PTEN蛋白在膀胱移行细胞肿瘤中的表达及临床意义

金鹏飞　谭　操　毛平花　王　芳

PTEN蛋白在膀胱移行细胞肿瘤中的表达及临床意义

金鹏飞谭操毛平花王芳

目的 分析PTEN蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）、腺性膀胱炎（CG）及正常膀胱黏膜组织中的表达特点及临床意义。方法 收集膀胱黏膜组织病理标本，其中膀胱癌51例，CG 42例，正常膀胱黏膜组织10例。采用S-P免疫组化法，检测PTEN蛋白在相应的膀胱黏膜组织石蜡切片中的表达特点。结果 PTEN蛋白在BTCC及CG组织表达的阳性率分别是58.82%、80.95%，而10例正常膀胱黏膜组织PTEN全呈阳性表达，三组比较总体有显著性差异（P＜0.01）；BTCC组与CG组及正常膀胱黏膜组比较均有显著性差异（P均＜0.05），而CG组与正常膀胱黏膜组间无差异（P＜0.05）。在51例BTCC病理分组中，PTEN蛋白的阳性表达GⅠ组与GⅡ、GⅢ比较总体有显著差异（P＜0.01），GⅠ组与GⅡ组及GⅢ组比较有显著差异（P＜0.01），而GⅡ组与GⅢ组比较无差异（P＜0.05）；临床分期中，Tis-T1组与T2-T4组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PTEN蛋白在BTCC中的阳性表达率较CG及正常膀胱黏膜组织中低，其阳性表达率随着肿瘤恶性程度、病理分级的增加而降低，在一定程度上有助于膀胱癌与正常膀胱黏膜组织及恶性程度、病理分级的区别。

PTEN 膀胱癌 腺性膀胱炎 免疫组化

膀胱移行细胞癌（BTCC）是泌尿系统最常见的肿瘤，占男性肿瘤的6%，病死率约5.5%，其中移行上皮细胞癌占94%，其特点为多中心性、易复发性，且在复发中又有部分浅表性的肿瘤进展为浸润性肿瘤。近年来被克隆的一个新的抑癌基因PTEN在细胞的生长发育、凋亡、迁移、信号传递等方面具有重要作用，参与细胞增殖和凋亡时所发生的去磷酸化作用［1］，提示PTEN基因的缺失或突变可能与肿瘤的发生相关并与临床分期及肿瘤级别相关。本资料通过S-P免疫组化方法，检测BTCC、腺性膀胱炎（CG）及正常膀胱黏膜组织标本中PTEN蛋白的表达特点，分析PTEN蛋白阳性表达率与BTCC的诊断与恶性程度、病理分级的判断的相关性，以便更好的为临床治疗提供理论依据。

1　临床资料

1.1一般资料 收集温州医科大学附属第一医院泌尿外科于2012年8月至2014年1月间经病理活检确诊的组织病理石蜡标本。其中膀胱癌51例，包括GⅠ期15例、GⅡ期16例、GⅢ期20例。Tis～T1期27例、T2～T4期24例。CG 42例，正常膀胱黏膜组织10例，均为2007～2009年间的尸解膀胱黏膜组织和膀胱黏膜活检标本，标本均用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋。

1.2仪器设备 HD-300系列生物组织智能脱水机（湖北慧达仪器有限公司）；ZMN-7803生物组织包埋机（湖北泰康医疗设备有限公司）；202-0A 恒温干燥箱（上虞市道墟镇景诺仪器设备厂）；PM30-35DX2全自动照相系统（Olympus，日本）。

1.3主要试剂 0.1MPBS缓冲液（pH7.4）、0.1M柠檬酸缓冲液（pH6.0）及L-多聚赖氨酸等（北京派特博恩生物技术开发有限公司）；UltraSensitiveS-P超敏试剂盒（包括试剂A、B、C及D），鼠抗人PTEN/ MMAC1免疫组化单克隆抗体，DAB显色试剂盒。

1.4实验方法 （1）载玻片制作：首先采用洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后，再于水中浸泡30 min.配制足量的500μg/ml多聚-L-赖氨酸水溶液，逐一浸载玻片。经空气干燥后，贮于4℃备用。（2）染色步骤：对石蜡块进行切片，厚度约4～6μm，分别做HE染色及免疫组化染色，PBS液代替一抗作为空白对照。HE染色：经常规脱蜡处理后，苏木素染色，流水冲洗，盐酸酒精分化，再次流水冲洗返蓝，放入95%乙醇数秒，伊红染色。脱水、透明、中性树胶封片，显微镜下观察。PTEN免疫组化染色：严格按试剂盒要求进行操作，主要行抗原修复，除去PBS液，除去血清，再次除去PBS液3次，冲洗，苏木紫溶液复染，盐酸酒精分化，返蓝。脱水，中性树脂封片，在光学显微镜下观察结果。PTEN免疫组化阴性对照染色：染色步骤中以PBS液代替一抗，余同PTEN免疫组化染色步骤。

1.5结果判定 由两位专业的病理科医师采用双盲法进行判断，并采用全自动照相系统进行图像的采集。判定标准［2］：PTEN阳性染色为肿瘤细胞核呈棕褐色颗粒，其中强阳性（+++）：阳性细胞＞50%；中度阳性（++）：阳性细胞25%～50%；轻度阳性（+）：阳性细胞＜25%。阴性（-）：整个切片未见阳性染色。

1.6统计学分析 采用SPSS 17.0版统计学软件包。采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1PTEN蛋白在BTCC、CG及正常膀胱黏膜组织的表达情况 见表1。

