苦参碱制剂及其透皮制剂的皮肤刺激性试验

杨良月　常建华　曹晓东　吴树清*　王新生，3　王 赫　王 乔　钱琳娜

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特　010018；

2.内蒙古农牧业科学院，内蒙古呼和浩特　010031；

3.内蒙古乌兰察布市冷冻精液站，内蒙古乌兰察布　012000）

苦参碱制剂及其透皮制剂的皮肤刺激性试验

杨良月1常建华2*曹晓东1吴树清1*王新生1，3王 赫1王 乔1钱琳娜1

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特010018；

2.内蒙古农牧业科学院，内蒙古呼和浩特010031；

3.内蒙古乌兰察布市冷冻精液站，内蒙古乌兰察布012000）

目的：观察苦参碱制剂和苦参碱透皮制剂作为外用药的安全性。方法 根据《化妆品卫生规范》（2007年版），对家兔进行皮肤刺激性实验。结果：苦参碱制剂对皮肤无刺激性；苦参碱透皮制剂对皮肤有轻度刺激。结论：苦参碱制剂及苦参碱透皮制剂外用安全。

苦参碱透皮剂皮肤刺激性

苦参碱最早是从苦参植物是从苦豆子中提取、分离、提纯的一种单生物碱，国内外调查研究发现其具有抗寄生虫和抑菌消炎作用，尤其对蠕虫类1、原虫类、体外寄生虫均有良好的治疗效果，前提为进一步探讨临床用药的安全性和透皮剂对苦参碱透皮吸收的促进作用，设计了皮肤刺激性试验，旨在研究苦参碱制剂经皮给药后在不影响抗寄生虫的同时其的安全性问题。

1　试验材料

试验药品：苦参碱透皮制剂，规格为500 ml∶25 g；苦参碱制剂，规格为500 ml：25 g，内蒙古农牧业科学院提供，透明液体制剂；两种药用蒸馏水各稀释100倍，避光保存待用。

试验动物：日本大耳白兔12只，雌雄各半，体重2±0.5 kg，购自内蒙古大学实验动物中心。

2　试验方法

2.1皮肤刺激性实验

2.1.1单次皮肤刺激性实验

2.1.1.1 试验预处理

根据《化妆品卫生规范》（2007年版）的操作规程在试验前24h用宠物脱毛器对背部两侧正常无破损区域进行脱毛处理，去毛范围为 15 cm×15 cm。

2.1.1.2 试验操作

分组：受试兔子随机分为A组、B组两组，每组6只；保定：助手对兔子进行手动保定；分区：将兔子背部右侧定为对照区，左侧定为试验区，每侧有前后2个区，前面为完整皮肤试验区，后面为破损皮肤试验区；实验操作：破损皮肤试验区用注射器针头划“井”字破口，破损区面积 1.5 cm×1.5 cm，划痕间距 1 cm，以轻度渗血不伤及真皮为度。完整皮肤试验区用记号笔标记1.5 cm×1.5 cm区域。受试兔子随机分为A、B两组，每组6只，兔子右侧每个受试区给予对照物蒸馏水 0.5 ml，左侧每个受试区A组给予苦参碱制剂0.5 ml，B组给予苦参碱透皮制剂0.5 ml（使用前摇匀），用棉棒涂抹面积1.5 cm×1.5 cm，加2层纱布覆盖保护，用胶布固定。每只兔子给予单独笼子饲养。24 h 后用蘸有蒸馏水的纱布擦除受试物，温水洗净，分别于去除受试物后 10 min，20 min，1 h，2 h，24 h，48 h，72 h 观察涂敷部位有无红斑和水肿情况，以及上述变化的恢复时间和情况。根据表1、表2对结果进行处理分析。

2.1.2多次皮肤刺激性试验

实验动物准备同单次皮肤刺激性实验，每日涂抹药量为0.5 ml，24 h后用蒸馏水清除残留受试物并观察病变，连续涂抹10 d。从第2 d开始，每次涂抹前剪毛，24 h后观察结果，记录每天红斑及水肿情况（标准参照表1），并观察涂抹部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙（或菲薄）情况，同时记录其发生时间及消退时间。根据表1、表2对结果进行积分处理，结果见表3。

3　结果及评价

对参试动物皮肤变化进行病理观察，结果详见图1和图2。

图1　单次给药皮肤状况摄影

图2　长期给药皮肤状况摄影

从图1可以看出，兔子背部正常皮肤与破损皮肤出现淡粉色轻微红染，局部隆起。

从图2可以看出，外观可见皮肤红肿，皮肤角质层增厚，局部脱落。

图3　长期试验的透皮制剂组病理图片

从图3可以看出，病理组织观察，角质层增厚分层并逐渐脱落，真皮的纤维组织水肿导致纤维粗细杂乱真皮的纤维组织水肿导致纤维粗细不均，染色深浅不一，毛细血管内充血。

单次给药皮肤刺激性试验，按照表 1 的评分标准计算每一观察时间点各组受试物以及对照品皮肤反应积分的平均分值，按表2 进行刺激强度评价。

表1　单次皮肤刺激反应评分标准

表2　单次皮肤刺激强度评价标准

单次皮肤刺激性实验积分见表3

表3　单次皮肤刺激性实验积分

3.1单次皮肤刺激性实验结果

单次皮肤刺激性试验中，对照区域皮肤无对照组无任何眼观及病理变化；苦参碱制剂试验组的完整皮肤实验区无眼观变化，破损皮肤实验区有轻微红肿现象，属于皮肤破损后的正常反应，观察168 h后破损皮肤恢复完全，无红肿、变厚、色素沉着等现象。病理切片观察，无明显病理变化。皮肤均分为皮肤积分为0，临床用药安全，基本无刺激性。

