405nm光线对小鼠皮脂腺及胶原纤维的影响研究

陈丽华，邢媛媛，彭琳琳，刘之力（大连市皮肤病医院激光科辽宁大连116021）

·基础研究·

405nm光线对小鼠皮脂腺及胶原纤维的影响研究

陈丽华，邢媛媛，彭琳琳，刘之力
（大连市皮肤病医院激光科辽宁大连116021）

目的：评价405nm光线对小鼠皮脂腺及胶原纤维的影响。方法：根据激光照射次数的不同，将80只昆明种小鼠分为照射2次组、4次组、6次组及8次组，每组各20只。观察每组不同照射次数后皮肤组织学变化。结果：经照射后，小鼠的皮脂腺数目较未照射对照侧减少，真皮胶原纤维及真皮厚度均较对照侧增厚，且随着照射次数的增多，结果更加显著。结论：405nm光线照射能够减少皮脂腺数目，并且具有真皮胶原重建作用。

405nm光线；皮脂腺；胶原纤维；小鼠；照射

近年来，不少学者将光疗法应用于嫩肤治疗，并对射频用于换肤和面部提紧的临床疗效及安全性进行了多中心的前瞻性评价研究。笔者在使用Aurora光波射频治疗机治疗面部痤疮的过程中发现，患者面部皮脂的分泌也相对减少，且面部皮肤状态年轻化，但对疗效的评价大部分是主观评价，对激光照射后组织学的研究比较少，因此笔者利用昆明小鼠作为动物实验模型，研究了Aurora光波射频治疗机所发射的405nm光线对小鼠皮脂腺、胶原纤维及真皮厚度的影响，归纳其中的规律，为皮脂腺疾病开拓一种安全有效的新型治疗方式。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1仪器设备：Aurora光波射频治疗机，由以色列ViemedicGmbH及武汉奇智科技股份有限公司提供；CollagenⅣ、Ⅶ型胶原染色及小鼠胶原纤维抗人单克隆抗体，购自美国lnvitrogen公司。

1.1.2实验动物：2个月龄雌性昆明小鼠80只，体重（20±2）g，8～10周龄。由大连医科大学动物实验中心提供。随机分为A、B、C、D四组，分别为照射2次组、4次组、6次组及8次组，每组各20只。

1.2方法

1.2.1光照治疗：将80只昆明小鼠用2.5%的利多卡因溶液行腹腔注射麻醉，麻醉后以脊柱为界。将背部左右两侧皮肤用硫化钡液进行脱毛，脱毛后以左侧为对照侧，不接受光照治疗；右侧为治疗侧，接受光照治疗。每次治疗面积为5个光斑，连续照射2次。每组小鼠按治疗次数进行治疗，每次间隔4d。每组小鼠相应治疗结束后，维持饲养15d，取材进行组织学观察。

1.2.2组织学观察：分别切取治疗侧和对照侧皮肤，面积均为3cm×2cm作为标本，并以l0%甲醛缓冲固定液固定，梯次浓度乙醇逐级脱水，石蜡包埋，切片。HE染色测定真皮胶原纤维的厚度；免疫组织化学染色检测昆明小鼠治疗侧和对照侧真皮中胶原蛋白的含量。

1.3统计学处理

数据采用不等距重复测量方差分析的分析方法对数据进行分析，分析软件为SPSS l7.0，对数据的统计描述采用检验水准a=0.05。

2　结果

2.1肉眼观察

经过Aurora光波射频治疗机照射的昆明小鼠皮肤未发生红斑及水疱，肉眼观察治疗侧和对照侧，外观无明显差异。

2.2组织学观察

2.2.1 HE染色：显示治疗侧组织每视野中皮脂腺数目比对照侧明显减少，形态变化未见明显改变（图1）；表皮变得平坦，真皮胶原纤维厚度增加；胶原纤维密集（图2）。

2.2.2免疫组织化学染色（SP染色）：显示治疗侧较对照侧真皮中胶原蛋白的厚度明显增加，分布也更加密集（图3）。

2.3对真皮厚度的影响：与未照射对照侧比较，激光照射后真皮厚度值D组＞B组＞C组＞A组。见表l。

表1　各组真皮厚度值描述（±s，μm）

表1　各组真皮厚度值描述（±s，μm）

注：*P＜0.01表示各组间比较差异有统计学意义

组别A组B组C组D组真皮厚度129.226±20.809*179.298±22.366*161.455±18.799*228.369±21.427*

图1　激光照射8次后治疗侧与对照侧皮脂腺数目与形态（HE染色切片，× 100）：显示治疗侧（1A）组织每视野中皮脂腺数目相比对照侧（1B）明显减少，形态变化未见明显改变

