江西省不同产地粉防己主要药效成分含量分析

赖晓莲，郭圣茂，彭仁，陈兰兰，廖兴国

(1.江西农业大学园林与艺术学院，江西 南昌 330045；2.江西师范大学生命科学学院，江西 南昌 330027)

江西省不同产地粉防己主要药效成分含量分析

赖晓莲1，郭圣茂1，彭仁2，陈兰兰1，廖兴国1

(1.江西农业大学园林与艺术学院，江西 南昌 330045；2.江西师范大学生命科学学院，江西 南昌 330027)

采用高效液相色谱法测定江西省15个产地粉防己药材中粉防己碱、防己诺林碱2种主要药效成分的含量。结果表明：该测定方法精密度、重现性良好，供试样品在48 h内稳定，适用于粉防己药材中粉防己碱、防己诺林碱的测定；不同产地粉防己药材中2种有效成分的含量存在较大差异，粉防己碱含量的变化范围为2.28%～6.94%，防己诺林碱含量变化范围为1.34%～3.15%，以永丰、乐平、宜黄、高安4个产地药材中2种有效成分的含量较高。

粉防己；粉防己碱；防己诺林碱；高效液相色谱法

粉防己(StephaniatetrandraS.Moore)又名石蟾蜍、汉防己、白木香。为防己科千金藤属多年生落叶藤本植物，生于山坡、丘陵地带的草丛及灌木林缘。粉防己是常用重要中药，以根入药，其味苦，性寒，有利水消肿、祛风止痛之功效，主治水肿鼓胀、手足挛痛、湿热脚气、癣疥疮肿、高血压等症[1]。粉防己碱(tetrandrine)和防己诺林碱(fangchinoline)为粉防己主要药效成分，它们的含量是粉防己相关药品质量控制的主要检测指标[2]。近期研究表明，粉防己碱在抗癌方面也有突出表现[3-5]。

粉防己属野生品种，分布于江西、安徽、浙江、湖北、湖南、福建、广东、广西等地。由于连年掠夺性采挖，各产地野生资源已严重萎缩，目前主要由江西、安徽供粉防已药材，其它产地供应量已逐渐消失或产出量甚微[6]。为保护粉防己野生资源和维持粉防己药材的正常供应，有必要开展粉防己人工驯化和种植的研究。本文通过分析江西不同产地粉防己药材中粉防己碱和防己诺林碱的含量，来探讨产地因素对于粉防己药材品质的影响，为其良种选育及开发利用提供参考。

1 仪器、试剂与样品

1.1 仪器与试剂

仪器：岛津LC-2010CHT型高效液相色谱仪，包括自动进样器、UV-VIS检测器、柱温箱和色谱工作站。试剂：十二烷基磺酸钠( 国产分析纯)，乙腈( 国产色谱纯)，甲醇( 国产色谱纯)，对照品粉防己碱和防己诺林碱购自中国药品与生物制品检定所。

1.2 样品采集与处理

2013年8—10月于江西信丰、南康、会昌、宁都、遂川、吉安、永丰、宜春、高安、宜黄、临川、乐平、浮梁、武宁、修水等15个县市采挖粉防己根，洗净，除去粗皮，晒至半干，切段，干燥。粉碎过40目筛备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil ODS-1(4.6 mm×200 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水-甲醇-冰醋酸( 40∶30∶30∶1) ( 每100 mL含0.41 g十二烷基磺酸钠)；流速1.0 mL·min-1；柱温25 ℃；紫外检测波长280 nm；采用外标峰面积法计算含量[2，7-8]。

2.2 样品液制备

图1 粉防己碱、防己诺林碱对照品色谱图

精确称取过40目筛的粉防己药材粉末5 g，以250 mL 90%乙醇回流提取2次，2 h·次-1，合并所得提取液，浓缩至浸膏，加流动相溶解，定容至25 mL，摇匀。精确吸取5 mL溶液，稀释定容至50 mL，用微孔滤膜过滤，得待测样品溶液。

图2 粉防己样品色谱图

2.3 对照品溶液制备和线性关系考察

精确称取对照品防己诺林碱5.95 mg、粉防己碱11.85 mg，按饶毅等[2]建立的分析方法，制备对照品溶液，并进行含量测定，色谱图见图1。以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，建立线性回归方程。粉防己碱标准曲线为：Y=650.48X+168.72，r=0.9995(n=5)，在0.474～4.740 μg范围内线性关系良好；防己诺林碱标准曲线为：Y=536.77X-227.06，r=0.9991(n=5)，在0.238～2.380 μg范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验

分别精确吸取粉防己碱、防己诺林碱对照溶液10 μL，连续5次测定粉防己碱、防己诺林碱含量，计算得RSD分别为1.07%、1.25%，表明试验精密度良好。

2.5 重现性试验

精密称取同一产地粉碎后混合均匀的粉防己样品5份，按样品液制备方法制得供试液，连续测定粉防己碱、防己诺林碱的含量，色谱图见图2。计算得RSD分别为1.73%、1.46%，表明方法重视性良好。

2.6 稳定性试验

取某一产地粉碎后混合均匀的粉防己样品，按样品液制备方法制得供试液，室温放置，分别于0、2、4、8、12、24、48 h 后测定粉防己碱、防己诺林碱的含量，结果见表1。由表1可知，RSD分别为1.684%、2.027%，表明供试品溶液在48 h内稳定。

