替米沙坦片含量的专属性试验

2015-10-25孔凯丽

中国医药指南 2015年20期

关键词：液相色谱仪米沙坦量瓶

孔凯丽　成芳

（江苏天士力帝益药业有限公司，江苏淮安 223003）

替米沙坦片含量的专属性试验

孔凯丽成芳

（江苏天士力帝益药业有限公司，江苏淮安 223003）

目的验证替米沙坦片含量测定方法的专属性。方法建立了HPLC法（用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.005 mol/L氢氧化钠甲醇溶液为溶剂；以2.0 g/L磷酸二氢铵溶液（用磷酸调节pH值至3.0）-甲醇（30∶70）为流动相；检测波长为298 nm；柱温40 ℃；流速1.0 mL/min；理论板数按替米沙坦峰计算不低于4000。测定替米沙坦片及其降解产物含量。考察高温、高湿、光照、酸、碱破坏对替米沙坦片的影响，确定方法专属性情况。结果替米沙坦片在高温、高湿、光照、酸、碱破坏条件下稳定，在氧化破坏条件下部分降解。结论所建立的HPLC方法能够较好的考察替米沙坦片在高温、高湿、光照、酸、碱破坏下的降解情况，方法专属性良好。

替米沙坦片；降解；专属性

替米沙坦片是一种口服起效的，对其他受体无亲和力，用于原发性高血压的治疗。替米沙坦片的含量测定方法，国家食品药品监督管理局批准的标准和美国药典收载的标准均采用HPLC法，但美国药典样品处理时直接取20片，经溶剂溶解后，过滤，稀释，进样；而国家局批准的标准采用研磨后，称取适量，溶解、过滤后进样。

替米沙坦片在制备过程中，首先在碱性溶液中替米沙坦和葡甲胺形成替米沙坦葡甲胺钠盐，葡甲胺极易溶解于水，并具有引湿性，导致在研磨过程易吸附于器壁上，并导致研磨不均。替米沙坦片现行的质量标准中的含量测定检测方法不完善，不能准确的体现含量测定结果，准确度、精密度较差。为了准确的体现测定结果，我们参考美国药典中替米沙坦片含量测定检测方法进行研究验证。结果表明，美国药典收载的替米沙坦片含量测定结果的准确度和精密度较好。我们按照《已上市化学药品变更研究的技术指导原则》要求，参照美国药典收载的替米沙坦片含量测定方法，进行相关的研究验证工作。

1　仪器与试剂

clarus 600气相色谱仪；安捷伦GC-MS 6890N/5973气质联用仪。岛津高效液相色谱仪（SCL-10AVp）；色谱柱：Diamonsil，C18（2），50 mm×4.6 mm，5µm。HHS电热恒温水浴锅（江苏省医疗器械厂）；CM-3型澄明度检测仪（天津药典标准仪器厂）；BT125D（十万分之一）电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；替米沙坦片（江苏天士力帝益药业有限公司自制，批号：20140312）；替米沙坦片对照品（99.9%，供含量测定用，LOT：100629-201202，中国药品生物制品检定所）；替米沙坦有关物质A对照品：（供含量测定用，批号：F01326，USP ROCKVILU.MD）；磷酸二氢铵（分析纯，批号：F20110530，国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠（分析纯，批号：12050810742，南京化学试剂有限公司）；甲醇（HPLC，批号：13020444，TEDTA）；磷酸（HPLC，批号：PA-3102-1000，ACS）。

2　实验方法

照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.005 mol/L氢氧化钠甲醇溶液为溶剂；以2.0 g/L磷酸二氢铵溶液（用磷酸调节pH值至3.0）-甲醇（30∶70）为流动相［1］；检测波长为298 nm；柱温40 ℃；流速1.0 mL/min；理论板数按替米沙坦峰计算不低于4000。

测定法：取本品20片，置200 mL量瓶中，加溶剂适量，振摇至分散，超声10 min，放冷至室温，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液适量，加流动相稀释制成每1 mL中约含0.12 mg的溶液，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取替米沙坦对照品12 mg，置100 mL量瓶中，加流动相适量超声使溶解［2］，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

3　降解试验

3.1空白溶剂：取溶剂、流动相、空白辅料各10 µL进样，记录色谱图，空白溶剂不干扰替米沙坦含量测定（图1）。

3.2未破坏样品：取替米沙坦片（20140312批）20片，置200 mL量瓶中，加溶剂适量超声10 min，放冷至室温，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，无杂质峰干扰替米沙坦含量测定（图2）。

3.3高温破坏：取替米沙坦片（20140312批）20片，置200 mL容量瓶中，水浴加热30 min，冷却至室温，加溶剂适量，超声10 min，用溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，替米沙坦在高温条件下与未破坏样品比较基本无变化（如未破坏样品图谱）。

3.4氧化空白：取过氧化氢溶液（30%）5.0 mL置200 mL容量瓶中，沸水浴10 min，冷却至室温，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，无杂质峰（图3）。

3.5氧化破坏：取替米沙坦片（20140312批）20片，置200 mL量瓶中，加过氧化氢溶液（30%）1.0 mL，摇匀，置沸水浴中10 min后，取出，放却，加溶剂适量超声10 min，放冷至室温，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，替米沙坦在氧化条件下与未破坏样品比较基本无变化［3］（如未破坏样品图谱）。

3.6酸碱空白：吸取1 mol/L盐酸溶液和1 mol/L氢氧化钠溶液各5.0 mL置200 mL量瓶中，混匀，置沸水浴中10 min后，放冷，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，酸碱空白溶液几乎没有干扰（图4）。

3.7酸破坏：取替米沙坦片（20140312批）20片，置200 mL量瓶中，加入5.0 mL 1mol/L盐酸溶液，再置沸水浴中10 min后，放冷，加入5.0 mL 1mol/L氢氧化钠溶液中和，加溶剂适量超声至溶解，用溶剂定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，替米沙坦在酸性条件下与未破坏样品比较基本无变化（如未破坏样品图谱）。

3.8碱破坏：取替米沙坦片（20140312批）20片，置200 mL量瓶中，加入5.0 mL 1mol/L氢氧化钠溶液，再置沸水浴中10 min后，放冷，加入5.0 mL 1mol/L盐酸溶液中和，加溶剂适量超声10 min，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，替米沙坦在碱性条件下与未破坏样品比较基本无变化（如未破坏样品图谱）。

3.9光照破坏：取替米沙坦片（20140312批）20片，置200 mL量瓶中，于4500LUX下照射24 h，取出，加溶剂适量超声10 min，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，替米沙坦在光照条件下未发生变化（如未破坏样品图谱）。

3.10高湿破坏：取替米沙坦片（20140312批）20片，置表面皿中，于高湿条件下（92.5%RH）24 h，用溶剂转移至200 mL量瓶中，加溶剂适量超声10 min，加溶剂至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，替米沙坦在高湿条件下与未破坏样品比较基本无变化（如未破坏样品图谱）。