VEGF在胃癌中表达及其对胃癌术后复发的预测价值

王　锐　宋征宇　于永强　李　多

VEGF在胃癌中表达及其对胃癌术后复发的预测价值

王锐宋征宇于永强李多

目的探讨VEGF在胃黏膜非癌组织和胃癌中的表达变化、意义及VEGF与胃癌复发的关系。方法用免疫组织化学法检测VEGF在40例慢性胃炎组，60例肠化生组，60例非典型增生及60例胃癌中表达的变化情况和对患者临床情况随访，并对其结果比较分析。结果在慢性胃炎，肠化生，非典型增生中VEGF表达的阳性率低于胃癌组，差异有统计学意义（P＜0.05）。VEGF的阳性表达与胃癌患者的性别，年龄，分化程度无关（P＞0.05）；与癌的浸润深度及是否有淋巴结转移有关（P＜0.05）。对胃癌根治术患者随访发现术后复发组和未复发组比较VEGF表达情况，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论VEGF表达随着病变发展呈上升趋势，与胃癌的转移和浸润深度有一定的相关性，尚不能作为预测复发的有效指标。

血管内皮生长因子；胃癌；免疫组化；预后

胃癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，占恶性肿瘤发生率8%，占癌症病死率的10%，在发展中国家更为常见。目前世界范围内可切除胃癌五年生存率大约在20%～30%［1］，胃癌发生发展具体机制仍不清楚。普遍认为胃肠化生，非典型增生与胃癌关系较为密切。VEGF可高效特异性地作用于血管内皮细胞，是目前公认的具有促血管生成作用最强的因子之一，同时促进血管内物质渗出，为血管内皮细胞迁移和肿瘤细胞转移提供基质。本研究旨在应用免疫组化测定VEGF在非癌组织和胃癌组织表达变化，探讨其与胃癌发生、发展和肿瘤转移及复发的关系。

对象与方法

一、一般资料

选取河北北方学院附属第一医院门诊胃镜室2012年12月至2013年12月行胃镜检查患者220例，男性118例、女性102例，年龄35～82岁（平均年龄62.7岁）。其中慢性炎症组40例，肠化生组60例，非典型增生组60例，胃癌组60例。其中胃癌患者均为首次发现，经病理证实，排除类癌，胃内淋巴瘤及第二原发肿瘤，并且手术前未经过放疗和化疗或免疫治疗，对患者手术及术后情况随访。

二、方法

应用免疫组化进行检测，所采用试剂鼠抗人VEGF单克隆抗体购于北京中杉金桥生物有限公司，二抗染色试剂盒，枸橼酸抗原修复液、DAB显色液及PBS等均购自博士德生物公司。经常规脱蜡、微波修复、过氧化氢（H2O2）封闭后滴加一抗，VEGF（1：100），4℃过夜，滴加二抗试剂37℃孵育15 min，最后DAB显色，苏木素复染、脱水、透明、封片。

三、结果判断

VEGF主要位于细胞浆，免疫组化阳性反应为黄一棕褐色颗粒。阳性细胞数计算方法为：每张切片由有经验的病理医师随机观察5个高倍视野，每个视野计100个细胞中的阳性细胞数，取均值，以百分数表示细胞阳性指数。染色强度：无染色为0分；浅黄色为1分；黄色为2分；棕黄或棕褐色为3分。阳性细胞百分率：无阳性细胞为0分；阳性细胞数＜25%为1分；阳性细胞数25%至＜50%为2分；阳性细胞数50%至＜75%为3分；阳性细胞数≥75%为4分。2项之和：0分为（-）；1～2分为（＋），3～4分为（＋＋），5～7分为（＋＋＋），均为阳性。

四、复发判断

经胃癌根治术的患者随访，经腹部CT、核磁、彩超发现肿瘤表现或胃镜病理发现癌细胞，定为复发，排除类癌，胃内淋巴瘤及第二原发肿瘤。

五、统计学处理

分析所有数据应用SPSS 19.0统计软件处理，计数资料以%表示，采用χ2检验和Fisher′s检验。以α=0.05为显著性检验水准，即P＜0.05有统计学差异。

