两种创伤后应激障碍SD孕鼠造模方法的比较研究

张先庚 曹冰 曹俊 龙芋君 谢汶倚 张辉 蒋晓静

两种创伤后应激障碍SD孕鼠造模方法的比较研究

张先庚 曹冰 曹俊 龙芋君 谢汶倚 张辉 蒋晓静

目的 探讨建立适用于SD孕鼠的创伤后应激障碍模型的方法，为深入研究创伤后应激障碍的发病机制及调护干预提供科学依据。方法 将SD孕鼠随机分为3组：低频高强度组，高频低强度组，空白对照组。前两组采用不同的创伤后应激障碍SD孕鼠造模方法，待SD孕鼠生产后，测量子代鼠第1天和第30天体质量、身长及翻身测试情况。结果 低频高强度组体质量、身长值均小于高频低强度组及空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；高频低强度组和空白对照组体质量、身长值比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；3组翻身测试差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 SD孕鼠采用低频高强度的造模方法更具有客观性及可行性，可能更适合SD孕鼠的创伤后应激障碍造模。

创伤后应激障碍；应激；动物模型

创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder，PTSD)是指人体对创伤等严重应激因素引起的一种延迟性、持续性心身反应，是由威胁性、灾难性心理创伤导致延迟出现和长期持续的心理、生理障碍[1]，其核心症状是创伤性记忆的不断闯入导致恐惧、焦虑的一种精神创伤性事件，严重危害健康，对孕妇尤为突出。创伤后应激障碍作为一种精神创伤性事件后高发的、后果严重的精神疾病，其发病率高达20%，约1/3的患者终生不愈，1/2以上的患者常伴有物质滥用和其他精神障碍，中位缓解期为14年[4-5]。其发生率高，严重影响患者身心健康，造成巨大社会负担，已经日益引起世界各国政府和军队的重视。作为研究PTSD的一种有效手段，动物模型的建立一直为研究者所重视，适用于SD孕鼠的创伤后应激障碍模型也仍有待探索。

目前创伤后应激障碍大鼠模型的方法各异[2]，其中单次延长应激(single prolonged stress，SPS)为国际公认的大鼠PTSD造模方法之一。对于SD孕鼠的特殊性，本研究在将SPS法刺激强度减半，频率提升，探索两种不同造模方法对子代鼠生长发育的影响，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 雄鼠选用90日龄，体质量350～400 g，雌鼠选用80～90日龄，体质量为270～310 g，均无生育史。实验前置SD大鼠于室内适应环境1周，昼夜交替自然采光，室温20～25℃，湿度40%～70%。

1.1.2 仪器 天平秤，直尺，自制束缚器，游泳缸，秒表等。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 将SD孕鼠放置于标准鼠笼中饲养，孕期第0天至第6天不予任何干预，孕中期即孕7 d随机分为空白对照组、低频高强度组、高频低强度组。低频高强度组SD孕鼠采用SPS法，即禁锢2 h后立即强迫游泳20 min(水深40 cm，水温25℃)，每天干预1次，连续7 d；高频低强度组SD孕鼠则禁锢1 h后，立即强迫游泳10 min(水深25 cm，水温25 ℃)，每天干预2次，连续7 d。

1.2.2 观察指标及测定 测量子代鼠出生后第1天翻身情况；各组随机选取子代鼠12只，测量第1天和第30天身长、体质量。身长测量即将子代鼠平放桌上，背面向上，使身体伸直，用直尺量取鼠头至鼠尾根部的长度，单位以厘米(cm)计算。体质量测量采用电子天平，以克(g)计数[3]。对各组新生子代鼠出生当天均参与翻身测试，翻身测试是将子代鼠四脚朝上，30 s内翻身成功记为阳性。

1.2.3 统计学处理 使用SPSS 17.0统计软件进行数据统计处理。计量资料若满足正态性和方差齐性实验数据均以±s)表示，组间采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义；方差不齐，采用Tamhane's T2法，计数资料采用χ2分析。

2 结果

2.1 造模方法对子代鼠体质量的影响(表1)

表1 各组子代鼠体质量比较±s，g，n＝12)

表1 各组子代鼠体质量比较±s，g，n＝12)

注：#P为与空白对照组比较；*P为与高频低强度组比较；&P为与高频低强度组比较

组别 第1天 第30天 P1 P1 P30 P30低频高强度组 5.99±0.39 66.11±9.30 0.002* 0.000# 0.000* 0.000#高频低强度组 6.30±0.45 75.02±5.21 0.002& 0.265# 0.000& 0.187#空白对照组 6.40±0.39 78.35±10.09 0.000& 0.265* 0.000& 0.187*

从表1可见，3组子代鼠第1天及第30天体质量比较，低频高强度组＜高频低强度组＜空白对照组，低频高强度组与高频低强度组及空白对照组两组体质量比较，差异有高度统计学意义(P＜0.01)；高频低强度组与空白对照组体质量比较，差异无统计学意义(P＜0.05)。

2.2 造模方法对子代鼠身长的影响(表2)

表2 各组子代鼠身长比较(±s，cm，n＝12)

表2 各组子代鼠身长比较(±s，cm，n＝12)

注：#P为与空白对照组比较；*P为与高频低强度组比较；&P为与高频低强度组比较

组别 第1天 第30天 P1 P1 P30 P30低频高强度组 5.06±0.15 12.47±0.67 0.000* 0.000# 0.005* 0.000#高频低强度组 5.25±0.16 12.88±0.38 0.000& 0.984# 0.005& 0.092#空白对照组 5.26±0.24 13.06±0.31 0.000& 0.984* 0.000& 0.092*

