不同加工工艺对续断质量的影响*

魏庆红，胡雨，金传山，李保明，张伟

（1.安徽省亳州市中药材进出口检测中心，安徽亳州236800；2.安徽中医药大学药学院，安徽合肥230031）

不同加工工艺对续断质量的影响*

魏庆红1，胡雨2，金传山2，李保明1，张伟2

（1.安徽省亳州市中药材进出口检测中心，安徽亳州236800；2.安徽中医药大学药学院，安徽合肥230031）

目的测定川续断皂苷Ⅵ和川续断总皂苷的含量，探讨不同产业化加工工艺对川续断质量的影响。方法采用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别对不同片型和不同干燥温度加工的续断饮片中川续断皂苷Ⅵ和川续断总皂苷的含量进行测定。结果切4mm的续断片，50℃烘干后，川续断皂苷Ⅵ及川续断总皂苷的含量均高于其他加工工艺所得饮片。结论为保证续断饮片的质量，确定了切制片型厚度和烘干温度等工艺参数。

续断；加工工艺；川续断皂苷Ⅵ；川续断总皂苷

续断为川续断科植物川续断Dipsacusasper Wall.ex Henry的干燥根，主要用于治疗腰背酸痛、足膝无力、胎漏、崩漏、带下等症［1］。续断的主要活性成分是以川续断皂苷Ⅵ为代表的齐墩果烷型三萜皂苷，有促进骨损伤愈合、治疗腰椎骨质增生和骨质疏松等作用［2］。续断现行饮片加工工艺操作多凭操作人员经验进行，切制片型和干燥温度等技术参数缺乏统一标准，产品生产中的质量评价多以感观为主。目前，国内续断饮片外观要求切面皮部墨绿色或棕褐色，木部灰黄色或黄褐色，而出口饮片要求断面为豆青色，不同工艺条件的饮片造成饮片质量参差不齐，不同加工方法对药材中皂苷类成分也有显著影响［3-7］。本研究中采用不同切片厚度和低温烘干技术用于续断药材及饮片加工工艺对质量影响的研究，通过对川续断皂苷Ⅵ及其总皂苷的测定，为续断饮片的产业化生产提供稳定可行、参数可控的生产工艺，确保其质量稳定、可控。

1　仪器与试药

QY-300型高速截断往复式切药机（亳州康华制药机械有限公司）；Y112M-4B35型箱式干燥机（安徽协和成药业饮片有限公司）；Agilent1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Specord 210 PLUS型紫外可见分光光度计（德国耶拿公司）；AUW220D型十万分之一电子天平（日本岛津公司）；DK-98-ⅡA型电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）；JK-3200B型超声清洗仪（合肥金尼克机械制造有限公司）；IKA®RV10 basic旋转蒸发器（成都鑫益仪器有限公司）；101-1AB型电热恒温鼓风干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司）；WL-100型打粉机。川续断皂苷Ⅵ对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111685-201304）；齐墩果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111685-201304）；甲醇、乙腈为色谱纯；香草醛、冰醋酸、高氯酸等均为分析纯；续断药材购于亳州中药材大市场，经安徽中医药大学药学院周建理教授鉴定为川续断Dipsacusasper Wall.ex Henry的干燥根。

2　方法与结果

2.1川续断饮片的制备

取续断药材除去杂质，淘洗干净，置塑料内膜袋焖润适宜时间，至药材断面变成均匀豆青色，取出，分别切成3，4，5mm片，再分别置蒸气炕中以40，50，60℃温度干燥，得样品1～9；另取续断药材除去杂质，淘洗干净，置塑料框中，用编织袋盖住焖润至弯曲360°不折断无硬心，取出，切4mm片，然后置蒸气炕中50℃干燥，得样品10，饮片切面皮部墨绿色；原药材为样品11。

2.2川续断总皂苷含量测定［4-5］

2.2.1溶液制备

精密称取减压干燥至恒重的齐墩果酸对照品15.40 mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，即得齐墩果酸对照品贮备溶液。取2.1项下制备的11份样品各200 g，粉碎，分别取续断细粉0.25 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚100mL，加热回流至提取液无色，弃去石油醚提取液；待石油醚挥干后，将药材粉末置烘箱中60℃干燥1 h，移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定质量；浸泡30min后，超声提取30min，放冷再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，用甲醇定容至100mL容量瓶，即得供试品溶液。

