七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定

2015-08-08李敏邓保国吴敏娜

湖北农业科学 2015年13期

李敏邓保国吴敏娜

摘要：采用菌丝生长速率法测定异菌脲、氯溴异氰尿酸、丙森锌、苯醚甲环唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利7种杀菌剂及其复配剂对番茄早疫病菌的抑制作用。结果表明，不同杀菌剂单剂对番茄早疫病菌均有明显的抑制作用。异菌脲、氯溴异氰尿酸、丙森锌、苯醚甲环唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利单剂浓度为0.01～5.00 mg/L时，对茄链格孢属菌丝生长抑制率分别为76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%；EC50分别为0.033 52、77.886 50、2.268 14、0.723 80、0.049 56、0.018 972、0.018 175 mg/L。当复配剂异菌脲和腐霉利按质量比2∶1，腐霉利和苯醚甲环唑按质量比1∶2、2∶1，腐霉利和醚菌酯按质量比1∶1、1∶2，苯醚甲环唑和醚菌酯按质量比1∶1、1∶2、2∶1，异菌脲和苯醚甲环唑按质量比1∶2时，均有明显增效；当异菌脲和苯醚甲环唑按质量比2∶1时，略有增效；当异菌脲和腐霉利按质量比1∶1，腐霉利和苯醚甲环唑按质量比1∶1，异菌脲和苯醚甲环唑按质量比1∶1时，均有相加作用。

关键词∶ 杀菌剂；复配剂；番茄早疫病菌

中图分类号： S436 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）13-3142-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.13.018

Laboratory Toxicity Tests of Seven Fungicides and Their Mixtures on Alternaria solani

LI Min， DENG Bao-guo， WU Min-na

（Xinxiang Medical Microbiology Teaching and Research Section， Xinxiang 453003， Henan， China）

Abstract： In laboratory， the toxicity effects of seven commercial fungicides including Procymidone etc and their mixtures which had better preventive efficiency on Alternaria Salani were determined by measuring mycelial growth rate were teste. The results showed that each fungicide has obvious inhibitory effect on mycelial growth of Alternaria Salani. In a wide range of fungicide concentrations（0.01～5.00 mg/L），the inhibition ratio of Iprodione，Chlorobromoisocyanuric acid，Propineb， Difenoconazole， Kresoxim-methyl， Alkyl nitriles methoxy quinone and Procymidone single agent were 76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%；The EC50 values were 0.033 52、77.886 50、2.268 14、0.723 80、0.049 56、0.018 972、0.018 175 mg/L；The mixtures of Iprodione and Procymidone with ratio of 1∶1，Procymidone and Difenoconazole with ratio of 1∶2、2∶1，Procymidone and Kresoxim-methyl with ratio of 1∶1、1∶2， Difenoconazole and Kresoxim-methy with ratio of 1∶1、1∶2、2∶1，Iprodione and Difenoconazole with ratio of 1∶2 have particularly obvious synergistic effect.The mixtures of Iprodione and Difenoconazole with ratio of 2∶1 have obvious synergistic effect；Iprodione and Procymidone have obvious synergistic effect 1∶1，Procymidone and Difenoconazole have obvious synergistic effect 1∶1，Iprodione and Difenoconazole with ratio of 1∶1 have slightly synergistic effect.

Key words：fungicide； mixture； Alternaria solani

番茄早疫病是番茄主要病害之一，其病原菌为茄链格孢属（Alternaria solani），属半知菌亚门链格孢属真菌。番茄早疫病又称轮纹病，主要危害叶片，也能危害茎、叶柄和果实，从苗期到成株期均可发病。研究发现，该病是一种世界性病害，在国内外很多地区发病率都很高，使果蔬产量损失严重[1]。20世纪80年代以来，在中国大部分地区也普遍发生，危害日趋严重，成为番茄生产中的重要病害。该病可以引起落叶、落花、落果和断枝，对产量影响较大，一般减产20%～30%，严重时可以使产量损失50%以上甚至绝产[2]，而且因果实内含有毒素，会使人体患血液病，危害人体健康[3]。由此可见，番茄早疫病给人们生产和健康带来了不可低估的影响。

目前，国内关于防治番茄早疫病的研究多都是田间防治药效试验报道，采用50%扑海因（异菌脲）、64%福锌氢氧、25%敌力脱、80%的代森锰锌等化学药剂防治番茄早疫病均有较理想的效果[4-6]，异菌脲、氯溴异氰尿酸、丙森锌、苯醚甲环唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利7种化学杀菌剂单剂及其4种单剂的复配剂均对番茄早疫病菌具有敏感性[7-9]。本研究采用菌丝生长速率法，系统研究各单剂抑菌活性及其复配剂的相对毒力，通过室内试验筛选防治番茄早疫病菌的有效药剂及最佳化学防治方案，为番茄早疫病的防治提供科学依据，制定出切实可行的防治措施。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株番茄早疫病病原菌株采集于豫北地区番茄种植大棚中的病果，经组织分离、纯化获得病原菌[10]。