表1 样品液放置不同时间后有效成分含量 %

2.7 样品含量测定

精确称取不同产地粉防己样品5 g，按照样品液制备方法进行提取和处理，测定粉防己碱、防己诺林碱的含量，3次重复，以平均值作为结果。重复测定结果的相对标准偏差应小于5%，否则须重新测定。测定结果见表2。

由表2可知，15个产地药材粉防己碱含量的变化范围为2.28%～6.94%，防己诺林碱含量变化范围为1.34%～3.15%。以永丰、乐平、宜黄、高安4个产地药材中2种有效成分的含量较高。

3 结论与讨论

药用植物产品的功效是由所含有效成分作用的结果。有效成分含量、各种成分的比例等，是衡量药用植物产品质量的主要指标。本文采用高效液相色谱法测定江西省由南到北15个县市粉防己药材中粉防己碱、防己诺林碱2种主要药效成分的含量。试验结果表明，粉防己碱标准曲线为：Y=650.48X+168.72，r=0.9995(n=5)，在0.474～4.740 μg范围内线性关系良好；防己诺林碱标准曲线为：Y=536.77X-227.06，r=0.9991(n=5)，在0.238～2.380 μg范围内线性关系良好。且该测定方法精密度、重现性良好，供试样品在48 h内稳定，适用于粉防己药材中粉防己碱、防己诺林碱的测定。15个产地药材粉防己碱含量的变化范围为2.28%～6.94%，防己诺林碱含量变化范围为1.34%～3.15%。以永丰、乐平、宜黄、高安4个产地药材中2种有效成分的含量较高。

表2 不同产地样品中粉防己碱、防己诺林碱的含量

黄丽萍等[8]对湖北、安徽等8个产地的粉防己药材分析结果显示：粉防己碱含量的变化范围为4.11%～7.01%，防己诺林碱含量变化范围为1.87%～3.45%。也表明，不同产地粉防己药材中药效成分的含量存在较大差异。药材的药效成分种类、比例、含量受药用植物遗传物质、生长年限和环境条件的影响，即在特定的气候、土质、生态等外部环境条件影响下的内部代谢(含次生代谢)产物。例如，有研究者发现，两面针有效成分含量与土壤有效磷含量成正相关[9]。不同产地粉防己药材中药效成分含量差异是环境因素还是遗传因素造成，或者是两者偶合的结果，有待于后续的深入研究加以揭示。

[1]中国药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].2005版.北京：化学工业出版社，2005：101.

[2]饶毅，黎莉，刘隆洪，等.HPLC法同时测定防己药材中防己诺林碱和粉防己碱[J].中草药，2006，37(4)：612-613.

[3]王丽敏，吕宏彦，李庆勇，等.粉防己碱的抗肿瘤药理研究新进展[J].时珍国医国药，2008，19(10)：2558-2559.

[4]慕建宁，马小红，李玢，等.粉防己碱对宫颈癌细胞周期影响及其机制研究[J].现代肿瘤医学，2011(11)：2191-2193.

[5]顾建华，郭仁德，张志斌，等.汉防己甲素对人胰腺癌耐药细胞株SW1990-GEM多药耐药性的逆转机制[J].天津医药，2013，41(1)：48-52.

[6]左坚.皖南及周边地区粉防己药材资源调查及质量差异研究[D].济南：山东中医药大学，2011：8-11.

[7]黄泽春，王益群.高效液相色谱法测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量[J].中南药学，2008(5)：541-543.

[8]黄丽萍，左坚，张颖.不同产地粉防己药材中主要生物碱含量对比研究[J].甘肃中医学院学报，2010，27(3)：65-67.

[9]孙世荣，蒋水元，李虹，等.广西两面针种群分布特征[J].福建林业科技，2010，37(2)：78-81.

Determination of Tetrandrine and Fangchindine inStephaniatetrandrafrom DifferentAreas in Jiangxi Province

LAI Xiao-lian1，GUO Sheng-mao1，PENG Ren2，CHEN Lan-lan1，LIAO Xing-guo1

(1.CollegeofLandscapeArchitectureandArt，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，Jiangxi，China；2.CollegeofLifeScience，JiangxiNormalUniversity，Nanchang330027，Jiangxi，China)

The content of tetrandrine(TET) and fangchindine(FAN) inStephaniatetrandrafrom different areas in Jiangxi Province was determined by HPLC.The result indicated that the method is accurate，reproducible，and samples in the 48 h stable，suitable for determination of TET and FAN inStephaniatetrandra.The contents of TET and FAN inStephaniatetradrafrom different places were markedly different，the content of TET were 2.28%～6.94%，the content of FAN 1.34%～3.15%，the contents of TET and FAN inStephaniatetrandrafrom Yongfeng，Leping，Yihuang and Gaoan were higher than others.

Stephaniatetrandra；tetrandrine；fangchinoline；HPLC

2014-03-09；

2014-04-20

江西省科技支撑计划项目(20111BBG70030-5)；中央财政林业科技推广示范资金项目(JXTG[2013]11)

赖晓莲(1978—)，女，江西宁都人，江西农业大学园林与艺术学院实验师，从事森林培育研究。E-mail：laixiaolian@126.com。

郭圣茂(1970—)，男，江西宁都人，江西农业大学园林与艺术学院副教授，从事森林培育研究。E-mail：shmguo@163.com。

10.13428/j.cnki.fjlk.2015.01.018

S759.82；R284.1

A

1002-7351(2015)01-0084-03