苦参碱透皮制剂组的完整皮肤实验区在除去受试物1h开始出现红肿反应，在24 h内红肿反应明显，之后红肿现象开始减轻，并红肿逐渐消退，皮肤角质层形成鳞片状皮屑，120 h红肿现象基本消失，受试部位仍然有局部增厚现象，皮屑逐渐脱落。240 h皮肤外观无红肿、变厚现象，无色素沉着，残余部分皮屑。破损皮肤实验区跟完整皮肤实验区基本相同，皮肤愈合良好，眼观未见鳞状皮屑，无色素沉积。

3.2多次皮肤给药刺激实验结果

多次皮肤刺激试验中，眼观苦参碱制剂实验组完整皮肤区和破损皮肤区无红肿、变厚和色素沉着。与单次皮肤给药反应基本相同。病理切片观察，表皮角质层增生，轻微脱落，弹性纤维轻微水肿无断裂，毛囊结构正常。

苦参碱透皮制剂组的完整皮肤实验区从第2 d开始出现红肿、表皮及皮下组织增厚、可见用药区域表皮隆起；第4天时开始出现鳞片状皮屑，随实验的进行逐渐脱落，直到实验结束。用药区域无色素沉积。病理切片观察，皮肤纤维组织水肿，分布间隙变大，有单核细胞浸润。表皮的角质层增生，分出多层，局部脱落，裸露出棘细胞层，棘细胞层变薄，棘细胞水肿；真皮纤维水肿断裂，分布疏松，粗细不均，着色深浅不一，毛囊周围小血管充血出血明显，毛细血管上皮细胞水肿。

4　结论及讨论

对照两实验组可见，添加透皮吸收剂的实验组药物对机体的刺激性比未添加透皮剂的组织刺激性大、药物吸收多。根据病理切片观察，红肿部分主要有毛细血管充血红肿部分主要由毛细血管充血、出血；真皮纤维层纤维水肿等原因造成。炎性细胞渗出较少。对照两组破损皮肤区域，涂药的破损皮肤的红肿反应相对较有轻微红肿，无细菌感染，伤口恢复得也较快。证明苦参碱有抗炎、抗菌的作用。与周重楚（6）等人的研究相符。

实验中单次给药实验中，未添加透皮吸收剂的实验组单次及多次给药实验中，皮肤均无红肿、变厚和色素沉着。证明苦参碱制剂在临床上使用安全，无刺激性，与张在平［5］等人的实验结果相符。而添加了透皮剂的实验组轻微水肿、充血效果不明显、角质层轻微脱落，炎性细胞少量渗出较少，证明苦参碱可以刺激局部皮肤发生轻微水肿反应，但刺激性不强。

对照长期试验两实验组的病理切片，未添加透皮剂的皮肤炎性细胞浸润较少，毛囊无任何病理变化；添加了透皮制剂的实验组，纤维层的水肿断裂、间隙变大；棘细胞层的细胞层数轻微增多、细胞水肿，但小血管的红细胞渗出少。说明未添加透皮剂的皮肤药物渗入皮肤的速度较慢、药量较少，对皮肤的刺激是添加了透皮制剂皮肤病变的初期，对实质组织的伤害极小，所以无任何眼观病变，添加了苦参碱透皮制剂的皮肤由于吸收速度快，吸收量大迅速，所以刺激明显，病变明显。

本实验在苦参碱制剂中添加透皮剂后，证明可以使药物能更好地渗透进入皮肤内，可提高药物的生物利用度和药效，但由于透皮制剂跟苦参碱制剂混合后为乳浊液，使用前需要充分混匀，下一步需要研究促进二者互溶的问题，使临床用药更加方便。

［1］ 苏利波，张西臣.苦参抗寄生虫的研究进展［J］.中国病原生物学杂志，2008，（6）：471-473.

［2］ 邹渭洪，付成效，毕津莲，等.氮酮、丙二醇对湿疹喷雾剂中黄芩苷透皮吸收的影响［J］.中国现代医学杂志，2012，（22）：32-34.

［3］ 孔福明.香妃夏露的皮肤刺激性和长期毒性试验研究［J］.国际医药卫生导报，2006，12（18）：189-191.

［4］ 张在平，樊树理，解国梁，等.苦豆子抑菌洗液皮肤刺激性研究［J］.中国卫生检验杂志，2012，（3）：498-499，503.

［5］ 周重楚.苦豆子的抗炎、抗变态反应作用［J］.中国药理学报，1989，10（4）：360.

杨良月（1988-），男，汉族，河北省邢台市人。内蒙古农业大学兽医学院硕士研究生，主要研究方向为反刍动物抗病性能研究。

吴树清（1957-），男，蒙古族，内蒙古农业大学兽医学院，硕士生导师；常建华（1959-），男，汉族，内蒙古农牧科学院研究员。

项目名称：内蒙古科技创新项目—苦参碱防治家畜外寄生虫的研究。