胃癌组织中miR-451与MIF的表达及与临床病理的关系

马 宁 周 云 (河南省人民医院 郑州大学人民医院肿瘤内科，河南 郑州 450003)

随着肿瘤医学的进步，microRNA(miRNA)与恶性肿瘤的关系成为临床研究的一大热点。研究证实，miR-451与恶性肿瘤的发生、发展存在相关性〔1〕。巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在恶性肿瘤的发病及发展过程中发挥着重要的作用，能够促进肿瘤细胞增殖、分化、浸润、转移及抑制肿瘤细胞凋亡〔2〕。本文旨在探讨胃癌组织中miR-451与MIF的表达及与临床病理的相关性，为临床治疗胃癌提供有效的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年3月至2014年3月于我院接受治疗的30例胃癌患者，其中男17例，女13例;年龄44～76〔平均(61.3±5.5)〕岁。所有患者在手术前未进行化放疗等相关抗肿瘤治疗。均通过肿瘤组织病理标本苏木素-伊红(HE)染色检查确诊为腺癌，肿瘤旁组织病理标本位置距离肿瘤边缘＞5 cm，经HE染色价差确诊非癌组织。

1.2 方法 相关试剂:RNA提取采用TRIzol试剂盒，miR-451检测采用Super-ScriptⅢ First-Strand Synthesis System试剂盒，均由美国Invitrogen公司提供;PCR检测采用2×PCR Master Mix试剂盒，MIF检测采用Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒，均由上海生物工程有限公司提供。操作过程严格按照试剂盒说明书操作。

检测过程〔3，4〕:取75 mg组织液经氮气凝固并将其研磨成为固体粉末，提取RNA，并对260 nm吸光值进行检测并记录。若计算RNA在280 nm与260 nm处的吸光度比值范围保持在1.8～2.1之间，则表示RNA是高纯度，并进一步检测RNA的完整性，检测完成后将RNA放置于-70℃的环境内进行保存。RNA分别与miRNA及MIF进行合成，成为cDNA第一链，放置于-20℃的环境内保存。将cDNA分别进行PCR检测，miR-451将U6作为内参，MIF将β-actin作为内参。miR-451与MIF mRNA的相对表达量采用2-ΔΔCt方法表示。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行分析，各组指标以±s表示，行t检验，计数资料采用 χ2检验，相关性采用Pearson、one-way ANOVA 分析法。

2 结果

2.1 肿瘤组织与肿瘤旁组织中miR-451以及MIF的相对表达量比较 肿瘤组织中的miR-451相对表达为(0.287±0.143)，显著低于肿瘤旁组织(0.520±0.257)(t=-4.021，P=0.021);肿瘤组织中的 MIF 相对表达为(1.542±0.023)，显著高于肿瘤旁组织(0.631±0.027)(t=-23.183，P=0.010)。

2.2 miR-451与MIF在肿瘤组织与肿瘤旁组织中的相关性分析 肿瘤组织中的miR-451相对表达为(0.287±0.143)，MIF相对表达为(1.542±0.023)，miR-451与 MIF的表达呈负相关性(t=-0.721，P ＜0.05)。

2.3 肿瘤组织中miR-451及MIF与临床病理的相关性分析 肿瘤组织中miR-451及MIF与胃癌的组织类型(高、中、低分化)、TNM 分期(Ⅰ +Ⅱ、Ⅲ +Ⅳ)、浸润深度(T1+T2、T3+T4)及淋巴结转移(有、无)相关(P＜0.05)。见表1。

表1 肿瘤组织中miR-451、MIF与临床病理的关系分析(n，±s)

表1 肿瘤组织中miR-451、MIF与临床病理的关系分析(n，±s)

