不同炮制方法对黄精多糖含量的影响

瞿昊宇，冯楚雄，谢梦洲*，朱建平，孙毅中，崔培梧，肖作为（1.湖南中医药大学中医诊断学重点学科，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南 长沙 410208；3.新化绿源农林科技有限公司，湖南 娄底 417000；4.湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208；5.湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南 长沙 410208）

不同炮制方法对黄精多糖含量的影响

瞿昊宇1，5，冯楚雄1,2，5，谢梦洲1,2，5*，朱建平1,2，5，孙毅中3，5，崔培梧4，5，肖作为4，5
（1.湖南中医药大学中医诊断学重点学科，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南 长沙 410208；3.新化绿源农林科技有限公司，湖南 娄底 417000；4.湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208；5.湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南 长沙 410208）

目的探究湖南本土种植及加工的鸡头黄精、多花黄精采用不同炮制方法对黄精多糖含量的影响。方法超声提取法提取多糖，用 Sevage法除去蛋白，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果鸡头黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、七蒸七晒、九蒸九晒炮制后，多糖含量分别为7.973%、3.584%、2.845%、2.194%；多花黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、五蒸五晒、七蒸七晒炮制后，多糖含量分别为9.602%、3.185%、2.572%、2.043%；精密度良好（RSD=0.274%）、平均回收率99.29%、试验在60 min内稳定性良好（RSD=1.36%）。结论炮制过程蒸晒次数越多，黄精多糖含量越少。

黄精；多花黄精；黄精多糖；炮制；苯酚-硫酸法；酶标仪

黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red.、多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”，姜形黄精的原植物为多花黄精，鸡头黄精的原植物为黄精，而大黄精 （又名碟形黄精）的原植物为滇黄精。黄精归脾、肺、肾经，具有补气养阴，健脾润肺，益肾的功效，常用于改善和治疗脾胃虚弱，体倦乏力，口干食少，肺虚燥咳，精血不足，内热消渴等病症。现代药理学研究表明，黄精具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老以及降糖降脂等作用[1-2]。其中，黄精多糖、黄精皂苷是黄精发挥药理作用的重要物质基础。不同的炮制工艺对黄精多糖的含量有一定影响，进而影响黄精质量的高低及临床药效。本实验通过测定黄精多糖含量，探讨炮制工艺对黄精多糖的影响。

1 材料

1.1 仪器

FWl35型中草药粉碎机 （天津市泰斯特仪器有限公司），5810高速离心机 （德国艾本德），HH-2水浴锅（上海谷宁仪器有限公司），imark酶标仪（美国伯乐），RE-52A旋转式蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂），KQ-500DE型数控超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂及药物

黄精样品8种（新化绿源农林科技有限公司提供）：鸡头黄精炮制品（二蒸二晒、四蒸四晒，七蒸七晒、九蒸九晒），多花黄精炮制品（二蒸二晒、四蒸四晒，五蒸五晒、七蒸七晒）。葡萄糖，浓硫酸、5%苯酚水溶液（现配现用）、正丁醇、氯仿、无水乙醇。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

精密称取葡萄糖对照品100 mg，置100 mL棕色量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得1 mg/mL葡萄糖对照品。

2.2 供试品溶液制备

准确称取黄精样品各20.00 g，粉碎，分别加入100 mL蒸馏水浸泡 30 min。在100℃恒温超声90 min，过滤，重复提取1次，合并滤液，5 000 r/min离心10 min，取上清液，减压浓缩至原体积的1/4（约100 mL），向浓缩液中加4倍量无水乙醇，静置12 h后5 000 r/min离心10 min，弃上清，固体用少量水溶解，用 Sevage法 (正丁醇-氯仿为1:4)除蛋白，取上清液，浓缩至100 mL，得到黄精多糖提取液。黄精多糖提取液稀释20倍，得黄精多糖供试品溶液。

2.3 标准曲线绘制

葡萄糖对照品溶液稀释至 0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL，得各浓度葡萄糖标准品溶液。精密量取各浓度葡萄糖溶液2 mL，分别置于加塞试管中，加入 5% 苯酚水溶液（现配现用）1.0 mL混匀，随后快速加入 5 mL浓硫酸，10 min后摇匀30 s，30℃水浴20 min，准确吸取150 μL葡萄糖溶液至96孔板中，在490 nm波长处以试剂空白溶液为参比[3-4]，测定吸光度。以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y= 2.875 7X+0.030 38（R=0.994），葡萄糖含量在0.02～0.1 mg/mL的浓度范围线性良好。