2.2.2方法学考察

波长选择：分别精密吸取供试品溶液和适当质量浓度的齐墩果酸对照品贮备溶液，置10mL具塞试管中，水浴挥干溶剂，精密加入0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 mL高氯酸，摇匀，100℃恒温水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却15min，加入5mL冰醋酸，摇匀，以甲醇作空白对照，在400～800 nm波长范围内紫外扫描。结果显示，前两者在548 nm波长处均有最大吸收值，且吸收峰相同，而甲醇在548 nm波长几乎无吸收，故选此为测定波长。

线性关系考察：精密量取齐墩果酸对照品贮备溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mL，分别置10mL具塞试管中，按“波长选择”项下方法显色，以第1管作空白对照，于548nm波长处测定。以吸光度（A）对质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程A=0.056 9C-0.002 1，r=0.999 7（n=6）。结果，齐墩果酸质量浓度在2.56～12.80μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。

重复性试验：取同一份样品，依法制备供试品溶液6份，按“波长选择”项下方法显色后，在548 nm波长处测定。结果，川续断总皂苷平均含量为12.95%，RSD=0.05%（n=6），表明该方法重复性良好。

精密度试验：精密吸取齐墩果酸对照品贮备溶液0.30mL，按“波长选择”项下方法显色，以甲醇作空白对照，在548 nm波长处测定。结果，吸光度平均值A=0.422 4，RSD=0.05%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：以供试品溶液定容后计时，考察溶液的稳定性，分别于0，1，2，3，4，5 h时进样测定。结果，吸光度平均值A= 0.494 8，RSD=0.42%（n=6），表明供试品溶液在5 h内基本稳定。

加样回收试验：取已知总皂苷含量的续断药材细粉0.1 g，依法制备供试品溶液，精密取溶液9份，每份0.1mL，分别加入适量的对照品溶液，平行制备3份，按“波长选择”项下方法显色，在548 nm波长处测定吸光度，计算含量和回收率。结果见表1。

表1　川续继总皂苷加样回收试验结果（n=9）

2.2.3样品含量测定

分别精密吸取2.2.1项下各供试品溶液0.5mL，按“波长选择”项下方法显色后，在548 nm波长处测定吸光度，计算川续断总皂苷含量。结果见表2。

表2　样品中川续断皂苷Ⅵ和川续断总皂苷含量测定结果（n=11）

2.3川续断皂苷Ⅵ含量测定［1］

2.3.1色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Agilent5-Tc C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；柱温：40℃；流动相：乙腈-水（30∶70）；流速：1.0mL/min；检测波长：212 nm；进样量：10μL。理论板数按川续断皂苷Ⅵ峰计算大于4 000。在此色谱条件下，各组分分离良好，分离度为2.6；目标峰和川续断皂苷Ⅵ峰保留时间一致，空白溶液在相应位置无吸收。色谱图见图1。

2.3.2溶液制备

图1　高效液相色谱图

精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品16.66mg，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，取5mL，置50mL容量瓶中，用乙腈-水（30∶70）定容至刻度，即得对照品溶液。取2.1项下制备的11份样品各200 g，粉碎，分别取细粉0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率100W，频率40 kHz）30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3.3方法学考察

线性关系考察：精密量取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，配成系列不同质量浓度的对照品溶液6份，分别进样10μL。以峰面积（A）对进样量（C）进行线性回归，得回归方程A=536.39 C-25.5，r=0.999 8（n=6）。结果，川续断皂苷Ⅵ进样量在0.416～8.330μg范围内与峰面积线性关系良好。

重复性试验：取同一份样品，依法制备供试品溶液6份，按拟订方法进样测定。结果，川续断皂苷Ⅵ平均含量为5.60%，RSD= 1.18%（n=6），表明该方法重复性良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10μL，连续进样6次。结果的RSD=0.15%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液10μL，分别于0，2，4，6，8 h时进样测定。结果的RSD=0.92%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的4号续断药材细粉9份，各约0.25 g，分别精密加入高、中、低3个质量浓度的对照品溶液适量，依法制备供试品溶液，同一质量浓度平行制备3份，并按拟订色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表3。）

