胶体金检测卡在检测牛结核病中的应用

舒 展 吕春华 叶尔肯 安纳斯 黄杨波

(新疆阿勒泰地区动物疾病控制与诊断中心，新疆 阿勒泰市836500)

牛结核病的主要临床特征表现为病程缓慢、咳嗽以及渐进性消瘦，衰竭病理特征主要为多种组织器官形成结节状、肉芽肿结核结节、干酪样坏死和钙化病灶等。牛结核病传染性极强，一年四季皆可发病，同时会从奶制品等渠道传染人与犊牛，危害性较大。要想从源头上对牛结核病进行控制，就应当做好对其的临床诊断，从而为控制该病提供强有力的技术支持[1]。为掌握牛结核病疫情的实际发病情况，笔者选择胶体金试纸条检测的手段，同时通过结核菌素皮下注射来实施对比试验。

1 材料与实验方法

1.1 材料

选取来源于本地区的某县某乡随机采取的牛血清860头份，另准备结核菌素、牛结核MPB70/83抗体胶体金检测试纸、20ul定量吸管或加样枪、酒精纱布、注射器、塑料吸头、卡尺、剪刀以及工作衣帽等。

1.2 实验方法

1.2.1 牛结核MPB70/83抗体胶体金检测实验方法

选取待检测牛血清20-80μL，将其慢慢加入牛结核MPB70/83抗体胶体金检测试纸条样品孔处，可发现在试纸条上出现红色条带移动。但如果若5分钟仍未出现条带移动，需再在样品孔中滴入检测血清1滴，十分钟后再观察，若超过半小时仍未出现结果则应舍弃改组实验。若室内温度低于18℃，则应相应延长观察结果时间。

判断标准：（1）阴性，指在检测试纸条上只发现一条呈紫红色的参考带；（2）阳性，指在检测试纸条上发现检测带、参考带两条呈紫红色条带；（3）无效，是指在检测试纸条上未发现任何条带。

1.2.2 结核菌素皮下实验方法

先将牛进行编号，在选号牛颈部中上位置的1/3处，直径为10cm范围内的毛发全部剪掉作为手术部位，接着用卡尺测量该范围中央皮皱的厚度，并记录。然后用75%酒精或5%碘酒纱布对术部进行消毒，在皮下注射0.1mL结核菌素，注射过后可发现局部产生小泡。注射后3天、5天分别观察注射部位是否出现肿胀、疼痛以及发炎等异常情况，然后再用卡尺测量肿胀面积大小以及中央皮皱厚度，记录数据。观察3天后，针对出现阴性或者可疑反应的牧牛，必须在之前注射位置处再注射同等计量的结核菌素。然后注射2天后进行观察，具体观察项目同前，做好相应数据记录。

判断标准：（1）阴性反应，即手术部位未出现炎性水中，皮差小于2mm，或是只出现硬结节的牛；（2）可疑反应，是指发生炎性水肿的面积小于3.5cm*4.5cm，同时皮差介于0.5cm-0.8cm之间，即表示可疑反应；（3）阳性反应，是指局部出现发热、疼痛，发生弥漫性水肿，界限不明确、坚硬度如面团，水肿面积大于3.5cm*4.5cm。另外，若出现上诉反应，但症状较轻，并且皮差大于0.8cm，也称为阳性反应。

2 实验结果和分析

2.1 牛结核MPB70/83抗体胶体金检测结果

实验结果未出现无效结果，阳性结果为在胶体金快速检测试纸条上发现质控线及检测线，阴性结果则只在胶体金检测试纸条上出现质控线。

2.2 结核菌素皮下注射反应和牛结核MPB70/83抗体胶体金检测结果

在860头牛血清样本中，用牛结核MPB70/83抗体胶体金检测试纸条检测牛结核病，将结果与皮下注射结核菌素产生的反应结果做比较。实验结果：皮下注射阳性反应为18头，胶体金试纸条检测阳性结果为16头，两组阳性结果符合率为89%（16/18）；阴性结果皮下注射为812头，胶体金试纸条检测阴性结果为838头，两组阴性结果符合率为97%（812/838。

2.3 实验结果分析

针对结核菌素皮下注射反应以及胶体金试纸条检测结果进行统计学分析，并利用X2进行检验，得出结论牛结核MPB70/83抗体胶体金试纸条检测与结核菌素皮下注射检测具有较高的符合率。

3 结果

牛结核病主要是牛分枝杆菌所导致的一种能够人畜共患的传染病，此病一直以来都在很大程度上威胁着人类与动物的生命健康，同时也给社会带来了非常大的损失。近年来，国内牛结核疫情受到了越来越多的关注。由本文分析结果表明，牛结核MPB70/83抗体胶体金试纸检测与结核菌素皮下注射检测结果两者之间差异较小，具有较高的符合率。并且，胶体金快速检测试纸条在检测过程中具有方便、快捷、敏感以及特异性的优势，因而十分适合用于对牛结核病的检测和普查，同时还能够为结核菌素皮下注射反应结果提供一定的辅助诊断，在针对牛结核病的普查及根除计划中拥有辽阔的发展前景。

[1]庄金秋，梅建国，沈志强.胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[J].中国动物检疫，2012，(09)：70-75.