鸡感染新城疫的诊断及抗体水平检测

詹丽娥 陆冰洋 刘华栋 李婷婷 唐娟 王彩先 丁树荣

摘要：近年来，在山西省不同地区总发现有新城疫（ NDv）的发生。本文针对一例疑似病例通过临床症状，剖检变化，PCR鉴定等方法对其进行诊断，确定其为新城疫感染。研究过程中发现通过使用血凝抑制试验方法对养殖场的鸡群进行采血检测，测定养殖场整体抗体水平高低不均匀，确定鸡群整体存在发病风险，从而为养殖场新城疫的防控提供参考。

关键词：新城疫；RT-PCR；抗体

2017年3月9日山西省晋中地区某养鸡场150日龄的蛋鸡发生疾病，此养鸡场存栏鸡8000只，近期部分鸡发生疾病。整群精神状态差，采食量和饮水量均下降。场主携带3只发病鸡（2只活鸡，1只死鸡）来笔者研究室进行诊断。

1临床症状

病鸡精神沉郁、垂头缩颈、翅翼下垂、鸡冠、肉髯发紫呈暗红色、呆立、状似昏睡、食欲减少。主要症状表现在呼吸道，包括咳嗽、张口呼吸、呼吸时偶尔会伴有拉长的怪叫声。嗉囊内积有液状内容物，倒提时常從口角流出大量酸臭的暗灰色液体。排黄绿色或黄白色水样稀便，有时混有少量血液。鸡产蛋下降或停产，蛋壳质量变差；

2病理变化

病变主要集中在消化道，腺胃、小肠和盲肠病变最为明显。腺胃乳头肿胀、出血或溃疡，尤其是在与食道或腺胃交界处最明显。十二指肠黏膜及小肠黏膜出血或溃疡，有的可见到“枣核状溃疡灶”，表面有黄色或灰绿色纤维素膜覆盖。盲肠扁桃体肿大、出血和坏死。呼吸道以卡他性炎症和气管充血、出血为主。鼻道、喉、气管中有浆液性或卡他性渗出物。

3 PCR鉴定

从发病鸡的肺脏、肝脏、脾脏等器官取样19，剪碎混匀后取0.05g研磨，8000rpm离心后取上清液，使用新城疫病毒通用型RT-PCR检测试剂盒检测NDV，取已处理的样品，加入裂解液600 μ L，充分颠倒混匀，室温静置3～5min。将液体吸入吸附柱中，13000rpm离心30s。弃去收集管中的液体，加入600μL洗液，13000rpm离心30s。重复上一步。弃去收集管中液体，13000rpm空柱离心2min，以除去残留的洗涤液。将吸附柱移入新的1.5mL离心管中，向柱中央加入洗脱液50μL，室温静置1min，13000rpm离心30s，离心管中液体即为模板RNA。反转录条件为：42℃45min，94℃3min；PCR反应条件为：94℃30s，55℃30s，72℃30s，共循环35次，72℃延伸7min。使用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，结果见图1。

由图1结果可见，扩增出明显的条带，与试剂盒里设定的扩增片段大小相符。

4诊断

通过临床症状、剖检病理变化和PCR鉴定，确定病鸡感染新城疫。

5抗体检测

采用农业部1999年颁布的14种动物疫病检测方法中的红细胞凝集抑制试验（ Hl），微量法[1]检测被检血清Hl抗体效价。对全鸡场鸡群进行抗体检测，按照0.5%的比例抽样。按照比例抽检出39份样品，检测结果见表1。

由表1可知，该养殖场的抗体效价分布从3到8都有，可见分布极为不均匀。

6防治

针对试验结果，在饮水中添加安普霉素防止大肠杆菌感染，肌内注射新城疫I系疫苗[2]，同时淘汰处理已发病的病鸡。养殖场加强通风、清扫和消毒工作。经使用治疗方案5天后，鸡群整体精神恢复正常，无死亡。

7讨论

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastledisease virus，NDv）引起的危害多种家禽特别是陆生禽类的最主要传染病之一。一些发达国家采用强制扑杀强毒感染禽群为主的方法，已基本控制了本病[3]。由于整体饲养管理水平的限制和强毒感染的普遍存在，免疫接种目前仍是我国控制新城疫的主要办法[4]。

鸡群建立快速的黏膜免疫和在组织、血液中产生持久高水平的循环抗体，在强毒感染情况下的临床保护和有效降低排毒率方面更好[5]。而且新城疫的保护力与抗体的平均水平[6]和抗体结果的离散度[7]具有相关性。本例鸡场的抗体检测结果可见抗体分布不均匀，根据农业部标准，抗体水平低于4 log2即没有保护力，缺乏保护力的鸡数量较多，由于目前已经有鸡发生新城疫，这样的抗体水平很难抵抗新城疫病毒的攻击而导致群体暴发新城疫。

本例鸡场出现抗体水平的不均匀与养殖场饲养管理水平相关，经与场主沟通，鸡场的免疫主要由饲养员来做，由于饲养员对疫苗的运输、保存、使用等方面的技术水平有限，而且免疫后不做抗体检测，不关注免疫效果，此次抗体检测的结果可见抗体水平高低不均匀，很多鸡的抗体水平过低，不具有保护力。此次发病应为抗体水平过低的鸡最先感染新城疫引起的发病。

参考文献：

[1]于大海，崔觇林，中国进出境动物检疫规范[M]北京：中国农业出版社，1997：336-340

[2]王玉茂，周海永，李峰蛋鸡新城疫与大肠杆菌混合感染的诊治[J]黑龙江畜牧兽医，2014，（3）：76-77

[3]程小果，王慧，程宁，新城疫的合理免疫及常见疫苗使用误区[J]动物医学进展，2016，37（6）：116-120

[4]SaffYM，苏敬良，高福，索勋，译禽病学[M]北京中国农业出版社.2012：81-82

[5]朱钱龙，李艳，尧国荣，等鸡新城疫免疫程序的探讨[J]黑龙江畜牧兽医，2012，（6）：124-126

[6]甘孟侯.中国禽病学[M]北京：中国农业出版社.1999：8-21

[7]汤承，岳华，刘小银，等免疫鸡群新城疫强毒感染及其与Hl抗体的相关性研究，中国家禽，2009，31（4）：11-14