应用薄层色谱法对防风中药材检测标准的研究

李雪真，许彬

（1.沈阳市化工学校，辽宁沈阳110000；2.辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳110016）

应用薄层色谱法对防风中药材检测标准的研究

李雪真1，许彬2

（1.沈阳市化工学校，辽宁沈阳110000；2.辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳110016）

为了使防风散检测方法更为完善，本实验对防风散中防风药材的检测方法进行了研究。检测方法采用薄层色谱法。本实验各项目设计科学合理，防风药材的薄层鉴别主斑点不受方中其他药材组分的干扰，专属性强，重现性好，检测快速准确。

防风散；防风药材；薄层色谱法

防风散收载于《中国兽药典》2010年版二部，由防风、独活、连翘、升麻、柴胡、淡附片、乌药、羌活、当归、甘草、葛根、山药十二味中药组成，具有祛风湿、调气血之功效，主治大家畜腰跨风湿之症[1]。目前全国有近百家兽药生产企业生产该产品。防风散现行质量标准，其鉴别项为显微鉴别，鉴别防风、连翘、升麻、柴胡、羌活、当归、山药七味药材，无其他定性与定量检测方法。且防风为处方中君药，制剂中防风性辛、甘，微温，有祛风解表、胜湿止痛的功效[2]。本文对防风散进行薄层鉴别研究，试验各项目设计科学合理，防风药材的薄层鉴别主斑点不受处方中其他药材组分的干扰，专属性强，重现性好，检测快速准确，为防风散的质量控制提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验仪器Linomat5半自动点样器（瑞士Camag公司）；AG285型分析天平（Mettler Toledo仪器有限公司，感量0.000 01 g）；PB602-S型分析天平（Mettler Toledo仪器有限公司，感量0.01 g）；层析缸等。

1.2 试验药品、样品与薄层板石油醚（60～ 90℃）、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、甲醇、乙醇、醋酸、硫酸等为分析纯；水为蒸馏水。

组方中防风、独活等12味药材,均购于丹东边境经济合作区景江医药有限公司，执行《中华人民共和国药典》2010年版二部标准。药材经检测符合相关规定。

薄层板：硅胶G板，青岛海洋化工厂，规格100 mm×200 mm，厚度0.20～0.25 mm；活度：三色分开；批号∶20080219（使用前105℃活化30 min）。

1.3 试验方法

1.3.1 薄层法1

1.3.1.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各4.5 g（相当于含防风药材0.5 g），加三氯甲烷20 mL，浓氨试液密塞，振摇10 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.1.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各5 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

1.3.2 薄层法2

1.3.2.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加丙酮30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.2.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对照药材溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各10 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶GF254

展开剂：三氯甲烷-甲醇（4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

色谱观察：置紫外光灯（254 nm）下检视

1.3.3 薄层法3

1.3.3.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[3]。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.3.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各5 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶GF254

展开剂：三氯甲烷-甲醇（4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

色谱观察：置紫外光灯（254 nm）下检视

1.3.4 薄层法4

1.3.4.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.4.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各10 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：石油醚（60～90℃）-乙醚（4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

1.3.5 薄层法5

1.3.5.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加无水乙醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[4]。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.5.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各5 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：氯仿-乙酸乙酯-甲醇（10∶3∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

显色方式：喷以10%硫酸乙醇溶液

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

1.3.6 薄层法6

1.3.6.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加丙酮40 mL，回流30 min，滤过，滤液挥去丙酮，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.6.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对对照药材溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各6 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸-水（15∶1∶1∶2）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

显色方式：喷以10%硫酸乙醇溶液

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

1.3.7 薄层法7

1.3.7.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加丙酮100 mL，加热回流1 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.7.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各5 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

1.3.8 薄层法8

1.3.8.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加乙醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液加石油醚（60～90℃）50 mL萃取，弃去石油醚液，取乙醇液用乙酸乙酯萃取3次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液，并浓缩至1 mL，作为供试品溶液[5]。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.8.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各10 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

显色方式：喷以10%氢氧化钠溶液

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

1.3.9 薄层法9

1.3.9.1 溶液的制备样品溶液制备：取自制防风散缺防风阴性样品、自制防风散、厂家样品各9 g（相当于含防风药材1 g），加乙醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液加乙醚15 mL，萃取2次，合并萃取液，浓缩至1 mL，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

1.3.9.2 点样及展开、色谱观察点样量：上述对照药材溶液、阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液各5 μL。

