HPLC测定三七伤药片中人参皂苷Rgl的含量

郭利群 张洪 杨光梅

摘要：目的建立三七伤药片中人参皂苷Rgl高效液相色谱含量测定方法。方法采用Agilent1260高效液相色谱法，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂Agilent SB - C18 4.6×250mm色谱柱，流动相为乙腈一水梯度洗脱，检测波长203cm，柱温：30℃结果 该方法人参皂苷Rgl含量在（0-0.015） mg/mL范围内线性良好，人参皂苷Rgl平均回收率为97. 8%。结论该方法比《中国药典》科学、准确，并能够检测出三七伤药片中有效成分人参皂苷Rgl含量。

关键词：HPLC；三七伤药片；人参皂苷Rgl；含量

中图分类号：R284

文献标志码：A

文章编号：1007 - 2349（ 2015） 02 - 0068 - 03三七是三七伤药片中最主要的药材之一，现标准中主要控制三七伤药片中柚皮苷含量，没有测定其三七中皂苷类成分，本方法采用液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量，完善了三七伤药片的质量控制，保证了药品的质量。1 仪器与试药高效液相色谱仪（德国Agilent公司1260，HPLC，紫外检测器）、超声波仪（上海科导有限公司功率：350 W、工作频率：53 KHz）、电子天平（梅特勒一托利多XP204）、色谱柱（十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂Agilent SB - C18 4.6×250 mm）。人参皂苷Rgl对照品（中国食品药品检定院提供，批号为（110703 - 201027）、色谱纯的乙腈（德国merk公司提供）、纯化水（过0. 22 um的密理博制纯水机）。2方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 对照品溶液精密称取人参皂苷Rgl对照品约5mg，置10 mL量瓶中，加甲醇适量溶解，并用甲醇稀释至刻度。2.1.2供试品溶液取三七伤药片40片，除去糖衣，精密称定，研细，取约1.0g，精密称定，置50mL容量瓶中，加甲醇40 mL，超声处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。2.1.3 阴性样品溶液的制备 取阴性样品1 g（按处方缺三七的），按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液2.2高效色谱条件流动相：乙腈（A）和水（B）柱温30℃，流速1.0 mL/min，检测波长为203 nm，精密量取上述供试品溶液及对照品溶液各10μL.分别注入HPLC仪，记录色谱图，取主峰面积，按外标法计算样品浓度。梯度洗脱见表l。2.3专属性试验按以上色谱条件精密吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，观察结果，记录色谱图。结果表明，其他药味不干扰供试品溶液中人参皂苷Rgl的测定，人参皂苷Rgl分离良好。2.4线性关系考察精密量取人参皂苷Rgl对照对照品溶液，2、4、8、10、20、30μl，在上述色谱条件下，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积y对实际进样量（ μl）进行线性同归，回归方程及线性范同见表1。结果表明，进样浓度在0. 000～0.015 mg/mL范罔内，人参皂苷Rgl与峰面积呈线性关系。2.5精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，按以上色谱条件连续进样6次，记录人参皂苷Rgl的峰面积，如下图，表2，求得人参皂苷Rgl的峰面积为l188. 6766，人参皂苷Rgl的RSD为0.16%.2.6 重复性测定 按样品测定的方法制备同一批号样品6份，按以上色谱条件依次进样10 μL，记录色谱图并计算得到人参‘皂苷Rgl的含量和相应的RSD%，该样品人参皂苷Rgl平均含量为1. 68 mg/片，RSD%为1.4%。见表3。2.7 回收率试验精密称取已知含量的人参皂苷Rgl的三L伤药片样品9份，置于具塞锥形瓶中，每份分别精密称取人参皂苷Rgl对照品2.0 mg按供试品溶液制备方法处理，定容至10 mL容量瓶中，制成样品溶液，用外标法计算人参皂苷Rgl的含量并计算其回收率和RSD%，，该样品人参皂苷Rgl回收率为97. 77% ，RSD%为1.8%.见表4。2.8含量测定 精密称取不同批号的样品细粉粉0.5g（每批平行各取2份），分别按供试品溶液的制备方法处理，制成供试品溶液。分别取制备的供试品溶液，人参皂苷Rgl对照品溶液各10μL进样，按以上色谱条件测定，按外标法以峰面积计算人参皂苷Rgl含量，结果见表53讨论3.1进样体积选择用高效液棚色谱（HPLC）同时测定人参皂苷Rgl含量时，人参皂苷Rgl峰形和基线受进样体积影响，在进样体积2、4、8、10 .20 .30μl线性条件下测试了人参皂苷Rgl的峰面积及线性关系，进样体积10μl以下峰面积和基线较好，而进样体积20 .30μl峰面积和基线较差，所以进样时应选择10μl为进样体积进行检测效果较好3.2分析时间 该梯度分析时间为45min，从样品分析图谱来：梯度时间35min以后几乎没有样品杂质峰出现，但本品为多成分中药制剂适当延长分析时间，可以避免杂质的干扰与分析。保证样品分析含量分析的可靠性与准确性。3.3以人参皂苷Rgl控制三七伤药片中的有效成分含量三七伤药片中含有中药三七其含有的有效成分为Rgl、Re、Rbl、Rl、Rd等，但在整个三七伤药片多味中药制剂中所含的比例不是最大，所以在成分含量控制中有些较小的成分无法检出。而其中人参皂苷Rgl的含量超过信噪比约为3：1检出限（0. 5ug/mL）较多，能够准确检出，因此，以控制三七中目标特征峰人参皂苷Rgl含量的分析方法作为三七伤药片有效成分含量的方法是意义的。3.4分析方法该分析方法比《中国药典》2010年版一部中三七伤药片中仅对所含成分柚皮苷的含量测定方法，更为全面、科学、有效地检测本品的有效组分的含量；能更好地反映药品的特性和质量。参考文献：[1]国家药典委员会编，中国药典.2010年版.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.1.[2]谢耀轩，林亚珠；超高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rgl、人参皂苷Rb1和三七皂苷Rl的含量[J]；广东药学院学报；2011 .27（5）.[3]郭健；李敏；高岩；UPLC法测定保健品中五种人参皂苷的含量[J].中国卫生检验杂志，2012，7.（收稿日期：2014–11-06）