n-3脂肪酸对重症急性胰腺炎早期调控机制研究

张勇 张小峰

n-3脂肪酸对重症急性胰腺炎早期调控机制研究

张勇 张小峰

目的 探讨n-3脂肪酸对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)早期调控机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常组(开腹后翻动胰腺数次后尾静脉注射生理盐水)、治疗组(造模成功后, 尾静脉注射n-3脂肪酸)和SAP组(造膜成功后, 尾静脉注射生理盐水), 各10例, 并3 h取材。观察血清丙二醛(MDA)、淀粉酶(AMY)、超氧化物歧化酶(SOD), 胰腺核因子κB(NF-κB)及病理损伤。结果 SAP组血清MDA、AMY、胰腺NF-κB及病理损伤明显高于治疗组和正常组(P＜0.05), 治疗组这些指标均高于正常组(P＜0.05)；而SOD在正常组明显高于治疗组和SAP组(P＜0.05), 治疗组明显高于SAP组(P＜0.05)。结论 n-3脂肪酸是一种免疫调理营养脂肪乳剂, 早期具有调节炎症反应, 减少氧自由基生产, 减轻胰腺组织损伤, 对胰腺炎具有一定保护作用。

n-3脂肪酸；胰腺炎；核因子κB

胰腺炎是临床上常见的危重疾病, 病情发展快, 病死率高。一直以来是外科临床值得进一步探讨的课题, 至今其发病机制尚未完全阐明。本实验探讨n-3脂肪乳在大鼠胰腺炎早期中的调控作用, 以进一步认识SAP的发病机制, 并为SAP的治疗寻找新的有效靶点。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源 取SPF级SD大鼠30只, 体重200～250 g。牛磺胆酸钠购自美国Sigma公司, MDA、AMY、SOD等试剂盒购自上海科敏生物科技有限公司, n-3脂肪乳购自上海三共制药有限公司。

1.2 分组和模型制备 随机将大鼠分为正常组、治疗组和SAP组, 各10只。SAP造模方法：大鼠术前禁食12 h, 不禁水, 6%水合氯醛(0.35 ml/100 g)腹腔注射麻醉。在无菌操作下行腹正中切口切开大鼠腹部, 暴露十二指肠及主胰管。无损伤血管夹闭胆总管、胰管末端, 以4.5号头皮针经十二指肠乳头逆行穿刺胆胰管末端, 缓慢匀速注射4%牛磺胆酸钠(0.1 ml/100 g), 注射时间为2～3 min, 完毕后拔除头皮针, 保留5 min后移去血管夹。0.5 h后取胰腺病理组织行HE染色,提示有出血坏死改变, 为造模成功。SAP组：造模成功后尾静脉注射0.9%生理盐水0.2 ml/(kg·d)；治疗组：造模成功后尾静脉注射n-3脂肪酸0.2 ml(kg·d)；正常组：开腹后翻动胰腺数次后给予尾静脉注射0.9%生理盐水0.2 ml(kg·d)。1.3 标本检测方法 胰腺组织HE染色和病理评分, HE染色后光镜下观察, 并根据Schmidt 等［1］评分；AMY采用碘—淀粉比色法；采用硫代巴比妥酸(TBA)法检测血清MDA水平；采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD；免疫组化检测胰腺组织中NF-κB。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

NF-κB在正常组织中基本上不表达, 在SAP组和治疗组胰腺组织中主要在细胞核中表达或细胞核伴胞质中表达。3 h SAP组血清MDA、AMY、NF-κB及病理损伤明显高于治疗组和正常组, 差异均具有统计学意义(P＜0.05), 治疗组这些指标显著均高于正常组, 差异有统计学意义(P＜0.05)；而SOD在正常组明显高于治疗组和SAP组, 差异均具有统计学意义(P＜0.05), 治疗组明显高于SAP组, 差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 三组大鼠3 h的IL-1、血清MDA、SOD水平、胰腺组织病理损和NF-κB阳性表达(±s)

表1 三组大鼠3 h的IL-1、血清MDA、SOD水平、胰腺组织病理损和NF-κB阳性表达(±s)