表3　川续继皂苷Ⅵ加样回收试验结果（n=9）

2.3.4样品含量测定

分别取2.3.2项下供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，以外标法计算样品中川续断皂苷Ⅵ的含量。结果见表2。

3　讨论

由不同加工方式得到饮片的含量测定结果可知，在不同的切片厚度和干燥温度下，续断药材切4 mm厚片、干燥温度为50℃条件下，加工得到的饮片中川续断皂苷Ⅵ及总皂苷含量最高。在同样切片厚度与干燥温度条件下，续断药材“发汗”至外观为断面豆青色时的续断样品，其质量优于切面皮部墨绿色或棕褐色的样品。说明合理的加工炮制方法对续断饮片质量有明显影响。

目前，国内续断饮片外观要求切面皮部墨绿色或棕褐色，木部灰黄色或黄褐色；出口续断饮片外观要求为断面豆青色，要达此要求，需将续断药材焖润，此过程类似传统加工的“发汗”，焖润时间根据季节不同有所变化。

本研究结果证实，续断饮片断面为豆青色时，其质量优于切面为皮部墨绿色或棕褐色的样品，表明出口续断饮片外观要求断面为豆青色具有一定的道理。但在焖润过程中要常翻动药材，避免样品霉变。在后期的研究中将对续断药材焖润的器械、环境进行研究，以规范其焖润过程。同时，也将对续断饮片“发汗”至断面豆青色的内在质量变化继续深入研究与探讨，保证续断饮片质量的稳定。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出社，2010：309-310.

［2］程志安，吴燕峰，黄智清，等.续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响［J］.中医正骨，2004，12（16）：705-707.

［3］杨中林，刘双跃，秦民坚.不同加工方法对续断中Akebia Saponin D含量变化的影响［J］.中医药信息，2000，17（1）：16-17.

［4］王初.发汗与不发汗续断中水溶性浸出物和川续断皂苷Ⅵ的比较［J］.中草药，2007，38（6）：865-866.

［5］刘艳，李玮，王建科，等.综合评分法优选川续断产地加工方法［J］.中药材，2012，35（12）：1 922-1 924.

［6］金奇，来平凡，杜伟锋，等.“发汗”对续断质量的影响［J］.中华中医药学刊，2011，29（12）：2 636-2 638.

［7］刘永，卫莹芳，闫婕，等.不同产地续断中总皂苷的含量测定［J］.时珍国医国药，2009，20（11）：2 767-2 768.

Influence of Different Processing Technology on Quality of Radix Dipsacis

Wei Qinghong1，Hu Yu2，Jin Chuanshan2，Li Baoming1，Zhang Wei2
（1.Import and Export of Chinese Medicinal Materials Testing Center of Bozhou，Bozhou，Anhui，China 236800；2.College of Pharmacy，Anhui University
of Chinese Medicine，Hefei，Anhui，China 230031）

Objective To determine the content of akebia saponinsⅥand total saponins，and to investigate the industrialization of different processing technology on the quality of Radix Dipsaci.M ethods The content of akebia saponinsⅥand total saponins of different type and different drying temperature processing of Radix Dipsaci decocting pieces were determined by HPLC and UV spectrophotometry.Results By cutting 4 mm fragment and drying at 50℃，the content of akebia saponinsⅥand total saponins were higher than other processing technology slices.Conclusion The cutting production process parameters such as thickness and drying temperature are determined to ensure the quality of Radix Dipsaci decocting pieces.

Radix Dipsaci；processing technic；Dipsacus L.akebia saponinsⅥ；Dipsacus L.total saponins

R283.1；R282.71；R284.1

A

1006-4931（2015）18-0014-03

魏庆红（1970-），男，河南郑州人，主管药师，研究方向为中药材进出口质量标准，（电子信箱）bcwqh@126.com。

2014-10-27）

*国家国际科技合作专项项目，项目编号：2011DFA31950。