表1　VEGF在胃黏膜不同病理状态的表达变化

结果

一、VEGF在非癌组织及胃癌中的表达变化（表1、图1）

在慢性胃炎、肠化生、非典型增生、胃癌组中VEGF表达随着病变发展呈上升趋势，其阳性率分别为7.5%、65%、73.3%和88.3%。其中非典型增生，肠化生，慢性胃炎中VEGF的阳性表达分别与胃癌作比较，其差异有统计学意义（P＜0.05）。另外非典型增生与肠化生比较，结果两组差异无统计学意义（χ2=0.977，P=0.429）。

二、VEGF在癌胃癌中的表达变化（表2）

VEGF的表达与胃癌患者的年龄、性别和分化程度因素无关（P＞0.05），无统计学意义；与癌的浸润深度和是否有淋巴结转移有关（P＜0.05），具有统计学意义。

图1　免疫组化结果病理所见（×400）

表2　VEGF在胃癌中的表达变化（n）

三、胃癌根治术后复发与未复发患者VEGF表达情况（表3）

对行胃癌根治术的19例患者电话随访，其中1例失访，随访时间为2年，发现有5例复发，12例未复发。对二组患者VEGF表达情况比较分析差异无统计学意义（P＞0.05），提示尚不能作为预测复发的有效指标。

表3　胃癌根治术后复发与未复发VEGF表达比较［n（%）］

讨论

由正常黏膜到胃癌经历了多步骤的演变过程，目前普遍认为肠化生和非典型增生是进展为胃癌的重要发展阶段，因而日益受到重视。胃癌发病机制涉及多因素参与，疾病的预后与淋巴结转移、浸润等生物学行为密切相关。这一演变的分子机制尚不完全清楚。血管内皮生长因子（VEGF），为单一基因编码的同源二聚体糖蛋白，能够直接刺激血管内皮细胞迁移、增殖及分裂，增加微血管的通透性。从而介导新生血管形成并诱导蛋白溶解酶的生成降解细胞外基质。它是针对内皮细胞特异性最高，促血管生长作用最强的有丝分裂原。是肿瘤分子生物学研究的热点。

发现特异性指标来诊断疾病、判断疾病预后是临床研究的热点。VEGF在多种肿瘤及癌前病变表达增加，在胃癌及癌前病变中亦是如此。VEGF可使血管内皮细胞大量增殖并出现新生血管，可促进高度不稳定性、不成熟性及内皮细胞高度增殖的肿瘤血管持续生成，从而促使微小的肿瘤发展为肉眼能见的实体肿瘤［2］。研究人员认为VEGF-和VEGFR-2介导的信号转导通路和血管生成促使了胃癌的发生，证实VEGFR-2信号转导通路可以作为胃癌治疗的靶点。Ramucirumab即作为一种作用于VEGFR-2人免疫球蛋白G1单克隆抗体，为胃癌的生物学治疗提供了一个新方向［3］。我们在研究中发现：慢性胃炎中VEGF阳性细胞仅少量表达，但是随着细胞病变程度的增加，VEGF表达有上升趋势。这与李慧臻的研究一致［4］。肠化生和非典型增生有VEGF阳性细胞表达明显增多，表明胃黏膜癌前病变阶段已出现VEGF基因的表达的改变。我们进一步比较肠化生与非典型增生VEGF阳性细胞表达情况，非典型增生VEGF细胞阳性率略高于肠化生，发现趋势增加不明显（P＞0.05），提示VEGF激活分化可能在癌变过程的早期。这也映证了临床上在非典型增生后期病变逆转的机会很小。VEGF表达是胃癌患者的临床病理进展及判断胃癌患者预后的有效指标。一项Mata分析提示VEGF阳性表达提示胃癌预后不良［5］。胃癌的血管生成与S-VEGF浓度密切相关，其血清中VEGF水平可作为胃癌评价疗效、转移及预后的重要指标［6］。VEGF与胃癌的组织分化，肿瘤浸润深度，TNM分期，淋巴结转移有关［7］。我们在实验中发现：VEGF的表达与年龄、性别，分化程度无关，与胃癌的浸润深度及是否有淋巴结转移有关。这与既往研究相一致，但是，VEGF与胃癌的临床理化因素的关系报道结果尚不完全统一，需要更深入的研究。

