容积敏感性氯通道在急性胰腺炎早期的应用研究

文毅　许芳怡　康娟

容积敏感性氯通道在急性胰腺炎早期的应用研究

文毅许芳怡康娟

目的 观察容积敏感性氯通道在急性胰腺炎（AP）早期中的作用。方法 选取40只大白鼠建立AP模型，随机分为观察组和对照组，观察组给予容积敏感性氯通道抑制剂，对照组给予生理盐水安慰剂，对比分析两组大白鼠炎症因子变化情况。结果 观察组血清淀粉酶、TNF-α、IL-6均明显低于对照组，差异有显著性（P＜0.01）；观察组细胞凋亡指数明显高于对照组，差异有显著性（P＜0.01）；观察组水肿、炎症、出血及坏死等病理学评分明显低于对照组，差异有显著性（P＜0.01）。结论 容积敏感性氯通道在胰腺腺泡细胞急性炎症早期起着重要的作用，可通过容积敏感性氯通道抑制剂改善胰腺腺泡细胞急性炎症反应。

容积敏感性氯通道 胰腺腺泡细胞 急性炎症

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是消化内科常见的疾病之一，目前其发病机制尚未完全阐明。近年的研究证实，细胞凋亡不仅在生理状态下对细胞的选择、分化及衰老细胞的清除起重要作用［1］。容积敏感性氯离子通道普遍存在于哺乳动物细胞对维持细胞容积的动态平衡，调节细胞的电活动，以及对细胞内pH值、细胞增殖与分化、细胞的凋亡等多种生物学功能发挥重要的作用［2］。本文通过动物模型实验对容积敏感性氯通道进行研究，现将结果报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 本实验使用SPF级健康SD大鼠40只，其中雄性大鼠32只，体重为（305.6±26.8.5）g，未交配雌性大鼠28只，体重为（280.4±25.4）g，购自广西医科大学实验动物中心。实验使用药品：二磺酰苯乙烯类化合物（上海生工生物工程股份有限公司），临用前使用高压灭菌生理盐水配置稀释成所需的药物浓度。牛磺胆酸钠（STC）（上海生工生物工程股份有限公司）。灭菌生理盐水（上海生工生物工程股份有限公司），乌司他丁（UTI）（上海生工生物工程股份有限公司）。

1.2AP模型制备 制作AP动物模型前先将采购的SD大鼠喂养1周左右，每日观察SD大鼠健康状况，待适应后择期进行实验。实验前12h对SD大鼠进行严格的禁食，可适当给予少量饮用水。实验所用麻醉药品为3%戊巴比妥钠（北京普博斯生物产品），按照0.1ml/100g剂量给药。将麻醉后的SD大鼠固定在实验操作台，使用一次性外科手术刀从上腹正中作1～2cm的切口，充分暴露十二指肠和胆胰管，使用动脉夹夹闭胆总管阻断。使用钝15号针头进行穿刺，从十二指肠通过，由肠系膜边缘经乳头逆行进入胆胰管约1cm左右，勿插入太深，固定好穿刺针后，使用动脉夹夹闭针头插入部位的胆胰管。使用10ml注射器向胆胰管缓慢匀速（0.2ml/min）注入3%牛磺胆酸钠（1.0ml/ kg）。注射时间控制在1min左右，注射完成后停留3min，完成后去掉动脉夹和穿刺针头，消毒切口缝合腹壁关腹。

1.3方法 观察组大鼠给予二磺酰苯乙烯类化合物（美国BD公司）抑制容积敏感性氯通道，用法：250mg/次，使用生理1ml溶解后插胃管给药，1次/d，连续给药1周；对照组大鼠给予生理盐水安慰剂。

1.4观察指标 血清淀粉酶、血清TNF-α、血清IL-6、胰腺细胞凋亡指数、胰腺组织光镜下病理学评分。

1.5统计学方法 采用SPSS19.0统计软件包。计量资料以（±s）表示，组间比较采用成组设计t检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组炎症细胞因子变化的比较 见表1。

表1　观察组与对照组炎症细胞因子变化的比较（±s）

表1　观察组与对照组炎症细胞因子变化的比较（±s）

组别n血清淀粉酶（nkat/L）血清TNF-α（μg/L）血清IL-6（ng/L）观察组2067.8±3.53.2±0.21175.9±7.88对照组2015.24±4.80.92±0.0728.6±4.45 t值39.56840.06372.729 P值0.0000.0000.000

2.2观察组与对照组胰腺细胞凋亡情况的比较 见表2。

表2　观察组与对照组细胞凋亡情况的比较（±s）

表2　观察组与对照组细胞凋亡情况的比较（±s）

组别n细胞凋亡指数观察组208.56±1.61对照组200.13±0.04 t值23.409 P值0.000

2.3观察组与对照组胰腺组织光镜下病理学评分比较 见表3。

表3　观察组与对照组胰腺组织光镜下病理学评分比较（±s）

表3　观察组与对照组胰腺组织光镜下病理学评分比较（±s）

组别n水肿炎症出血坏死观察组200.21±0.18000对照组203.6±0.472.7±0.182.21±1.032.4±0.54 t值30.123 P值0.0000.0000.0000.000