点样方式：LTNOMAT5半自动点样器点样（点状）

薄层板吸附剂类型：硅胶G

展开剂：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）

展开条件：温度22℃；相对湿度50%

展距：9 cm

色谱观察：置紫外光灯（365 nm）下检视

2 结果与分析

2.1 薄层法1试验结果见图1。自制样品溶液、厂家样品溶液，在与对照药材色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性样品溶液在与对照药材色谱和对照药材色谱相应的位置上，也显相同颜色的斑点。故此方法存在阴性样有干扰问题，未采纳。

图1 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.1 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.2 薄层法2试验结果见图2。阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液无主斑点，溶液展开后为条带状，故未采纳。

2.3 薄层法3试验结果见图3。阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液无主斑点，溶液展开后为条带状，故未采纳。

2.4 薄层法4试验结果见图4。对照药材主斑点Rf＜0.3；阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液无主斑点，溶液展开后为条带状，故未采纳。

图2 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.2 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

图3 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.3 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.5 薄层法5试验结果见图5。自制样品溶液、厂家样品溶液的主斑点位置与对照药材色谱主斑点位置不一致；而且阴性样品溶液在与自制样品溶液、厂家样品溶液色谱相应的位置上，也显相同颜色的斑点，故未采纳。

图4 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.4 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

图5 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.5 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

图6 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.6 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

图7 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.7 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.6 薄层法6试验结果见图6。自制样品溶液、厂家样品溶液，在与对照药材色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性样品溶液在与对照药材色谱和对照药材色谱相应的位置上，也显相同颜色的斑点。故此方法存在阴性样有干扰问题，而且样品溶液在Rf0.92位置处为条带状，与对照药材色谱和对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点。故未采纳。

2.7 薄层法7试验结果见图7。阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液薄层图谱呈条带状；在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点，故未采纳。

2.8 薄层法8试验结果见图8。阴性样品溶液、自制样品溶液、厂家样品溶液薄层图谱呈条带状；在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点，故未采纳。

图8 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.8 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

图9 防风散中防风薄层色谱鉴别研究色谱图Fig.9 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.9 薄层法9试验结果见图9。自制样品溶液、厂家样品溶液，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且主斑点在Rf 0.3～0.7；阴性样品溶液在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点，防风药材的薄层鉴别主斑点不受方中其它药材组分的干扰，其方法可行。

3 讨论和结论

为了使防风散检测方法更为完善，本试验对防风散中防风药材的检测标准进行了方法学研究。依处方进行取样量折算，在薄层色谱鉴别中采用自配缺防风的阴性样品、防风对照药材、自制样品和厂家样品用同一方法，在同一色谱条件下进行试验[6-7]，薄层方法9中，防风药材的薄层鉴别主斑点不受方中其他药材组分的干扰，其方法可行，专属性强，重现性好，并且描述准确。本薄层色谱方法对制定防风散的质量标准具有参考价值。

[1]中国兽药典2010年二部[S].北京：中国农业出版社，2005.

[2]中药大辞典[M].上海科技出版社,1995.

[3]孙景，杨继彪，张小龙，石磊.止咳化痰丸中黄芩和防风的薄层鉴别[J]新疆中医药，2014，32（5）：67-68.

[4]黄兰芷，王曙宾.连防感冒颗粒中防风薄层鉴别方法改进[J]中南药学，2007，4（2）：149-150.

[5]陈黄宝.七星茶中钩藤及防风的薄层色谱鉴别[J].广东药学，1994，04：21-22.

[6]王建华，于磊昇，楼之岑.防风类药材的薄层色谱鉴别[J].中国药学杂志，1990，04：221-222.

[7]蒋孟良.防风薄层层析研究[J].湖南中医学院学报，1998，8（3）：45.

Studies on testing standards for Saposhnikoviae application of thin-layer chromatography

Li Xuezhen1,Xu Bin2

(1.Shenyang Chemical Industry School,Liaoning Shenyang 110000; 2.Liaoning Province Quality Inspection and Test center for Veterinary Drug feed and Animal product，Liaoning Shenyang 110016)

In order to make the Fangfeng powder detection method more perfect,the detection method of Fangfeng powder in the experiment of Saposhnikoviae was studied.Detection method using thin-layer chromatography.In this experiment,the project design is scientific and reasonable, the main spot of thin-layer chromatography identification of Saposhnikoviae is not affected by other medicine components of interference,strong specificity,good reproducibility,rapid and accurate detection.

Fangfeng powder;Saposhnikoviae;thin layer chromatography

S858.23

B

1672-9692(2015)03-0016-06

2015-02-19

李雪真（1964-），女，高级讲师，研究方向为应用化学。