正交试验优选归藤通管灌肠剂水提取工艺

王红丽，唐进法，卫爱武，翟海容，程伟，康冰亚*

(1.河南中医学院第一附属医院，河南 郑州 450000；2.河南中医学院，河南 郑州 450046)

·中药工业·

正交试验优选归藤通管灌肠剂水提取工艺

王红丽1，唐进法1，卫爱武1，翟海容2，程伟2，康冰亚1*

(1.河南中医学院第一附属医院，河南 郑州 450000；2.河南中医学院，河南 郑州 450046)

目的：优选归藤通管灌肠剂水提取工艺。方法：以绿原酸为指标，采用HPLC测定其含量，选取加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，采用正交试验法优选归藤通管灌肠剂水煎煮工艺。结果：最佳提取工艺为加6倍量水，煎煮2次，每次1.5 h。结论：优选的水提取工艺稳定、合理，可为归藤通管灌肠剂的制剂生产提供参考。

归藤通管灌肠剂；绿原酸；正交试验；高效液相色谱法

归藤通管灌肠剂为河南中医学院第一附属医院开发的院内新制剂，是由该院生殖医学科卫爱武主任医师结合临床医疗实践总结出来的经验方，主要由忍冬藤、当归、鸡血藤、大血藤等多味中药组成，具有活血祛瘀通络，清热解毒消痈的功能，是治疗瘀血、湿热所致输卵管不通畅、阻塞或积水等引起的不孕症的良药。本文在进行制备工艺研究时，根据饮片理化性质，采用水提取法以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，以忍冬藤中的绿原酸为考察指标，采用正交试验法优选最佳提取工艺，为归藤通管灌肠剂的研究提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CP225D赛多利斯电子分析天平(德国)；Waters 2695高效液相色谱仪；Waters 2996二极管阵列检测器；Empower操作系统；GL型暗箱式双光紫外仪；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)。

1.2 试药

绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110753-200413)；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯；忍冬藤、当归、鸡血藤、大血藤等饮片均购于安徽济仁药业有限公司，经河南中医学院第一附属医院药学部陈天朝主任药师鉴定，均符合2010年版《中华人民共和国药典》相关项下要求。

2 方法与结果

2.1 绿原酸的含量测定

2.1.1 色谱条件 采用Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相为乙腈(A)-0.4%磷酸溶液(B)(10∶90)；检测波长为327 nm；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；进样量为10 μL[1-4]。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，加50%甲醇制成质量浓度为0.052 5 g·L-1的对照品溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品溶液5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释定容，静置过夜，取上清液滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品溶液3、6、9、12、15、18、21 μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得绿原酸回归方程Y=15 396X+2143(r=1)，绿原酸在1.575～11.025 μg呈良好线性关系。

2.1.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，按2.1.1色谱条件连续进样5次，依法进行含量测定，结果绿原酸的RSD为0.52%，表明仪器的精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 同一供试品溶液，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h，依法进行含量测定，结果绿原酸的RSD为1.72%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.1.7 加样回收率试验 精密吸取已知含量的供试品溶液6份，分别精密加入一定量的绿原酸对照品，依法进行含量测定，计算回收率。结果绿原酸的平均回收率为100.96%，RSD为1.05%，表明此方法可行。

2.2 提取工艺考察

2.2.1 正交试验优选 以绿原酸为考察指标，选择加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，选用L9(34)正交试验优选水提取工艺，因素水平见表1。分别按处方配比称取忍冬藤、当归、鸡血藤等饮片共9份，每份98 g，按正交表安排进行提取备用。试验安排及结果见表2，方差分析见表3。

表1 水提取工艺优选正交试验因素水平表

表2 水提取工艺优选正交试验安排

表3 水提取工艺方差分析

注：F0.1(2，2)=9；F0.05(2，2)=19。

由表2可知，各因素对提取工艺的影响顺序为：C>B>A，以A1B2C3组合方案为佳。方差分析结果表明，显著水平为0.1时，因素C具有显著影响，因素A，B均无显著性差异。综合考虑到节省能源及提取完全等因素，最终确定提取工艺条件为A1B2C2，即加6倍量水提取2次，每次1.5 h。

2.2.2 验证试验 按比例称取药材各3份，每份98 g，按优选的工艺条件验证试验。结果绿原酸提取量分别为97.65、97.52、97.76 g·L-1，表明该提取工艺合理、稳定、可行。

3 讨论与结论

本方中忍冬藤、当归、鸡血藤、大血藤等药材饮片在临床上常以汤剂入药，所含成分经预试验考察，采用水煎煮法可将其基本提取完全，从而保证制剂的疗效。忍冬藤为君药，现代化学、药理研究表明[5-7]，忍冬藤中的主要活性成分为有机酸类，绿原酸在忍冬藤中含量较高，具有一定的抗菌、抗感染作用，是忍冬藤主要活性成分及药理作用的重要物质基础，发挥着清热解毒的药效。因此本试验选择绿原酸为指标，通过测定其含量来评价归藤通管灌肠剂的内在质量。

流动相选择上考察了甲醇和乙腈两种流动相，乙腈紫外吸收小，产生的噪声小，适合在进行紫外短波长上的高灵敏度分析。乙腈作为流动相压力较小，对色谱柱的损害小，洗脱能力强且比甲醇出峰早，因此选择了乙腈作为本试验的流动相。

临床上，归藤通管长期以汤剂给药，疗效确切，未发生毒副作用。但汤剂煎煮、携带、服用不方便，久置易霉变，故将其研制成灌肠剂，既保持了汤剂的综合疗效，又解决了其不便之处。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，20l0：179.

[2] 陈军，马双.HPLC法测定忍冬藤中当药苷和马钱苷的含量[J].药物分析杂志，2005，25(12)：1451-1452.

[3] 苟占平，万德光.HPLC法测定6种忍冬藤中绿原酸的含量[J].中成药，2006，28(3)：55-57.

[4] 钱正明，李会军，李萍，等.高效液相色谱法测定忍冬藤和叶中8种活性成分[J].分析化学，2007，35(8)：1159-1163.

[5] 鲁思爱.忍冬藤的化学成分及其药理应用研究进展[J].临沂大学学报，2012，34(3)：132-134.

[6] 张聪，殷志琦，叶文才，等.忍冬藤的化学成分研究[J].中国中药杂志，2009，14(23)：3051-3053.

[7] 齐乐辉，杨联荣，尹蕊，等.忍冬藤成份分析及在抗菌消炎等方面的研究进展[J].黑龙江科技信息，2010(3):207.

Optimization of Water Extraction for Guiteng Tongguan Enema by Orthogonal Test

WANG Hongli1，TANG Jinfa1，WEI Aiwu1，ZHAI Hairong2，CHENG Wei2，KANG Bingya1*

(1.Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Henan University of Traditional Chinese Medicine(TCM)，Zhengzhou450000，China；2.Henan University of TCM，Zhengzhou 450046，China)

Objective：To optimize boiling water extraction of Guiteng Tongguan Enema.Methods：With the content of chlorogenic acid as index，orthogonal test was used to optimized boilingwater extractionof Guiteng Tongguan Enema with the amount of water，extraction time and times as factors.Results：Optimal extraction was as follows：sixfold amount of water，extract 2 times with 1.5 hours per time.Conclusion：Optimized extraction method is reasonable and feasible，it could be applied in mass production of Guiteng Tongguan Enema.

Guiteng Tongguan Enema；chlorogenic acid；orthogonal test；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.2.018

2014-06-10)

*

康冰亚，主管中药师，研究方向：中药制剂的研究与开发；E-mail：kangby2008@163.com