旋光法与改进苯酚硫酸法测定芦荟多糖含量比较

苗晓燕，何富强，陈萍

（保定学院生化系，河北保定071000）

旋光法与改进苯酚硫酸法测定芦荟多糖含量比较

苗晓燕，何富强，陈萍*

（保定学院生化系，河北保定071000）

分别采用旋光法和苯酚硫酸法测定了芦荟粗多糖中多糖的含量。结果表明：旋光法测定的多糖含量与改进苯酚硫酸法的测定值基本一致，即0.099 3 mg/mL和0.106 5 mg/mL。说明两种方法测定多糖均准确、稳定可行。因此旋光法可作为一种更为简便、操作性更强的测定多糖含量的方法，应用于多糖产品的质量检测与监控。

芦荟多糖；硫酸-苯酚法；旋光法

芦荟属百合科多年生草本植物，原产于非洲、地中海，热带、亚热带地区也有大量分布［1］。鉴于其富含芦荟多糖［2］、芦荟素以及多种人体必需的氨基酸、维生素、矿物质，已被联合国粮农组织（FAO）誉为“21世纪最佳保健品”。芦荟多糖作为无毒、无害、无刺激的中草药成分，具有杀菌消炎［3］、抗肿瘤［4］、抗艾滋病［5］、降血糖［6］、调节机体的免疫水平［7］、清除皮肤色素抗氧化性［8］、改善由于辐射引起的白细胞减少症［9］、抑制细胞凋亡［10］等作用，被广泛用于医疗、美容、保健、食用、观赏，甚至是材料研发。因此芦荟多糖的提取和开发具有非常重要的意义。

多糖含量的测定方法有很多，如DNS法［11］、苯酚硫酸法［12］、蒽酮硫酸法［13］、色谱法、毛细管电泳法［14］等。但采用旋光法测定多糖的研究还尚未见报道。而且由于不同品种的芦荟，甚至同一品种但种植条件不同都会对芦荟多糖含量造成影响。本文拟采用改进苯酚硫酸法和旋光法分别测定考察芦荟粗多糖中多糖含量。苯酚硫酸法测定糖是在高温条件下，硫酸使糖水解并缩合生成糠醛，再与苯酚形成稳定的显色反应来测定多糖含量；而旋光法则是首先用盐酸水解多糖后，再测定葡萄糖和甘露糖的旋光度，以确定多糖浓度的方法，一般来说溶液的浓度越大，其旋光度越大，该方法所用试剂少，操作简便，因此通过本实验旨在建立一种操作性更强、更为简便的测定多糖含量的方法，同时为便于控制和检测芦荟原料种植和加工企业，确保芦荟原料和制品的质量提供一定的理论依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

鲜芦荟：库拉索芦荟；无水乙醇：天津市富裕精细化工有限公司；葡萄糖：天津市化学试剂三厂；硫酸、苯酚：分析纯，成都科龙化工厂。

1.2仪器与设备

WZZ-2SS型数字式自动旋光仪：上海精密科学仪器有限公司；TU-1901双光束紫外-可见分光光度计：天津普析通用仪器设备有限公司；离心机：北京京立离心机有限公司；烘箱：上海申贤恒温仪设备器厂；FW80型高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；B3200ST型超声波清洗器：杭州旭东升科技有限公司；722型可见分光光度计。

1.3方法

1.3.1超声醇沉法芦荟多糖提取［15］

取一棵鲜芦荟，洗净，剪碎，40℃恒温干燥36 h，高速粉碎打成粉末状，称重：13.463 g，加入适量蒸馏水（约1∶20），超声1 h，抽滤，滤液用6 mol/L HCl，调pH 3～3.5，加入4倍体积无水乙醇，超声30 min，静置2 h，4000 r/min离心10 min，弃上清液，沉淀为芦荟粗多糖。