图2　激光照射8次后治疗侧（2A）与对照侧（2B）真皮胶原纤维（HE染色切片，× 100）：显示治疗侧真皮胶原纤维厚度增加，可见胶原纤维密集

图3　激光照射8次后治疗侧（3A）与对照侧（3B）胶原蛋白厚度（免疫组化染色）：显示治疗侧真皮中胶原蛋白厚度明显增加，分布更加密集

3　讨论

皮脂腺功能异常可导致痤疮、脂溢性皮炎等多种疾病。已知皮脂腺分泌增多，使毛囊、皮脂腺导管角化栓塞，皮脂瘀积于毛囊形成脂栓，同时毛囊内痤疮丙酸杆菌繁殖引起炎症反应是寻常痤疮的主要病因之一［1］。寻常痤疮是一种常见于青少年的皮肤病。全世界约有80%的人口在某个时期患有不同程度的痤疮。抗生素治疗痤疮炎症性损害已经有40多年的历史，近年来，痤疮丙酸杆菌耐药性问题日益明显，导致药物疗效降低［2］。痤疮不仅影响患者的生活质量，亦会引发不同程度的心理和社会问题，因此寻找安全有效的治疗方法是研究热点。

本实验选择昆明小鼠作为动物模型，是因为昆明小鼠的基因和皮肤结构与人类相似，非常适合进行激光嫩肤研究。目前该动物模型已经得到国内外同行的认可。

Hongcharut［3］等在使用宽光谱的光源（550～700nm），能量密度为150J/cm2对22例患者的背部的寻常型痤疮进行照射，结果发现，皮损处皮脂的分泌可被清除数周，此后呈分泌降低状态，并可持续至光照射20周左右，重复治疗4次能对皮脂分泌产生显著的抑制效应。章伟［4］等采用光动力疗法与强脉冲蓝光治疗中、重度痤疮发现，能够发射402～405nm的蓝光，不仅能够杀灭痤疮丙酸杆菌、抗炎的作用，还具有抑制皮脂分泌的作用。Aurora光波射频治疗机可以发射405nm波长的光线，通过本实验研究，表明治疗侧组织每视野中皮脂腺的数目比对照组明显减少，确定了光疗法对于皮脂腺的作用，同时在研究的过程中还发现本实验通过组织病理学对比研究，结果表明，Aurora光波射频治疗机对真皮纤维组织增生重构疗效确切。皮肤老化常表现为皱纹、皮肤弹性下降、色素损害、毛细血管扩张等［5］。显微镜下组织学改变主要表现为真皮胶原退行性变，排列紊乱［6］，胶原纤维、弹力纤维减少，真皮层变薄。因此非损伤性激光嫩肤疗效的评价多是通过组织学水平检测真皮胶原水平的变化来实现的。国内有学者应用1 550nm铒玻璃点阵激光不同能量密度和微孔密度组合照射昆明小鼠背部皮肤，观察照射前、后小鼠皮肤I型、III型胶原纤维和弹力纤维的变化情况，发现小鼠真皮厚度、成纤维细胞计数、胶原纤维和弹力纤维均增加［7］，以及点阵CO2激光进行动物实验，结果显示点阵CO2激光可有效促进I型胶原的合成，增加真皮厚度［8］，但均未同时对皮脂腺的影响进行相关实验研究。本实验结合对皮脂腺、真皮厚度、胶原纤维及胶原蛋白的观察，客观评价了405nm光线对昆明小鼠上述研究对象的作用，而且，随着照射次数的增加，皮脂腺数目的减少、真皮厚度以及胶原纤维的增加结果愈加显著，虽然昆明小鼠皮肤较薄，与人类皮肤组织存在一定差异，但本结论对于皮脂腺分泌所引起的疾病以及真皮胶原重建的作用仍具有一定参考价值，为该谱段光线在临床治疗中的疗效提供了科学依据。它的无创性、有效性及操作简单，显示出良好的应用前景。但其长期效果以及治疗参数的选择上还有待进一步的研究。

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［5］李蕊联，应朝霞，王梅，等.点阵CO2激光和Nd:YAG激光对自然老化小鼠真皮重塑的比较研究［J］.中国美容医学，2012，21（10）:1782.

［6］尚英彬，王展，陈芳园，等.Q开关和长脉宽1 064nm Nd: YAG激光真皮胶原重建疗效的比较性研究［J］.中国美容医学，2014，23（2）:123.

［7］张淑兰，应朝霞，王永贤，等.铒玻璃点阵激光嫩肤参数优化的动物实验［J］.中国美容医学，2012，21（8）:1317-1318.

［8］葛红梅，蒋霞，刘盛秀，等.点阵CO2激光嫩肤的动物实验研究［J］.安徽医科大学学报，2010，45（5）:633.

编辑/张惠娟

Efects of 405nm laser irradiation on the sebaceous gland and the collagenic fibers in mice

CHEN li-hua，XING yuan-yuan，PENG Lin-lin，LIU Zhi-li
（Department of Laser，Dalian Dermatosis Hospital，Dalian116021，Liaoning，China）

Objective To determine the effects of 405nm laser with diferent time on the changes of the sebaceous gland and the collagenic fibers in mice.Methods Eighty mice were divided into four groups:the two times，four times，six times and eight times.Hematoxylin and immunohistochemical staining SP were performed to determ ine the changes of skin histology after laser irradiation.Results The number of sebaceous gland was decreased，the collagenic fibers and the dermis were thicker than before irradiation.And with the increase of the times of irradiation，the rusults were more significant.Conclusion 405nm laser irradiation can decrease the number of sebaceous gland and rebuild the collagenic fibers of dermis.

405nm laser；sebaceous gland；collagen fibers；mice；irradiation

Q813.1

A

1008-6455（2015）20-0037-03

2015-06-25

2015-09-27