表1　PTEN蛋白在BTCC、CG及正常膀胱黏膜组织的表达比较［n（%）］

2.2PTEN蛋白在BTCC中的表达情况 见表2。

表2　PTEN蛋白的表达与BTCC的病理分级及临床分期中的关系（%）

3　讨论

BTCC的发生发展可能与癌基因和抑癌基因功能的缺失有关。PTEN是1997年由Steck等［3］发现的一个具有双重特异磷酸酶活性的肿瘤抑制基因，又称MMAC1/TEP1，位于染色体10q23.3，可通过对细胞内外信号传导的负调控发挥其抑癌作用。

有研究人员［4］采用S-P免疫组织化学法对膀胱癌组织中PTEN进行分析发现，PTEN蛋白的表达率在浅表性较浸润性明显增高；且随分级程度及临床分期的升高，PTEN蛋白表达呈明显降低趋势。此外，在低分级（GⅠ）中PTEN蛋白表达率较高分级（GⅡ～Ⅲ）呈明显升高趋势。郭永联等［5］采用Western印迹杂交法检测正常膀胱组织及膀胱癌组织中PTEN蛋白的表达，结果表明正常膀胱组织中PTEN蛋白的表达较膀胱癌组织中的表达明显增高（P＜0.01）；且临床分期越低，分化越好，PTEN蛋白的表达越高（P＜0.05）。由此可见，PTEN基因的突变或缺失在膀胱癌的发生、发展中起着非常重要的作用。

按ICUU-TNM标准临床病理分期标准和WHO标准分级将BTCC分为Tis-T1与T2-T4组，GⅠ组、GⅡ组及GⅢ组。本实验结果说明随着移行膀胱癌临床分期的降低，PTEN基因的缺失率也相应降低。结果与既往文献报道基本一致［6，7］。

CG是一种膀胱黏膜上皮反应性化生、增生性改变。在临床实践中，其诊治与浅表性膀胱癌大致相同。近年来，随着相关研究的深入，CG检出率呈现明显上升趋势，其中以中青年女性居多［8］，其现已成为泌尿外科的常见疾病之一，但是其具体发病机制至今未完全阐明。

CG与膀胱肿瘤的关系密切，但目前较少有关于PTEN在CG中的研究报道。在本实验CG石蜡切片中，PTEN蛋白阳性表达率为80.95%。与膀胱癌组的表达情况比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而与正常黏膜组比较差异无统计学意义（P＜0.05）。提示CG的发生与膀胱癌的发生过程存在差异，说明CG可能不是癌前病变，只是正常膀胱黏膜在刺激因素的作用下向癌发展的某个病变阶段，故采取治疗方法可依具体情况而定。

综上所述，PTEN蛋白的表达与膀胱癌的生物学行为关系密切，其阳性表达率随着肿瘤恶性程度、病理分级的降低而增加。积极明确BTCC发生和发展过程中各种基因的改变及相互关系，检测 PTEN蛋白的表达可能对于其早期诊断和预后有一定参考价值。

1 赵欣楠，于兆进，魏敏杰，等.PTEN与肿瘤研究进展.现代肿瘤医学，2012，20（7）： 1507～1510.

2 林延峰，于昕，吴斌.PTEN蛋白在膀胱癌中的表达及意义.中国医科大学学报，2004，33（3）：255～156.

3 PA Steck ，M A Pershouse ，S A Jasser ，et al.Identification of a candidate tumour suppressor gene，MMAC1，at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers.Nature genetics，1997，15 （4）：356～362.

4 黄军科，张向阳，罗亚桐，等.PTEN基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义.医学临床研究，2007，24（9）：1488～1490.

5 郭永联，周四维，张小平，等.抑癌基因PTEN在膀胱癌组织中的表达及其与Akt磷酸化的相关性.临床泌尿外科杂志，2007，22（7）： 544～549.

6 刘双林，吴准，李俊，等.PTEN在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义.现代泌尿外科杂志，2008，13（4）： 371～372.

7 薄五海.膀胱移行细胞癌中PTEN的表达分析.中国医师杂志，2007，15（6）： 33～34.

8 曲仕浩，曾志宇，江伟东.经尿道电切术与电灼术治疗腺性膀胱炎的疗效比较.浙江实用医学，2011，22（20）： 42～43.

Objective Ⅰnvestigates expression of PTEN（Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN） in bladder transitional cell carcinoma（BTCC） and its clinical signifi cance. Methods Fifty-one cases of bladder transitional carcinoma，forty-two cases of Cystitis Glandularis（CG） and ten cases of normal bladder tissue 10 cases of normal bladder tissue were collected. All samples were derived from cystoscopic biopsy and were subjected to histopathological examination to confi rm the diagnosis.Ⅰmmunohistochemistry S-P. Methods was used to demonstrate the expression of PTEN. Results The positive rate of PTEN expression in BTCC，CG and normal bladder tissue were 58.8%，81% 100%，and there was statistic signifi cance（P＜0.01） among three groups. 51 cases of BTCC were divided into group GⅠ，GⅡ，GⅢ and Tis -T1，T2-T4，and there was statistic significancy among group GⅠ and GⅡ、GⅢ（P＜0.01），between group Tis -T1 and T2-T4（P＜0.05）. Conclusion The reduced expression or loss of PETN might play an important role in carcinogenesis and progression of bladder cancer.The positive rate of PTEN expression was negatively correlated to the clinical and grade staging of tumor.

PTEN Cystitis glandularis BTCC Ⅰmmunohistochemistry

317500 浙江省温岭市第一人民医院外科中心（金鹏飞）

325000 温州医科大学附属第一医院（谭操 毛平花王芳）