1.3.2改进苯酚-硫酸法测定多糖含量［16］

显色液配制：将50 mL浓硫酸缓缓加入10 mL水中冷却至室温，再加入0.6 g苯酚晶体搅拌、溶解配成显色液。

标准曲线制备：精密称取干燥至质量恒定的葡萄糖50 mg加蒸馏水至50 mL，得标准葡萄糖溶液。取标准葡萄糖溶液0、1、2、3、4、5、6 mL，再用25 mL容量瓶定容。按糖液∶显色液=1∶5比例加入试管，震荡混匀，置于沸水浴中保温30 min，取出冷却至室温。490 nm波长下测定吸光度（Abs）。

样品测定：准确称取0.35g干燥样品定容至100mL容量瓶中，按上述方法测定多糖含量。

1.3.3旋光法测定多糖含量

将一定量芦荟多糖溶解于50mL的水中，充分溶解后，向溶液中加入50mL6mol/LHCl，70℃加热10min。等冷却至室温，离心，转速为4000r/min，离心10min，离心两次，取上清液。准确量取以上操作得到的上清液5、10、15、20、25 mL，蘑菇多糖溶液于1～5号25 mL的容量瓶中，加蒸馏水定容、混匀后，用2 dm的旋光管测定，记录旋光度。

2结果与分析

2.1苯酚-硫酸法测定多糖含量

利用上述方法制作的标准曲线如图1所示。

通过进行线性回归分析，得到多糖测定过程中，糖浓度与吸光度的线性回归方程：y=3.443 6x+0.094 94，相关系数R2=0.999 67，表明方程拟合度较好。

由表1分析可知，不同浓度粗多糖溶液测定的多糖含量相差无几，说明此改进苯酚-硫酸法稳定、准确、重复性好。

图1　苯酚-硫酸法标准曲线Fig.1Standard curve by phenol sulfuric acid method

表1　苯酚-硫酸法测定不同浓度芦荟粗多糖中多糖的含量Table 1Content of polysaccharide by phenol sulfuric acid method

2.2旋光法测定多糖含量

利用上述方法制作的标准曲线如图2所示。

图2　旋光法测定葡萄糖标准曲线Fig.2Standard curve by Rotation method

表2　旋光法测定不同浓度粗多糖溶液中多糖的含量Table 2Content of polysaccharide by Rotation method

通过进行线性回归分析，得到多糖测定过程中，糖浓度与吸光度的回归方程：y=0.078 14x+0.019 1，相关系数R=0.997 48，表明方程拟合度较好。

由表2分析可知，不同浓度粗多糖溶液测定的多糖含量相差不大，说明旋光法测定多糖准确、重复性好，而且操作步骤简便，只需要加入一定的盐酸水解后即可快速测定。

3结论

采用旋光法和改进硫酸苯酚法测定芦荟多糖均不需要精密仪器，操作简便，稳定可靠。多糖含量的测定结果基本一致，分别为0.0993mg/mL和0.1065mg/mL。但旋光法只需采用一种试剂——盐酸处理后即可直接测定，因而此方法可作为一种稳定、可靠、快速的分析方法，用于监控检测芦荟多糖生产中原料及多糖制品的质量。

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Comparison of Methods in Determination of Polysaccharide in Aloe

MIAO Xiao-yan，HE Fu-qiang，CHEN Ping*
（Department of Biochemistry，Baoding University，Baoding 071000，Hebei，China）

Respectively by the method of polarimetry and phenol sulfuric acid method for the determination of Aloe coarse polysaccharide content of polysaccharide in.The results showed that optical method for the determination of the polysaccharide content and improved phenol sulfuric acid method for determination value were basically the same that was 0.099 3 mg/mL and 0.106 5 mg/mL；two methods for the determination ofpolysaccharide were accurate，stable and feasible.Therefore the polarimetry could be used as a simpler，more practical for the determination of polysaccharides content method，applied to the polysaccharide product quality testing and monitoring.

aloe polysaccharide；phenol-sulfuric acid；rotation

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.10.003

2013-12-07

苗晓燕（1980—），女（汉），讲师，硕士，主要研究方向：植物次生代谢及调控。*通信作者：陈萍（1959—），女，教授，主要研究方向：生物科学。