颈椎1号胶囊中岩白菜素的质量比测定

2015-08-21杨连荣常惟志段升东闫玉芹姜立丽李彦冰张哲锋

哈尔滨商业大学学报（自然科学版） 2015年2期

杨连荣，常惟志，段升东，闫玉芹，姜立丽，李彦冰，张哲锋

(1.黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨150040;2.哈尔滨溢康中医药研究所，哈尔滨150036;3.黑龙江省兽药饲料监察所，哈尔滨150069)

颈椎1号胶囊原处方是临床验方，具有活血化瘀，补肾强骨;祛风除湿，通络止痛的功效.经文献查阅，岩白菜素是落新妇的主要成分，具有显著的抗炎、镇痛作用，且处方量相对较大，水提取易检出，故以岩白菜素质量比为指标，采用高效液相色谱法测定，为颈椎1号胶囊的质量评价提供依据.

1 仪器、试剂、试药

高效液相色谱仪(Waters 2695－2996美国Waters公司);Hypersil ODS2(4.6mm ×200 mm，5 μm)色谱柱(大连依利特分析仪器有限公司);指针式电热恒温水浴锅(上海跃进医疗器械厂);电子分析天平(AB－204N，上海梅特勒－托利多仪器有限公司);数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司KQ－250DE);甲醇(色谱纯，分析纯均购自西陇化工股份有限公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈有限公司);蒸馏水(哈尔滨道外北齐玻化精教仪器经销商);岩白菜素对照品(中国药品生物制品鉴定所，200202);颈椎1号胶囊(实验室自制).

2 实验方法

2.1 溶液的配置

标准溶液:精密称取岩白菜素标准品3.18 mg，放置于50 mL容量瓶中，加入色谱甲醇40 mL，超声振荡30 min，加入色谱甲醇定容至刻度，岩白菜素标准品溶液质量浓度为 63.6 μg/mL[1－2].

供试品溶液:精密称取颈椎1号胶囊内容物1.8 g，放置于25 mL棕色容量瓶中，加入色谱甲醇20 mL，超声处理 30 min，放冷，定容，摇匀，用 0.45 μm微孔滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液[3].

阴性对照品溶液:按照处方比例，去除落新妇，以最优工艺提取药材，遵照供试品溶液的制备方法，制备阴性对照药材.

2.2 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS2(4.6 mm ×200 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(20∶80);流速:1 mL/min;柱温:25℃;检测波长:275 nm.(岩白菜素标准品、供试品、阴性对照图见图1)

图1 岩白菜素高效液相色谱图

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线的绘制

分别吸取标准品溶液 5、10、15、20、25 μL，进样，记录峰面积，以标准品溶液进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程:Y=1 696 570.4+29 107.39，R2=0.999 8，结果表明岩白菜素在0.32～1.59 μg范围内与峰面积呈良好线性关系.(见表1、图2)

表1 进样量与峰面积值关系

2.3.2 精密度测定

取同一标准品溶液，精密吸取10 μL，按2.2项下色谱条件，连续进样5次，测得平均峰面积为1 136 491，RSD 值为 0.92%，n=5，结果表明精密度良好.(见表2)

图2 岩白菜素的标准曲线

表2 精密度实验结果(n=6)

2.3.3 稳定性试验

为确保实验结果的准确性，重新制备一组颈椎1号胶囊，精密称取其内容物1.800 3 g，按2.1项下的要求配制供试品溶液，分别在4、8、10、12 h进样 10 μL，测得平均峰面积 1 411 132，RSD 为 2.64%，表明颈椎1号胶囊供试品溶液在12 h以内具有良好的稳定性.(见表3)

表3 稳定性实验结果(n=6)

2.3.4 重现性试验

精密称定颈椎1号胶囊内容物约1.8 g，共6份，按照2.1项下的要求配制供试品溶液，进样10 μL，分别测得相应的峰面积，结果为平均质量比1.13 mg/g，RSD为1.07%，结果表明该方法重复性良好.(见表4)

表4 重现性实验结果(n=6)

2.3.5 加样回收试验

精密称定颈椎1号胶囊内容物约0.9 g，共6份，分别加入质量浓度为63.6 μg/mL的岩白菜素溶液8 mL，定容至25 mL容量瓶中，操作参考供试品溶液制备项下，制备成待测溶液，分别进样10 μL，按照2.2项下的色谱条件操作，记录峰面积，推算质量比，结果平均加样回收率为97.03%，RSD为2.11%(n=6)，表明该方法准确.(见表5)

表5 加样回收实验结果(n=6)

2.4 质量比测定

分别量取3个批次颈椎1号胶囊内容物约为1.8 g，精密称定，每个批次重复3次，共9份，按照2.1项下供试品溶液制备方法，分别制成供试品溶液.精密吸取标准品溶液与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按照2.2项下色谱条件操作，用外标一点法计算质量比，三个批次质量比分别是 1.13、1.04、1.08 mg/g，平均质量比是 1.08 mg/g.以质量比的80%计算，每克胶囊中内容物含落新妇以岩白菜素计，不得少于0.86 mg/g.(见表6)