2.4 精密度试验

取同一标准品溶液按“2.3”项下方法显色，测定吸光度，连续测定6次，结果为0.085、0.085、0.086、0.085、0.085、0.085，RSD=0.274%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密量取同一黄精供试品溶液2 mL，按“2.3”项下方法显色，分别在 0、10、20、30、40、50、60 min测定吸光度，结果测得吸光度分别为0.434、0.432、0.435、0.436、0.430、0.425、0.420，RSD=1.36%（n=7），表明供试品溶液显色后在60 min内稳定，提示测定过程需在60 min内完成。

2.6 加样回收试验

精密量取含量为0.799 mg/mL的黄精多糖供试品溶液10 mL，加入100 mL容量瓶中定容，得浓度为0.077 9 mg/mL的黄精多糖溶液。精密量取上述溶液1 mL，平行5份，分别加入0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL的葡萄糖标准品溶液 1 mL，按“2.3”项下方法显色，测定回收率。结果如表1所示，加样回收率平均值为99.29%，RSD=2.88%（n=5），说明该试验方法可行。

表1 样品加样回收实验结果 （n=5）

2.7 样品测定

精密量取黄精多糖供试品2 mL，按“2.3”项下方法显色，测定吸光度，重复3次。根据回归方程求出黄精供试品多糖浓度C（mg/mL)。计算出样品中的多糖含量M（%）。结果如表2、3所示。鸡头黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、七蒸七晒、九蒸九晒炮制后，多糖含量分别为7.973%、3.584%、2.845%、2.194%；多花黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、五蒸五晒、七蒸七晒炮制后，多糖含量分别为9.602%、3.185%、2.572%、2.043%。

表2 不同炮制方法的鸡头黄精的多糖含量测定结果（±s，n=3）

表2 不同炮制方法的鸡头黄精的多糖含量测定结果（±s，n=3）

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表3 不同炮制方法的多花黄精的多糖含量测定结果（±s，n=3）

表3 不同炮制方法的多花黄精的多糖含量测定结果（±s，n=3）

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3 讨论

黄精蒸制的目的,在唐代 《食疗本草》有记载“蒸之,若生则刺人咽喉,曝使干,不尔朽坏”[5]，在《医林篡要·药性》中有详细的论述：“生黄精,实有辛莶之味,戟人喉吻,惟蒸晒久,庶几补养滋肾耳。”由此可见，黄精炮制的目的：一是消除其刺激咽喉的不良反应,二是增强其补益作用。黄精的炮制方法多达十余种,但以蒸煮法为主,如有单蒸、重蒸、九蒸九曝、加辅料蒸制等[6]。而历史沿袭至清代以“九蒸九曝”的炮制方法为主流，在清代的多本本草及炮制专著中均有“九蒸九晒”方法的论述,如《本草从新》中记载“黄精去须,九蒸九晒用,每蒸一次,必半日方透”[7]。《得配本草》中有“洗净砂泥,蒸晒九次”的记载[8]。2010年版《中国药典》收入了黄精和酒黄精，黄精为除去杂质，洗净，略润，切厚片，干燥所得，酒黄精采用酒炖法或酒蒸法炮制所得[9]。

本实验中，同一产地（均产于湖南），2个品种的黄精的炮制后，随着炮制的蒸晒次数增多，黄精多糖的含量逐渐减少，这与多个研究报道的结果一致[10-11]。采用酶标仪测定黄精多糖含量，方法简便，取样量少，重现性好。目前认为，生品黄精对喉咙的刺激作用是黏液质引起的，黏液质属多糖类物质,黄精经蒸制后多糖类含量降低，可能是黏液质分解的结果。黄精生品中，小分子糖都为蔗糖和果糖[11]。有研究通过薄层色谱检视，从黄精及其炮制品中确认的小分子糖为葡萄糖、果糖和蔗糖[12]，黄精多糖由半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖和葡萄糖组成[13]。有研究表明，黄精炮制前后水浸出物平均增加29.03%（冷浸法）和24.62%（热浸法），醇浸出物增加32.54%，总糖量比生品减少12.84% ，还原糖含量则增加82.00%，游离氨基酸由生品的4个增加到10个，5-羟甲基糠醛显著增多[14-15]。