及时准确的发现肿瘤复发转移是改善癌症患者生存预后的关键。而肿瘤标志物的检测是简便易行的方法，是可靠临床和影像重要的辅助及补充。发现特异性标记物指标来诊断疾病、判断疾病预后也是临床研究的热点。VEGF和胃癌关系研究较为透彻，VEGF表达是胃癌患者的总体生存率独立的预后参数，VEGF高表达常提示患者预后不佳［8］。国内韩雅琳等［9］通过对胃癌患者化疗前后及复发与未复发患者比较分析发现血清VEGF-A的表达水平与肿瘤复发转移并无确切的关系。但是VEGF能否作为预测胃癌手术后复发的指标，目前尚无报道。我们对17例胃癌根治术患者进行2年的随访，其中有5例复发，12例未复发。对两组患者就诊时VEGF表达进行比较分析，结果提示复发组和未复发组VEGF表达差异并无统计学意义。这说明VEGF尚不能作为预测胃癌根治术后复发与否的指标。当然本次统计样本量较小，随访时间不够长均可能影响结果。

胃癌是常见的消化系统肿瘤，手术为主，放化疗及生物治疗为辅为目前胃癌的主要治疗方法，同时，胃癌是恶性程度较高的肿瘤之一，中晚期胃癌即使给予积极治疗，预后较差。VEGF和胃癌发生的关系较为密切。深入研究VEGF在不同胃黏膜病变组织中的表达行为有助于在癌症及癌前病变的干预及寻找在多靶点联合治疗方面提供帮助。我们的研究提示，VEGF和胃癌的发生发展有密切关系，它VEGF不能单独预判胃癌复发，但是假如能够联合其他分子标记物，也许能够给我们提供更多关于胃癌复发的信息。相信随着科学的进展，发现的胃癌相关标志物和基因越来越多，不够解决准确预测胃癌的复发，而且对肿瘤的诊断及预后有帮助，还对治疗方案的选择提供了更全面的依据。

1 Quéro L，Guillerm S，Hennequin C.Neoadjuvant or adjuvant therapy for gastric cancer.World J Gastrointest Oncol，2015，7（8）：102-110.

2 Jho D，Mehta D，Ahmmed G，et al.Angiopoietin-1 opposes VEGF-induced increase in endothelial permeability by inhibiting TRPC1-dependent Ca2influx.Circ Res，2005，96（12）：1282-1290.

3 Abdel-Rahman O.Targeting vascular endothelial growth factor（VEGF）pathway in gastric cancer：Preclinical and clinical aspects. Crit Rev Oncol Hematol，2014，6（10）：S1040-8428.

4 李慧臻，刘琳.VEGF与胃癌前病变程度相关性的研究.内蒙中医药，2014，33（4）：102-103.

5 Liu L，Ma XL，Xiao ZL，et a1.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in resected gastric cancer.Asian Pac J Cancer Prev，2012，13（7）：3089-3097.

6 乌日罕，冯占军，孙秀威，等.VEGF和MVD可作为判断胃癌患者预后和上消化道出血风险的指标.胃肠病学，2013，18（4）：100-103.

7 Zhao DQ，Chen J，Wu YF，et a1.Correlation between Vascular Endothelial Growth Factor and Somatostatin Receptor with Progression and Prognosis in Gastric Cancer.Hepatogastroenterology，2014，61（132）：1154-1158.

8 Chen J，Tang D，Wang S，et a1.High expressions of galectin-1 and VEGF are associated with poor prognosis in gastric cancer patients. Tumour Biol，2014，35（3）：2513-2519.

9 韩雅琳，肖小意，吴倩，等.血清HIF-1α、VEGF-A、CEA和CA19-9表达水平对胃癌根治术后患者复发转移的预测研究.中国药物应用与检测，2014，11（3）：156-160.

（本文编辑：李爱民）

10.3969/j.issn.1672-2159.2015.06.020

075000河北北方学院附属第一医院

王锐，E-mail：wangrui_fddi@163.com

2015-10-10）