3　讨论

AP发病时主要表现为大量组织细胞水肿、坏死，并释放大量的炎症介质，进一步加剧急性炎症的反应。近年研究表明，胰腺腺泡细胞凋亡与AP有密切的关系，主要表现为保护胰腺组织，防止胰腺组织进一步坏死，胰腺腺泡凋亡是一种保护性反应。 研究证实，通过诱导胰腺腺泡细胞发生凋亡可有效减轻AP进一步恶化坏死，减轻胰腺组织损伤程度［3］。促炎症细胞因子包括TNF-a、IL-ie、IL-6、IL-8等；抗炎细胞因子包括IL-4、IL-10、1L-12等［4］。炎症细胞因子和抗炎细胞因子在正常情况下表达较低，两者保持平衡水平，当促炎细胞因子在体内过多释放时，抗炎细胞因子相对不足，表现为炎症逐渐严重，机体出现全身炎症反应综合征。当抗炎因子释放过多时，促炎因子相对不足，表现为代偿性抗炎反应综合征。这两者平衡在治疗AP或者重症AP中起重要的作用。IL-6是预测AP严重程度的一个重要指标，检测IL-6可预测患者是否会出现重症AP，在AP发病后24h内对重症AP严重程度的预测敏感性和准确性均较高，可达＞90%，由于其在血液中浓度高峰出现的较早，即使在急诊救治过程中，亦有较高的预测价值。

本资料结果显示，观察组模型大鼠给予容积敏感性氯通道抑制后，血清淀粉酶、TNF-α、IL-6明显降低，说明通过抑制容积敏感性氯通道可以改变炎症细胞因子的浓度，从而控制胰腺腺泡细胞急性期炎症的反应，结果与文献报道相一致［5］。另外结果亦显示，观察组大鼠的胰腺细胞凋亡指数明显高于对照组大鼠，说明使用容积敏感性氯通道抑制剂后，胰腺炎症反应可得到有效控制，胰腺细胞主要以凋亡形式减少胰腺的炎症反应，文献研究亦证实了本研究结果［6］。使用容积敏感性氯通道抑制剂后观察组大鼠胰腺组织光镜下病理学评分明显低于对照组，说明使用抑制剂后，抑制胰腺炎症反应，胰腺细胞出现水肿、炎症、出血、坏死等明显减少，病理评分相对减少，研究结果与文献报道相似［7，8］。

本研究结果从动物模型中证实了容积敏感性氯通道在胰腺腺泡细胞急性炎症早期发挥重要的作用，通过使用容积敏感性氯通道可明显改善AP炎症反应。本实验结果为临床治疗AP提供了一个新的治疗方向。本文亦存在不足之处，由于本研究主要以动物为模型，因此，由动物实验研究推用至人还需进行更深入的研究。

1 Lee, EL, Shimizu T, Ise T, et al. Impaired activity of volume-sensitive Cl-channel is involved in cisplatin resistance of cancer cells. J Cell Physiol, 2007, 211（2）： 513～521.

2 万云,邹玲婷,沈佳庆,等. 血清CK与hs-CRP在急性胰腺炎诊断及预后评估中的价值. 浙江临床医学,2013, 15（5）： 678～679.

3 金牡丹,周智林,傅志泉.重症急性胰腺炎大鼠IL-8、IL-10及NF-kB的表达. 浙江临床医学,2008, 10（6）： 724～725.

4 朱长炎,赵海峰,曾宪有,等. 一种新型小鼠重症急性胰腺炎模型的制作及评估.中国组织工程研究,2012,16（42）：7861～7865.

5 Habela CW, Ernest NJ, Swindall AF, et al. Chloride accumulation drives volume dynamics underlying cell proliferation and migration. Neurophysiol, 2009, 101（2）： 750～757.

6 Hoffmann EK,Lambert IH, Pedersen SF. Physiology of cell volume regulation in vertebrates. Physiol Rev, 2009, 89（1）： 193～277.

7 Okada Y, Shimizu T, Maeno E, et al. Volume-sensitive chloride channels involved in apoptotic volume decrease and cell death. Membr Biol, 2006, 209（1）： 21～29.

8 Habela CW, Ernest NJ, Swindall AF, et al. Chloride accumulation drives volume dynamics underlying cell proliferation and migration. Neurophysiol, 2009, 101（2）：750～757.

Objective To observe the volume sensitive chloride channels in early stage of acute pancreatitis. Methods 40 rats were used toestablish the model of acute pancreatitis，were randomly divided into experimental group and control group，the experimental group was given the volume sensitive chloride channel inhibitor，the control group received saline placebo，comparative analysis of two groups on thechanges of inflammatory factor. Results Serum amylase，TNF-a，IL-6 in experimental group were significantly lower than those in the control group，the difference was statistically significant（P＜0.01）；in observation group，the apoptosis index was significantly higher than the control group，the difference was statistically signifi cant（P＜0.01）；observation group edema，infl ammation，hemorrhage and necrosis and other pathological score was significantly lower than that of the control group，the difference was statistically significant（P＜0.01）. Conclusion The volume sensitive chloride channels play an important role in the early stage of acute pancreatitis，can improve the acute infl ammatory response of pancreatitis through volume sensitive chloride channel inhibitor.

Volume sensitive chloride channels Pancreatic acinar cell Acute infl ammation

516002 广东省惠州市第三人民医院消化内科