猪伪狂犬、繁殖与呼吸障碍综合征和链球菌混合感染诊断

南文金 黄健强 胡鸿惠 吴静波

摘 要：广东某猪场，哺乳仔猪和保育猪舍仔猪出现以神经症状、呼吸困难和关节炎为主要特征的疾病。发病猪样品经过实验室检测，结果表明猪伪狂犬病毒gE抗体和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸呈阳性，细菌分离鉴定猪链球菌2型为阳性。综合临床症状、剖检变化及实验室检测结果，该例传染病诊断为猪伪狂犬病毒、繁殖与呼吸障碍综合征病毒和链球菌混合感染。

关键词：猪伪狂犬病毒；繁殖与呼吸障碍综合征病毒；链球菌；诊断

中图分类号 S852 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2015）17-102-03

Diagnosis for Mixed Infection of Pseudorabies，Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome and Streptococcus

Nan Wenjin et al.

（Laboratory of Animal Disease，Shaoguan University，Shaoguan 512005，China；North Guangdong Collaborative Innovation and Development Center of Pig Farming and Disease Control，Shaoguan 512005，China）

Abstract：A pig farms in Guangdong，suckling pigs and nursery pigsbroken out neurological symptoms，dyspnoea and arthritis as the main clinical characteristics of the disease. Samples of infected pigs through laboratory tests，the results showed that the Porcine Pseudorabies virus（PRV）gE antibodyand Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus（PRRSV）nucleic acid positive，and the bacterial isolation and identification showed that Streptococcus suis type 2（SS2）positive. Comprehensiveclinical symptoms，pathological anatomical change and laboratory test results，the case of infectious disease diagnosis of PRV，PRRSV and SS2 co-infection.

Key words：Pseudorabies virus；Porcine Reproductive and respiratory syndrome virus；Streptococcus；Diagnosis

广东某猪场，哺乳后期仔猪和保育舍仔猪出现关节肿胀，神经症状，呼吸困难等症状，随着病程发展，发病仔猪食欲废绝，逐渐消瘦死亡，损失较大。综合临床症状，病理变化和实验室检测结果，确诊为猪伪狂犬、猪繁殖与呼吸综合征和链球菌混合感染。

1 发病情况

广东某猪场，存栏母猪300头，2014年9月份开始哺乳后期个别仔猪开始出现呼吸道症状和神经症状，断奶仔猪转入保育舍后部分出现后肢关节肿胀，神经症状增多，体温上升，呼吸困难，逐渐消瘦死亡。发病后怀疑为副猪嗜血杆菌或链球菌，采用多种抗生素保健和治疗，效果不理想，保育舍发病率和死亡率不断增加，2014年12月份猪舍保育舍仔猪发病率达40%，发病猪死亡率接近60%。

2 解剖病变

解剖发病和死亡保育猪，普遍存在心包、胸腔和腹腔有积液；肺脏肿胀、间质性性肺炎；肝脏和脾脏肿大、部分肝脏表面覆盖纤维素性渗出物，偶见白色坏死点；肿大的关节腔里有渗出液；腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结肿大充血；肾脏有点状血；脑膜水肿明显，个别充血。

3 实验室诊断

3.1 样品采集 无菌采集发病保育猪心血、关节液、淋巴结、肺脏和脾脏组织5份；随机采集19头有临床症状的仔猪（产房仔猪和保育舍保育猪）和25头怀孕母猪前腔静脉血3～5mL，实验室分离分离血清备用。

3.2 主要试剂 Taq PCR Mastermix、DL 2000 DNA Marker、RNAiso Plus、cDNA第一链试剂盒购自宝生物工程（大连）有限公司；琼脂糖购自Sigma公司；猪蓝耳病抗体检测试剂盒和猪伪狂犬野毒抗体检测试剂盒购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；营养琼脂购、小牛血清、药敏纸片购置杭州天和微生物试剂有限公司；其余试剂均为国产分析纯。

3.3 主要仪器 PCR仪、恒温金属浴为杭州博日科技有限公司产品；恒温培养箱为韶关科力仪器设备公司生产；凝胶成像系统为法国VILBER公司生产；台式冷冻离心机、全波长酶标仪为美国Therm Fisher公司生产；移液器为芬兰百得公司生产；超净工作台为苏州净化科技有限公司生产。

3.4 血清学检测 按IDEXX抗体检测试剂盒使用说明对采集的母猪和仔猪血清样品进行猪蓝耳病抗体检测和猪伪狂犬野毒抗体检测。结果19头仔猪蓝耳病抗全部呈阳性，阳性率100%，平均S/P值2.34，抗体离散度高达81.6%；19头仔猪猪伪狂犬野毒抗体阳性的7头，野毒抗体可疑的2头。25头母猪蓝耳病抗全部呈阳性的有19头，阳性率76%，平均S/P值1.74，抗体离散度高达73.3%；25头母猪伪狂犬野毒抗全部呈阳性的有6头，猪伪狂犬野毒阳性率24%。