黄精成分丰富，具有药理作用的为黄精多糖、黄精皂苷、氨基酸、各种微量元素。黄精的药理作用并非单一组分的作用结果，而黄精多糖具体组成及结构目前尚未研究清楚，黄精的药理作用研究多集中在黄精多糖、黄精皂苷及炮制过程中明显增多的5-羟甲基糠醛上。黄精炮制后其成分及浸出液含量的改变，既有炮制过程中发生化学反应的作用，也有加入辅料炮制促进有效成分溶解的作用。目前黄精测定的指标尚不明确，单一使用黄精多糖含量作为判断其质量高低也难以代表黄精的质量。黄精的质量标准需更加全面考虑多个因素，而黄精炮制后，补益作用增强，可能与组成成分改变（包括化学结构改变、有效成分增多、各成分构成比例改变）、成分溶出提高、氨基酸含量增多等有关。黄精炮制前后成分改变及其对药理作用的影响需进一步研究。综上所述，炮制可使黄精多糖含量下降，炮制过程蒸晒次数越多，黄精多糖含量越少。

[1]方 圆.黄精多糖和低聚糖的分离与结构解析[D].无锡：江南大学,2011.

[2]祝凌丽,徐维平.黄精总皂苷和多糖的药理作用及其提取方法的研究进展[J].安徽医药,2009,13(7):719-722.

[3]董 群,郑丽伊,方积年,等.改良的硫酸-苯酚法测定多糖和寡糖含量的研究[J].中国药学杂志,1996,31(9):20-23.

[4]钱 枫,左 坚,潘国石,等.安徽产主要黄精品种的多糖含量测定和比较[J].甘肃中医学院学报,2011,28(1):61-63.

[5]孟 诜,张 鼎.食疗本草[M].北京:人民卫生出版社,1984:2.

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[8]严西亭,施澹宁,洪缉.得配本草[M].上海:上海科学技术出版社, 1958:31.

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[13]刘 柳,郑 芸,董 群,等.黄精多糖的组分及其免疫活性[J].中草药，2006，37(8):1 132.

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（本文编辑 贺慧娥）

Effcet of Different Processing Methods on the Content of Polygahatous Polysaccharides

QU Haoyu1,5,FENG Chuxiong1,2,5,XIE Mengzhou1,2,5*,ZHU Jianping1,2,5,SUN Yizhong3,5CUI Peiwu4,5,XIAO Zuowei4,5
（1.Key Discipline of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China；2.Hunan Province Key Laboratory of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 417000,China；3. Xinhua Luyuan Agricultural Science and Technology Limited Company,Changsha,Hunan 410208,China;5.Hunan Engineering Research Center of Drug and Food Homology Functional Food,Changsha,Hunan 410208,China）

ObjectiveTo explore different processing methods on polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red. and Polygonatum cyrtonema Hua,which cultivated and processed in Hunan.MethodsThe polysaccharide was extracted by ultrasonic extraction and the protein was removed by Sevage's method.The content of polysaccharide was determined by phenol-sulfuric acid method.ResultsThe polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red.with different times of steaming and drying processing methods were 7.973%,3.584%,2.845%,2.194%,and the polysaccharide content of Polygonatum cyrtonema Hua with different processing methods were 9.602%,3.185%,2.572%,2.043%;The precision was good (RSD= 0.274%);The average recovery rate was 99.29%;the test has good stability in 60min(RSD=1.36%).ConclusionThe content of polysaccharide was reduced with the more times of steaming and drying processing methods.

Polygonatum sibiricum Red.；Polygonatum cyrtonema Hua；polysaccharide；phenol-sulfuricacid method；microplate spectrophotometer

R283；R575.54

B

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.015

2015-11-25

湖南省教育厅创新平台基金项目（12k083）；湖南中医药大学中医诊断学国家重点学科开放基金项目（2014-27）。

瞿昊宇，男，助理实验师，从事中医药信息学，中医药膳学研究。

*谢梦洲，女，教授，硕士生导师，E-mail：xiemz@163.com。