奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定

郭日东　吴晓亮　宋丽华　韩吉雨　魏小军　李平安　关平原　兰儒冰

1.内蒙古伊利实业集团股份有限公司奶牛科学研究院，呼和浩特010080；2.内蒙古农业大学，呼和浩特010018

奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定

郭日东1吴晓亮1宋丽华1韩吉雨1魏小军1李平安2关平原2兰儒冰1

1.内蒙古伊利实业集团股份有限公司奶牛科学研究院，呼和浩特010080；2.内蒙古农业大学，呼和浩特010018

在1年的时间里，对北方的1个规模化牧场乳房炎病牛连续采集45个样品，进行分离鉴定，分离到葡萄球菌、大肠杆菌、克雷伯菌和无乳链球菌4种乳房炎病原菌，在发病时间分布上有明显的特点，6-10月期间，大肠杆菌为乳房炎的主要病原菌，12月至次年4月期间，无乳链球菌为乳房炎的主要病原菌。

奶牛乳房炎；病原菌；分离鉴定；发病特点

奶牛乳房炎是奶牛乳腺受到物理、化学或微生物等因素刺激所引发的一种炎症反应，其中病原微生物是引起奶牛乳房炎的主要原因。乳房炎可以使患牛奶产量和质量降低，严重的患牛被淘汰或者直接导致其死亡，给奶牛业造成巨大经济损失。该病是世界范围内多发的奶牛疾病，其发生范围广，发病率高。全球约有奶牛2.2亿头，其中约有1/3患有不同类型的乳房炎。据报道，我国隐性奶牛乳房炎平均发病率为74.5%，临床奶牛乳房炎的平均发病率为33.41%[1]。

1　材料与方法

1.1病原菌的采样

选取临床型乳房炎的奶牛采集乳样，先用温水清洗采样乳头，再用0.1%新洁尔灭溶液和75%乙醇分别进行消毒，在每次清洗或消毒乳头后均用消毒纸巾擦干；弃去采样乳区的头3把奶，然后采集乳样约10mL于灭菌瓶中，加盖封紧，并作好标记，置于附有冰袋的保温箱内带回实验室进行分离培养及相关检测。

1.2病原菌分离方法

1）将无菌采集的乳样充分摇匀，分别划线接种于普通营养琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，作好标记，置37℃温箱中培养24h后观察菌落特征，挑取典型菌落进行涂片，革兰氏染色，于显微镜下观察，根据菌体形态、溶血情况及染色特性初步判定细菌类别，并将其进一步纯化培养[2]。

2）球菌的鉴定。镜检形态符合葡萄球菌特性，在普通营养琼脂和血液琼脂平板形成圆形、金黄色、灰白色或柠檬色菌落，且接触酶试验、凝固酶试验和甘露醇发酵试验阳性的细菌，即鉴定为金黄色葡萄球菌。镜检形态符合链球菌特性，且接触酶试验阴性细菌，即鉴定为链球菌属细菌。若细菌CAMP试验阳性，不水解七叶苷和马尿酸钠，即鉴定为无乳链球菌[3]。

3）杆菌的鉴定。革兰氏阴性杆菌氧化酶试验阴性，在麦康凯琼脂平板形成红色菌落，在伊红美蓝琼脂平板形成紫黑色带金属光泽菌落，在三糖铁琼脂平板培养产酸或产气，不分解尿素，V-P试验阴性的细菌即鉴定为大肠杆菌[3]。

2　结果与分析

1）分离到葡萄球菌5株，占11.11%，大肠杆菌13株，占28.89%，克雷伯菌3株，占6.67%，无乳链球菌24株，占53.33%，与邓海平等[3]、王凤等[4]、李娟娟等[5]、范成英等[6]报告的乳房炎病原菌种类基本一致。

2）分离鉴定的4种病原菌引起乳房炎发病，在时间分布上有明显特点，在6-10月期间，大肠杆菌为乳房炎的主要病原菌，12月至次年4月期间，无乳链球菌为乳房炎的主要病原菌。分离病原菌明细如表1。

表1　样品分离鉴定结果

3　讨论

1）大肠杆菌、克雷伯菌是环境性乳房炎的主要致病因素。北方6-10月期间温暖湿润，牧场奶牛生活环境中存活大量的大肠杆菌和克雷伯菌，是奶牛乳房炎的主要致病菌，也是主要预防和治疗的病原菌种类。

2）葡萄球菌、无乳链球菌是传染性乳房炎的主要致病因素。北方12月至次年4月期间干燥寒冷，牧场奶牛生活环境中大肠杆菌和克雷伯菌大量减少，致病机会减少，乳房寄生菌是主要致病菌，也是主要预防和治疗的病原菌种类。

3）药敏试验报告指出[4-7]，这4种细菌对氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、头孢类和磺胺甲恶唑/甲氧苄啶敏感，是有效治疗乳房炎的首选药物。

4）在夏秋季节，加强牛体卫生的综合管理，加强奶牛生活环境的综合治理和有效消毒，是预防环境性乳房炎的有效方法。在冬春季节，加强传染性乳房炎病牛的隔离治疗，加强奶衬的清洗消毒，认真执行挤奶操作程序和乳头药浴，是预防传染性乳房炎的最佳方法。

5）本次试验没有分离到金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌导致的乳房炎，传染性很强，易产生耐药性，易复发，一定要彻底隔离治疗。若条件有限，建议淘汰、放弃治疗，坚持这项措施，可以预防金黄色葡萄球菌型乳房炎。

6）在预防奶牛乳房炎的措施中，保护好乳头孔很重要，若乳头孔损坏，不能完全闭合，病原菌很容易侵入乳房导致乳房炎发生；定期进行乳头评分，定期更换奶衬，及时修复挤奶机的负压和脉动频率，不要过度挤奶，可以有效保护乳头孔。

7）应用优质奶牛干奶药可以有效预防乳房炎的发生。

8）加强奶牛饲养管理，完善乳房炎管理措施，培育抗病力强的奶牛品种，均衡奶牛营养，提高奶牛疾病抵抗力，可以有效减少乳房炎的发生。

[1]郭锐，苑宇.湖北两个奶牛场奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药物敏感性分析[A].第五届全国牛病防制及产业发展大会论文集[C].2013，150-152.

[2]东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京：北京科学出版社，2001：132-134.

[3]魏小娟，蒲万霞，周绪正，等.兰州地区奶牛乳房炎病原茵的分离鉴定及药敏试验[J].动物医学进展，2007，28（8）：113-114.

[4]邓海平，俞诗源.内蒙古地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验研究[J].安徽农业科学，2009，37（2）：595-596，598.

[5]王凤，宋立，汤德元，等.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定、血清型及耐药性研究[J].动物医学进展，2013，34（6）：62-67.

[6]李娟娟，魏恒，王韦华.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国草食动物科学，2013，33（3）：53-54.

[7]范成英，潘鑫龙.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J].安徽农学通报，2013，19（18）：119-120.

[8]李娟娟，魏恒，王韦华.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国草食动物科学，2013，33（3）：53-54.

2015-05-28

科技部十二五项目“现代奶业发展科技工程”牧区及农牧交错带奶牛健康养殖技术集成及产业化示范（2012BAD12B09）郭日东，男，1963年生，高级兽医师。