3.5 病毒检测 用实验室建立的猪蓝耳病经典毒株和变异毒株鉴别诊断RT-PCR、猪瘟病毒RT-PCR和猪圆环病毒PCR检测方法进行血清和病料中病毒核酸检测。

3.6 细菌分离鉴定 取新鲜的病料组织和关节液触片，革兰氏染色后镜检。用无菌接种环取少量关节炎接种到THB培养基中，37℃，培养18h，取少量菌液进行革兰氏染色，同时用猪链球菌2型特异性鉴定引物进行PCR鉴定。

3.6 细菌药敏试验 将PCR鉴定过的链球菌2型菌株纯培养物均匀涂布于含小牛血清的LB琼脂平板上，常规K-B纸片扩散方法进行药敏试验，准确记录抑菌圈直径。

4 结果

4.1 血清学检测结果 19头仔猪蓝耳病抗全部呈阳性，，阳性率100%，平均S/P值2.34，抗体离散度高达81.6%；19头仔猪猪伪狂犬野毒抗体阳性的7头，野毒抗体可疑的2头。25头母猪蓝耳病抗全部呈阳性的有19头，阳性率76%，平均S/P值1.74，抗体离散度高达73.3%；25头母猪伪狂犬野毒抗全部呈阳性的有12头，猪伪狂犬野毒阳性率48%。

4.2 病毒检测结果 对采集的8头发病保育猪血清提取RNA后进行了蓝耳病核酸扩增，结果1～4号血清样品蓝耳病变异毒株和经典毒株呈阳性（418bp和508bp），5号样品变异毒株阳性（418bp），6～8号样品蓝耳病扩增为阴性（见图1）。对采集的4份病料进行了猪瘟、猪圆环病毒PCR扩增，均无目的条带扩增。

图1 猪蓝耳病变异毒株和经典毒株RT-PCR鉴定结果

注：1-8：血清样品；M：DNA Marker DL 2000。

4.3 细菌检测结果 新鲜病料触片革兰氏染色可见优势菌为成对或短链状排列，接种BHT培养基进行链球菌增菌培养后革兰氏染色可见典型的链球菌，经过猪链球菌2型PCR鉴定为猪链球菌2型菌株（见图2和图3）。

图2 BHT增菌培养后革兰氏染色（1000X）

图3 猪链球菌2型PCR鉴定

注：SS：链球菌；M：DNA Marker DL2000。

4.4 药敏试验结果 选择常用的兽用抗菌药物进行药敏试验，结果表明，该菌株对庆大霉素、新霉素、丁胺卡那霉素、阿莫西林、青霉素、磺胺间甲氧嘧啶、泰妙菌素、氟苯尼考几乎都不敏感。

5 诊断结果

依据实验室血清检测和病原检测结果，结合临床症状、病理变化和疫苗免疫程序，本次疫情诊断为猪伪狂犬野毒感染，同时该猪场蓝耳病变异毒株处于活跃期，猪群发病后又继发感染链球菌2型，造成了保育猪死亡较多。

6 防治措施

及时淘汰没有饲养价值的发病猪并进行无害化处理，加强全场饲养管理，增加消毒次数，饲料和饮水中添加电解多维。全场所有猪紧急免疫猪伪狂犬基因工程疫苗，种猪和中大猪肌肉注射3头份，保育舍小猪肌肉注射2头份，21d后再加强免疫1次。产房现有仔猪滴鼻免疫1头份，断奶转群前再肌肉注射1次。

该场原伪狂犬疫苗免疫不科学，母猪每年免疫2次，小猪45日龄左右肌肉注射疫苗1次。鉴于伪狂犬野毒感染比例较高，必须增加滴鼻免疫，产房新分娩仔猪出生当天进行滴鼻免疫1头份，60日龄左右肌肉注射疫苗1次，90日龄加强免疫1次，公猪和母猪每90d伪狂犬免疫1次。30d后，生产基本恢复正常，新出生的仔猪发病率和死亡率大大降低。

7 讨论

我国猪伪狂犬疫病控制成效较好，很多猪场都成功净化了该疫病。但近2a来猪伪狂犬疫情在部分地区爆发，一些伪狂犬阴性场短时间内转阳，在部分猪场造成较大损失。该场就是因为忽视了伪狂犬疫苗免疫，种猪免疫次数减少，商品猪免疫程序不科学，造成伪狂犬野毒感染。

混合感染成为猪病主要发病形式，疾病临床症状和病理变化不典型，依据传统经验很难做出一个准确的诊断，特别是在蓝耳病病毒普遍感染情况下，对一些疫病要通过实验室检测，根据检测结果综合判断，才能制定科学合理的防治措施。 （责编：徐焕斗）