项目类型 n miR-451 F/P值 MIF F/P值性别男 170.315±0.1720.673/0.4121.602±0.1710.941/0.350女 130.296±0.0931.594±0.121年龄(岁)≥60180.315±0.1720.457/0.4811.572±0.1740.289/0.541＜60120.275±0.0911.642±1.002 Bormann分型Ⅰ型 00 0.075/0.7530 0.0236/0.657Ⅱ型 140.290±0.1481.543±0.174Ⅲ型 160.284±0.1351.624±0.087Ⅳ型 00组织类型高分化 00 9.876/0.0120 29.801/0.001中分化 200.321±0.1311.520±0.124低分化 100.160±0.0471.670±0.060 TNM分期Ⅰ + Ⅱ 170.360±0.14513.731/0.0151.382±0.11228.537/0.002Ⅲ + Ⅳ 80.170±0.0491.721±0.071浸润深度T1+T2170.354±0.13714.024/0.0111.652±0.16729.084/0.001 T3+T48 0.157±0.0471.650±0.073淋巴结转移有 110.157±0.04214.453/0.0061.490±0.11228.463/0.001无 190.135±0.1381.648±0.057远处转移有 60.156±0.0584.570/0.0611.602±0.0703.983/0.081无240.303±0.1381.593±0.038

3 讨论

miRNA来源于内源性表达转录本，研究显示，miRNA在人体内参与了机体细胞的增殖、分化及凋亡，同时在细胞的基因调控、免疫应答以及肿瘤的发病、发展以及预后中起着关键的作用〔5〕。miR-451属于多功能 miRNA类型。研究证实，miR-451与多种疾病密切相关，比如血液性疾病、心脑血管系统疾病、神经系统疾病及肿瘤相关疾病等〔6〕。临床关于miR-451与胃肠相关的消化系统疾病之间的相关性研究相对较少。研究〔7〕显示miR-451在胃癌及大肠癌组织中的相对表达均明显下降，而且miR-451与细胞增殖、凋亡、细胞对放化疗的敏感程度以及疾病发展预后存在着相关性。

RT-PCR技术是可对核酸分子进行有效精确的定量，可检测胃癌中miR-451及MIF的表达。本研究证实了采用RT-PCR技术可检测miR-451在胃癌组织中的表达，且呈现出明显低表达，由此推测其可能负向调控了肿瘤的发生及发展。同时研究提示MIF在胃癌组织中呈现高表达。临床研究推测miR-451可能通过有效抑制致肿瘤基因MIF进一步调节细胞的增殖、凋亡等，因此，MIF 可作为 miR-451 的有效作用靶点〔8，9〕。

综上所述，胃癌组织中miR-451与MIF的表达与胃癌的组织类型、TNM分期、浸润深度及有无淋巴结转移相关，miR-451可以抑制MIF表达，从而调控胃癌在人体内的发生及发展。

1 黄胜蓝，郑长黎.与胃癌发生相关MicroRNA的研究新进展〔J〕.现代生物医学进展，2012;12(24):4777-9.

2 王 乐.在胶质瘤细胞系中利用蛋白组学技术探究miR-45新的直接作用靶点的实验研究〔D〕.天津医科大学硕士论文，2013;6(3):39-40.

3 Tian Y，Nan Y，Han L，et al.MicroRNA miR-451 downregulates the PI3K/AKT pathway through CAB39 in human glioma〔J〕.Int J Oncol，2012;40(4):1105-12.

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5 Li X，Sanda T ，Look AT，et al.Repression of tumor suppressor miR-451 is essential for NOTCH1-induced oncogenesis in T-ALL〔J〕.J Exp Med，2011;208(4):663-75.

6 Frampton AE，Gall TM，Castellano L，et al.Towards a clinical use of miRNAs in pancreatic cancer biopsies〔J〕.Expert Rev Mol Diagn，2013;13(1):31-4.

7 Wang R，Wang ZX，Yang JS，et al.MicroRNA-451 functions as a tumor suppressor in human non-small cell lung cancer by targeting ras-related protein 14(RAB14)〔J〕.Oncogene，2011;30(23):2644-58.

8 Zhang Z，Luo X，Ding S，et al.MicroRNA-451 regulates p38 MAPK signaling by targeting of Ywhaz and suppresses the mesangial hypertrophy in early diabetic nephropathy〔J〕.FEBS Lett，2012;586(1):20-6.

9 Bitarte N，Bandres E，Boni V，et al.MicroRNA-451 is involved in the self-renewal，tumorigenicity，and chemoresistance of colorectal cancer stem cells〔J〕.Stem Cells，2011;29(11):1661-71.