毒性成分芫花酯甲进行限量检查，本实验建立了速效牙痛宁酊中芫花酯甲含量的快速测定方法。

表2　加样回收率试验结果

1　仪器与试药

Dionex-U3000液相色谱仪（Dionex公司，Dionex Chemeleon色谱工作站）；Mettler Toledo MS104S型电子天平（d=0.01 mg，瑞士Mettler Toledo）公司；芫花酯甲对照品（中国中医科学院中药研究所提供，紫外、红外、1H- NMR、13C- NMR鉴定结构，HPLC检测纯度均＞98%，符合含量测定的要求）；速效牙痛宁酊及缺芫花根的阴性对照样品（自制，规格：50毫升/瓶）乙腈（天津大茂，色谱纯）；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥器中干燥至恒重的芫花酯甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含15.8 μg的溶液，即得。

2.2供试品的制备：精密量取速效牙痛宁酊10 mL摇匀，微孔滤膜滤过（孔径0.22 μm），取续滤液，即得。同法制得不含芫花根的阴性对照样品。

2.3系统适应性实验与色谱条件：采用以乙腈：0.01%醋酸溶液为流动相，采用梯度洗脱［3-5］，色谱柱为：Agilent HC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速1.0 mL/min，柱温35 ℃，检测波长238 nm，进样量为：10 μL，在此色谱条件下，芫花酯甲色谱峰理论板数不小于4000，分离度＞1.5。色谱图见表1和图1。

2.4线性关系、检测限及定量限考察：精密吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，摇匀，得到浓度为0.79、1.58、3.16、7.90、12.64、15.80 μg/mL的芫花酯甲的对照品溶液。分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得到回归方程为：Y=2.1156X+0.5483，r=0.9999；结果表明芫花酯甲在0.79～15.80 μg/mL浓度范围内线性关系良好。根据信噪比S/N=3确定芫花酯甲检测限为0.08 μg/mL，根据信噪比S/N=10确定芫花酯甲定量限为0.27μg/mL。

2.5精密度试验

表3　样品测定结果（n=4）

表1　梯度洗脱程序

图1　色谱图

2.5.1日内精密度：分别精密吸取芫花酯甲低、中、高浓度对照品溶液（0.79、3.16、15.80 μg/mL）10 μL，重复进样5次，记录峰面积，RSD分别为1.62%、1.24%、1.58%（n=5），日内精密度试验良好。

2.5.2日间精密度：分别精密吸取低、中、高浓度（浓度同日内精密度）对照品溶液各10 μL，每日进样3次，连续进样3 d，记录峰面积，RSD分别为1.89%、2.02%、1.76%（n=5），日间精密度试验结果符合规定。

2.6稳定性试验：取已制备好的速效牙痛宁酊供试品溶液，室温下分别在0、3、6、12、24 h进样测定，记录色谱峰面积，计算其RSD为1.86%，表明处理后的速效牙痛宁酊供试品溶液室温下24 h内稳定。

2.7重复性试验：取同一批速效牙痛宁酊样品（批号20130708）6份，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，依法测定，结果芫花酯甲的平均含量为5.02 μg/mL，RSD为1.29%。

2.8加样回收率试验：称取重复性实验已测定含量的速效牙痛宁酊样品（批号20130708）9份，每份5.0 mL，置10 mL量瓶中，分别加入芫花酯甲对照品溶液（浓度15.80 μg/mL）1.0、1.5、2.0 mL（3种不同水平，各3份），加甲醇至刻度，摇匀，按上述方法同法制备供试品溶液，进样10μL。按外标两点法计算芫花酯甲含量，结果见表2。

2.9限量测定：按上述色谱条件对5批样品进行含量测定，结果见表3。

3　讨 论

芫花始载于《神农本草经》具有泻水逐饮、解毒杀虫的功效。因毒性较强，古代一直以其炮制品入药。化学成分研究表明，芫花根主要含有黄酮、香豆素和萜类化合物。现代药理研究表明，芫花根中的二萜原酸酯类化合物——芫花酯甲为其泻下逐水和不良反应的主要组分，该成分具有强烈的刺激性，对皮肤、黏膜系统有较大的毒害作用［6］。因此通过对芫花根及其制剂中芫花酯甲的含量测定可以有效的控制其质量和保证临床用药的安全性。芫花及芫花根经炮制后芫花酯甲含量下降很多，经研究发现，醋煮品中芫花酯甲含量下降为最多，为其降低毒性的最佳炮制方法。

目前，市场上含芫花及芫花根的制剂中均为规定芫花酯甲的含量限度。给用药安全留下了很大的隐患，建议国家药典委员会及相关药监部门制定相应标准［7］。本文速效牙痛宁酊中芫花酯甲的检测限为5.02 μg/mL，主要用法为外用适量，涂擦患牙处，或用药棉蘸取药液1～2滴塞入龋齿窝内。避免了内服造成的用药风险。鉴于目前均无芫花酯甲的含量限度规定，且本制剂一直沿用至今尚无不良反应报道，因此本文暂定速效牙痛宁酊中芫花酯甲的检测限为6.0 μg/mL。结果表明，本方法准确、简单、重现性好、操作简便。

［1］卫生部药典委员会.WS3-B-3315-98中华人民共和国卫生部药品标准［S］.北京：人民卫生出版社，1998.

［2］应百川，王成瑞，周炳南，等.芫花根有效成分的研究［J］.化学学报，1975，35（1）：103-107.

［3］韩伟，章军，吴立军，等.芫花根质量标准研究［J］.中国中医药信息杂志，2009，16（8）：45-46.

［4］黄兰岚，李娆娆，原思通，等.不同产地芫花药材中芫花酯甲含量比较［J］.中成药，2008，30（10）：附10-12.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化学工业出版社，2010：148.

［6］马天波，刘思贞，徐国永，等.芫花条化学成分的研究［J］.中草药，1994，25（1）：7.

［7］林武俊，陈小玉，刘可福.跳骨片中马兜铃酸的限量测定［J］.亚太传统医药，2014，10（10）；37-38.

282.710.5

B

1671-8194（2015）27-0050-03