新城疫活疫苗（lasota株）溶解在不同温度水中病毒含量变化情况

龚美光 郎应仁

摘 要：通过试验检测鸡场常用的高端和低端两种新城疫（lasota株）活疫苗初始病毒含量（EID50/羽份），并模拟饮水免疫，将两种疫苗稀释后分别放在10 ℃、20 ℃和30 ℃温度中水浴中1 h、2 h和3 h，检测在不同温度、不同水浴时间下疫苗病毒含量（EID50/羽份）的变化，为生产中饮水免疫提供理论依据。结果表明：高端和低端新城疫活疫苗初始病毒含量分别为106.5 EID50/羽份和106.0 EID50/羽份，高端疫苗病毒含量高于国家标准（106.0 EID50/羽份）3.2倍，低端疫苗和国家标准一致；放置在水浴中的疫苗病毒含量随着时间增加呈下降趋势，水温越高下降越快；高端疫苗在10 ℃ 3 h、20 ℃ 2 h和30 ℃ 1 h条件下可以保证病毒含量（EID50/羽份）不低于国家标准，而低端疫苗无论溶解在哪个温度的水中后，进行免疫的病毒含量（EID50/羽份）都低于国家标准。

关键词：新城疫；病毒含量；饮水免疫

中图分类号：S852.4+3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）11-0048-02

新城疫（Newcastle Disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的家禽重要传染病，可导致多种禽类发生高死亡率[1]。该病严重危害养鸡业的发展，常给养鸡业带来巨大的经济损失，被国际兽疫局（OIE）列为必须通报的重要疫病之一。疫苗在ND的控制上起到了重要的作用，当前疫苗免疫效力的评价指标主要为临床死亡率，由于ND疫苗的广泛使用，ND的死亡率得到了较好的控制，但免疫鸡群中非典型ND的发生现象却比较普遍[2]，饮水免疫新城疫活疫苗是防控新城疫过程中重要的免疫方式。然而，很多养殖户对饮水免疫时的时间和饮水温度对疫苗效价的影响没有明确的认识。免疫操作时，常出现水温太高或饮水时间太长，结果导致疫苗病毒效价损失，从而影响免疫效果，引发非典型新城疫的发生。本试验通过检测新城疫疫苗溶解在不同温度的水中和不同的饮水时间下效价损失情况，来指导现场饮水免疫时根据水温确定饮水免疫的时間。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 疫苗

鸡新城疫（lasota株）活疫苗（高端和低端各一瓶），购自于济南有疫苗经营许可证的经销商处，生产批号分别为：20150508、20150519，都是最新批次疫苗。

1.2 2SPF鸡胚

11日龄SPF鸡胚，购自山东农科院济南家禽研究所。

1.3 试验方法

新城疫疫苗置于不同温度的水中和不同饮水时间下病毒含量（EID50/羽份）测定：将一瓶新城疫活疫苗（1 000羽份）用生理盐水稀释成1羽份/0.1 mL，平均分成3份，分别置于在10 ℃、20 ℃和30 ℃水浴中，每组在0 h、1 h、2 h和3 h时吸取0.1 mL，进行10倍稀释，每个稀释度尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚5枚，每枚鸡胚接种0.1 mL，置37 ℃继续孵育120 h，48 h内死亡的鸡胚弃去不计；在48 h～120 h内死亡的鸡胚，随时取出，收获鸡胚尿囊液，将同一稀释度的鸡胚尿囊液等量混合，分别测定红细胞凝集价。至120 h，取出所有活胚，逐个收获鸡胚尿囊液，分别测定红细胞凝集价，凝集价不低于1∶160（微量法1∶128）者判定感染，计算EID50。每羽份病毒含量应该不低于106.0EID50[3]。

2 结果与分析

2.1 高端新城疫活疫苗检测结果

从表1可以看出高端新城疫活疫苗初始病毒含量为106.5 EID50/羽份，在10 ℃水温下3 h时病毒含量还可以达到106.17 EID50，仍高于国家标准106.0 EID50/羽份； 20 ℃水温下2 h病毒含量就已经下降到国家的标准线106.0 EID50/羽份；在30 ℃水温下1 h疫苗病毒含量就下降到国家标准线106.0 EID50/羽份。

2.2 低端新城疫活疫苗检测结果

从表2可以看出低端疫苗初始病毒含量为106.0 EID50/羽份，符合国家标准，但是放在10 ℃、20 ℃和30 ℃三个不同温度的水浴锅内各1 h内抗原含量都降到国家标准以下，水温越高效价损失越严重。

3 讨论

从表1可以看出高端新城疫活疫苗初始病毒含量为106.5 EID50/羽份，是国家标准要求106.0的3.2倍（通过计算得知），在10 ℃水温下3 h时病毒含量还可以达到106.17 EID50，如果按照正常计量免疫，10 ℃水温中饮水免疫时间达到3 h也可以达到正常的免疫效果；20 ℃水温下2 h病毒含量就已经下降到国家的标准线106.0 EID50/羽份，说明在20 ℃水温中饮水免疫时间不能超过2 h；在30 ℃水温下1 h疫苗病毒含量就下降到国家标准线，说明在30 ℃水温中饮水免疫时间不能超过1 h。在养殖生产中，绝大多数饮水免疫用水的温度都超过20 ℃以上，甚至在炎热的夏季饮水免疫用水的温度要超过30 ℃，如果饮水免疫的时间没有严格的限制就会导致免疫效果差，甚至引起免疫失败。除了水温和饮水的时间对抗原含量的影响，还受其他多方面的因素影响，比如：水中的重金属含量、是否含有消毒剂、水线的清洁程度等[4]，所以要想使饮水免疫能达到我们预期的效果首先要保证免疫用水的温度和免疫时间，水温达到20 ℃时保证2 h内饮完，水温达到30 ℃以上时要保证1 h内饮完疫苗。根据作者的临床经验，最好采用2次饮水免疫法，即每次所使用的疫苗分成两次免疫，每次免疫的时间不超过1 h，这样既能避免水温对疫苗效价的影响，又能使鸡群饮水免疫更均匀。

本试验选择的低端新城疫活疫苗出厂时，新城疫病毒效价符合国家标准（106.0 EID50/羽份），但无论溶解在哪个温度水中，在进行免疫时疫苗的病毒效价都低于国家标准，如在20 ℃水温中1 h效价变为105.6=4×105=0.4×106 ，所以，免疫时至少加2.5倍量才能使1 h内达到应有的免疫效果。但有些低端疫苗经过多次运输、长时间保存或储存不当，在使用前疫苗病毒效价已经低于国家标准。如果养殖户还按要求计量免疫，就可能达不到正常的免疫效果，所以就需要加大计量去免疫。但是，具体加多少倍量才能达到有效计量，很难去估量，也就出现了部分养殖户在使用低端疫苗时盲目加大计量的现象。相反，一些高端优质疫苗在生产时，厂家考虑到各种因素导致的疫苗效价损失[5]，疫苗出厂时抗原含量超出国家标准几倍（本试验测得的数值为3.2倍），只要鸡群健康、疫苗储存和免疫操作得当，就会达到良好的免疫效果。建议各位养殖朋友尽量选择优质的新城疫活疫苗，利用科学的免疫操作方式，保证鸡群新城疫的防控效果。

参考文献：（5篇，略）