从表2可见，3组子代鼠第1天及第30天身长比较，低频高强度组＜高频低强度组＜空白对照组，低频高强度组与高频低强度组及空白对照组两组身长比较，差异有高度统计学意义(P＜0.01)；高频低强度组与空白对照组身长比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.3 造模方法对子代鼠翻身能力的影响(表3，图1) 如表3所示，对各组新生子代鼠出生当天均参与翻身测试，其中低频高强度组共102只，高频低强度组145只，空白对照组154只。3组翻身测试结果，采用卡方检验，检验水准α＝0.05。

2.4 各组子代鼠翻身成功率对比(表4)

表3 各组子代鼠翻身测试结果

表4 各组子代鼠翻身成功率

图1 各组子代鼠翻身测试比较

如图1所示，低频高强度组、高频低强度组以及空白对照组3组差异无统计学意义，低频高强度组＜高频低强度组＜空白对照组。

3 讨论

3.1 寻找适合SD孕鼠PTSD造模方法，深入研究PTSD的发病机制及对子代生长发育影响 有研究者对2008年汶川地震前后的13 003例新生儿进行了一系列调查，结果发现震后的新生儿出生率较震前下降了4.29%，而早产儿的比率由震前的5.63%增长到震后的7.41%，且新生儿的出生缺陷由震前的0.99%明显升高到震后的1.18%[6]。对SD大鼠而言，当时的地震也降低了交配和怀孕[7]。同期进行的另一项随访研究表明，地震后18个月，震区孕妇仍具有较高的PTSD发病率[8]。也有相关研究数据表明，孕期应激对子代也具有较为长远的负面影响，例如，孕期暴露于应激条件下可使母代妊娠周期缩短[9-10]，子代出生体质量下降、可出现认知或情感障碍(如焦虑，抑郁，注意力缺陷，学习能力下降等)[11]；并对子代的神经行为发育有着长期的影响，如躯体感觉运动协调功能障碍、记忆力减退等[12]。因此，PTSD消耗着巨大的医疗资源和社会资源，患者多伴有失业、家庭不稳定、健康等问题，具有严重的社会危害性，已引起了全社会的关注。因此寻找一种适合孕鼠的PTSD造模方法，为深入研究PTSD影响子代生长发育等各方面的机制进行研究，已成为一个迫切需要解决的科学与社会问题。

3.2 实验结果分析 实验结果显示空白对照组及高频低强度组的子代鼠在体质量以及身长的身长发育方面，其结果均优于低频高强度组，体质量、身长分布趋势为：低频高强度组＜高频低强度组＜空白对照组，差异具有统计学意义；但在高频低强度组与空白对照组两组比较中，子代鼠生长发育均无统计学差异。3组翻身测试结果虽无统计学差异，但由表4可得知，各组翻身成功率，低频高强度组为88.2%，高频低强度组为92.4%，空白对照组为96.1%，低频高强度组＜高频低强度组＜空白对照组。综上实验结果分析，可能与高频低强度组的造模方法刺激强度未能达到PTSD造模标准有关，故未与空白对照组以及低频高强度产生差异。然而相对高频低强度组而言，低频高强度组的刺激强度达到PTSD阈值，因此其子代鼠在生长发育方面比其他两组较为滞后，子代鼠因PTSD损伤较为严重而产生的统计学差异较明显。由此可见，SD孕鼠采用低频高强度的造模方法更具有客观性及可行性，可能更适合SD孕鼠的创伤后应激障碍造模。

本研究用两种不同的造模方法重点对孕中期母鼠进行PTSD造模以及子代鼠的生长发育方面进行探讨，在造模方法以及对子代鼠检测方面具有一定的局限性。在以后的研究中力求更深入探索适用于不同妊娠阶段SD孕鼠PTSD造模方法，以及子代鼠各生长阶段的生长发育情况，并扩展子代鼠的检测范围，包括行为测试及神经生物学检测、遗传机制等。进一步探索适合SD孕鼠的PTSD造模，为深入研究PTSD发病机制以及对子代遗传影响研究具有重要的现实意义。

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Objective To probe and establish suitable model replicating methods of pregnant SD rats with post-traumatic stress disorder，so as to provide scientific basis for intensive study on pathogenesis and nursing intervention of post-traumatic stress disorder.Methods Pregnant SD rats were randomly divided into three groups：group of low frequency and high intensity，group of high frequency and low intensity，and blank control group.The first two groups adopted different model replicating methods of pregnant SD rats with post-traumatic stress disorder.After production of pregnant SD rats，the offspring rats were measured in terms of body mass，body length，and turn-over test on the 1st day and the 30th day.Results The body mass and body length in the group of low frequency and high intensity were lower than those in the group of high frequency and low intensity，and blank control group，with differences of statistical significance(P＜0.05).The comparison of body mass and body length between the group of high frequency and low intensity and the blank control group showed differences without statistical significance(P＞0.05).Turn-over tests among the three groups had no difference of statistical significance(P＞0.05).Conclusion The model replicating method of low frequency and high intensity for pregnant SD rats is more objective and feasible，which is more suitable for pregnant SD rats modeling of post-traumatic stress disorder.

Post-traumatic stress disorder；Stress；Animal model

2015-03-09)

1005-619X(2015)04-0680-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.07.003

611137 成都中医药大学护理学院

国家自然科学基金资助项目(81373710)；四川省教育厅资助项目(13ZA0273)