百癣夏塔热软膏中槲皮素与没食子酸的含量测定及稳定性研究

王瑞芳等

【摘要】目的：建立百癣夏塔热软膏高效液相色谱测定方法，并考察该制剂的稳定性。方法：采用高效液相色谱法测定软膏中槲皮素和没食子酸的含量，考察湿度、光照及温度对百癣夏塔热软膏稳定性的影响。结果：槲皮素在004 ～04μg/ml范围内线性关系良好；没食子酸在002～02μg/ml范围内线性关系良好；百癣夏塔热软膏对湿度和强光照射不敏感；于40℃、75%湿度下加速实验，第6个月外观发生变化，含量明显下降。结论：建立的方法具有简便、快速和准确度高等优点；该制剂对强光及高湿不敏感，室温密闭保存含量稳定。

【关键词】百癣夏塔热软膏；槲皮素；没食子酸；高效液相色谱法；稳定性

【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）16-0026-02

百癣夏塔热软膏为外用制剂，处方来源于《中华人民共和国卫生部药品标准—维吾尔分册》中收载的传统维药百癣夏塔热片。具有清除异常粘液质、胆液质及败血，消肿止痒的功效。临床用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣、银屑病、过敏性皮炎、带状疱疹、痤疮等。方中君药地锦草的主要有效成分为槲皮素，诃子肉、毛诃子肉、西青果的主要有效成分均为没食子酸，所以我们选用槲皮素和没食子酸作为含量测定指标，本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定软膏中槲皮素和没食子酸的含量，并考察光照、温度及湿度等因素对百癣夏塔热软膏稳定性的影响。

1仪器与材料

11仪器LC2010A HT高效液相色谱仪（日本岛津）；BT25S十万分之一分析天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）。

1.2材料槲皮素对照品（批号：100081-200406）、没食子酸对照品（批号：11083-200302）均由中国药品生物制品检定所提供。百癣夏塔热软膏（批号：130320、130321、130322，新疆奇康哈博维药有限公司研究院）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2槲皮素的含量测定

2.1色谱条件色谱柱：Kromasil 100-5 C18 column（150mm×46mm）；流动相：甲醇-04%磷酸溶液（50：50）；柱温：25℃；流速：1ml/min；检测波长：370nm。

2.2供试品溶液的制备取百癣夏塔热软膏约1g，精密称定，至具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，称定重量，置于80℃水浴中保持10min，并不停震荡，滤过，取续滤液即得。

2.3标准曲线的绘制精密称取槲皮素对照品5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液1、2、4、6、8、10ml移至25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取进样10μl测定。以进样量（x）对峰面积（y）作图，得到标准曲线图，其回归方程为y=162769x+395085，r=09998（n=6）。表明槲皮素在004 ～04μg/ml范围内线性关系良好。

2.4精密度实验分别配制高、低2种浓度的槲皮素对照品各5份，分别测定，测定槲皮素峰面积，结果RSD值分别为071%和053%。说明仪器的精密度良好。

2.5稳定性实验取同一供试品溶液，室温密闭放置，分别于0、2、4、6、8h进样10μl，测定槲皮素的峰面积，RSD为087%（n=5），说明样品在8h内较为稳定。

2.6重复性实验取同一批样品5份，按“2.2”的方法制成供试品溶液，测定槲皮素的平均峰面积，RSD为072%（n=5）。

2.7加样回收率实验精密称取槲皮素对照品6mg，加入到10g乳膏剂基质中，充分研磨均匀，再精密称取该样品1g，溶于50ml 80%甲醇中，置于80℃水浴中保持10min，并不停震荡，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，计算回收率，结果见表1。

28样品测定取3批百癣夏塔热软膏按“2.2”的方法制成供试品溶液，测得3批样品中槲皮素的含量，结果见表2。

3没食子酸的含量测定

31色谱条件色谱柱：Kromasil 100-5 C18 column（250mm×46mm）；流动相：甲醇-01%磷酸溶液（10：90）；柱温：25℃；流速：1ml/min；检测波长：270nm。

32供试品溶液的制备 取百癣夏塔热软膏约1g，精密称定，至具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

33标准曲线的绘制精密称取没食子酸对照品5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液1、2、4、6、8、10ml移至50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10μl测定。以进样量（x）对峰面积（y）作图，得到标准曲线图，其回归方程为y=15128x+478660，r=09996（n=6）。表明没食子酸在002～02μg/ml范围内线性关系良好。

34精密度实验分别配制高、低2种浓度的槲皮素对照品各5份，分别测定，测定没食子酸的峰面积，结果RSD值分别为052%和047%，说明仪器的精密度良好。

35稳定性实验取同一供试品溶液，室温密闭放置，分别于0、2、4、6、8h进样10μl，测定没食子酸的峰面积，RSD为059%（n=5），说明样品在8h内较为稳定。

36重复性实验取同一批样品5份，按“32”的方法制成供试品溶液，测得没食子酸的峰面积，RSD为093%（n=5）。

37加样回收率实验精密称取没食子酸标准品5mg，加入到10g适量乳膏剂基质中，充分研磨均匀；再精密称取该样品1g，精密加入50ml 50%甲醇，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，计算回收率，结果见表2。