注：与正常组比较, aP＜0.05；与治疗组比较, bP＜0.05

超氧化物歧化酶(SOD)(nmU/L)NF-κB阳性率(%)丙二醛(MDA)(nmmol/L)胰腺病理评分(分)SAP组10 5537±824ab 42.67±5.88ab 42.12±10.13ab 15.32±4.57ab 8.44±0.65ab治疗组10 3724±102a 89.34±8.38a 17.24±5.40a 8.12±1.57a 6.22±0.52a正常组10310±26105.25±10.32 3.54±0.23 4.03±0.562.12±0.24

3 讨论

SAP是临床上常见的危重疾病, 病情发展快, 且易并发全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征, 病死率高。n-3脂肪酸是人体必需的脂肪酸, 其中以二十碳五烯酸( EPA) 和二十二碳六烯酸( DHA)尤为重要。EPA 和DHA 可被细胞色素P450 环氧化酶( CYP450) 代谢, 生成类二十烷酸和其他自体活性物质, 发挥生物学作用。

本实验可见n-3脂肪酸经尾静脉注入后, 具有早期炎症反应调节作用［2］, 能降低氧自由基反应, 减少血清MDA、AMY水平。NF-κB是一类能与多种细胞基因的启动、增强子位点结合以启动其转录的蛋白质, 现在发现许多炎性反应相关基因都有其位点, 包括作为iNOS合成路径上的关键控制点控制着 iNOS的表达, 通过影响NO合成而发挥炎性反应调控作用。从免疫组化可以明显看出, NF-κB在重症胰腺炎胰腺组织细胞核表达明显增强, 而治疗组明显减少(P＜0.05), NF-κB的［3］活化可很大程度地促进细胞因子的表达。n-3脂肪酸阻断NF-κB激活信号通路, 抑制NF-κB活性, 减少趋化因子和黏附分子产生, 抑制NO, 减少炎性细胞因子等, 对胰腺损伤有一定的治疗作用。

同时还具有保护细胞膜, 提高SOD水平, 能发挥其降低早期过度的炎症反应。降低白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)［4］、肿瘤坏死因子α(TNF-α), 降低血清MDA,抑制NF-κB激活［5］、减少脂质过氧化反应, 减少胰腺组织损伤。对上述过程的进一步认识 , 将有助于更全面的了解急性胰腺炎及其并发症的病理生理机制。为临床治疗该疾病提供了一条新思路。

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Research of n-3 fatty acid for early regulatory mechanism in severe acute pancreatitis

ZHANG Yong,

ZHANG Xiao-feng.Second Department of General Surgery, Affiliated Ningde City Hospital of Fujian Medical University, Ningde 352100, China

Objective To investigate n-3 fatty acid for early regulatory mechanism in severe acute pancreatitis (SAP).Methods A total of 30 SD rats were randomly divided into normal group (normal saline by tail intravenous injection after pancreas flipped for several time in laparotomy), treatment group (n-3 fatty acid by tail intravenous injection after molding) and SAP group (normal saline by tail intravenous injection after molding), with 10 cases in each group.Observations were made on serum methane dicarboxylic aldehyde (MDA), amylase (AMY), superoxide dismutase (SOD), pancreas nuclear factor κB(NF-κB), and pathological damage.Results SAP group had obviously higher serum MDA, AMY, pancreas NF-κB,and pathological damage than treatment group and normal group (P＜0.05).These indexes were also higher in treatmentgroup than in normal group (P＜0.05).Normal group had much higher SOD than treatment group and SAP group (P＜0.05).Treatment group had much higher SOD than SAP group (P＜0.05).Conclusion As a nutrition fat emulsion for immune regulation, n-3 fatty acid can regulate early inflammatory reaction, reduce occurrence oxygen radical, and decrease pancreatic tissue damage.It also contains certain protective effect for pancreatitis.

n-3 fatty acid; Pancreatitis; Nuclear factor κBB

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.33.210

352100 福建医科大学附属宁德市医院普外二科

2015-07-30］