1.1.2 试验药剂 50%异菌脲（病可丹）可湿性粉剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%氯溴异氰尿酸（比秀）可湿性粉剂为以色列海法作用保护有限公司生产，80%丙森锌（好锌泰）水分散粒剂为陕西美邦农药有限公司生产，10%苯醚甲环唑（病可丹）水分散粒剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%醚菌酯（信赖）可湿性粉剂为陕西美邦农药有限公司生产，32.8%烷基腈氧基醌（凯银）水分散粒剂、35%腐霉利悬浮剂为宜宾川安高科农药有限责任公司生产。

1.2 方法

1.2.1 杀菌剂单剂毒力测定将7种杀菌剂单剂与PDA培养基充分混匀，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 mg/L系列浓度的平板。采用菌丝生长速率法测定，用5 mm打孔器在培养6 d后的番茄早疫病菌平板上打孔，用镊子取菌丝面向下接种在含药PDA培养基上，每皿1个菌碟，28 ℃倒置培养，以去离子水作为对照组，每个处理设3次重复，于接种后第3天检查菌丝生长情况并用十字交叉法测量菌落生长直径，通过菌丝生长抑制率值和各药剂浓度对数值间的线性回归性进行分析，求出各菌株EC50并计算相对抑菌率。抑菌率计算方法为每个菌落使用十字交叉法测量2次，取其平均数作为菌落的大小。计算7种杀菌剂对菌丝生长的抑制百分率，公式如下：

菌落增长直径=菌落测量直径-菌盘直径

抑菌率=（对照菌落增长直径-含药培养基上菌落增长直径）/对照增长菌落直径×100%[11]

以浓度对数为横坐标（x），相对抑制率几率值为纵坐标（y），求出各药剂对供试菌株的毒力回归曲线方程y=a+bx、相关系数r与有效抑制浓度（EC50）。根据EC50分析比较不同杀菌剂对供试病菌菌丝生长的影响[12]。

1.2.2 复配剂的毒力测定选择抑菌活性较好的异菌脲、苯醚甲环唑、醚菌酯、腐霉利4种农药按其单剂浓度梯度两两配制成1∶1、1∶2、2∶1的含药平板，以去离子水作为对照组，每处理设3次重复。分别以异菌脲、醚菌酯、苯醚甲环唑为标准药剂，根据供药试剂，计算各复配剂的实际毒力指数、理论毒力指数、联合毒力。根据共毒系数的大小评价复配剂的增效作用，并确定最佳配比。

毒力指数（TI）=（单剂标准药剂EC50/供试药剂EC50）×100

混剂实际毒力指数（ATI）=（标准药剂EC50 / 混剂EC50）×100

混剂理论毒力指数（TTI）=单剂A的TI×PA+单剂B的TI×PB（PA和PB分别为混剂中有效成分的百分含量）

共毒系数（CTC）=（混剂的实测毒力指数/混剂的理论毒力指数）×100

根据共毒系数类型的划分标准[13]，CTC≥170为明显增效，120≤CTC<170为略有增效，70≤CTC<120为相加作用。CTC<70为拮抗作用。

2 结果与分析

2.1 单剂抑菌率测定

异菌脲、氯溴异氰尿酸、丙森锌、苯醚甲环唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利单剂在试验浓度下对茄链格孢属菌菌丝生长抑制率分别为76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%（图1，表1）。

2.2 7种杀菌剂单剂EC50

由表2可知，7种杀菌剂对番茄早疫病菌表现出不同的抑制效果，其中35%腐霉利悬浮剂对番茄早疫病菌丝生长具有极强的抑制作用，抑制效果最佳，EC50为0.018 2 mg/L；烷基腈氧基醌、异菌脲对番茄早疫病的抑制效果次之，EC50分别为0.019 0、0.033 5 mg/L；醚菌酯、苯醚甲环唑、丙森锌抑制效果也较好，EC50分别为0.049 6、0.723 8、2.268 1 mg/L；50%氯溴异氰尿酸抑制效果最差，EC50为77.886 5 mg/L。

2.3 复配杀菌剂的联合毒力测定

不同组合单剂复配对番茄早疫病菌的毒力不同，浓度为0.50 mg/L异菌脲-苯醚甲环唑1∶1、1∶2、2∶1的抑菌效果均比单剂好，分别为97.59%、99.58%、97.38%；浓度为0.10 mg/L异菌脲-腐霉利1∶1、1∶2、2∶1的抑菌效果也比单剂好，分别为82.61%、83.34%、92.35%；浓度为0.50 mg/L异菌脲-醚菌酯1∶1、1∶2、2∶1的抑菌效果比单剂好，分别为97.51%、97.08%、98.21%；浓度为0.10 mg/L腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2抑菌率也比单剂高，分别为80.27%、80.21%；苯醚甲环唑-醚菌酯的抑菌效果也比单剂效果好，分别为97.69%、97.73%、97.61%（图2，表3）。计算6种复配药剂不同比例对早疫病菌的毒力回归方程与EC50。结果表明，醚菌酯-腐霉利1∶1抑菌效果最好，其EC50为0.001 1 mg/L，早疫病菌对异菌脲-腐霉利2∶1抑菌效果较好，EC50为0.001 6 mg/L；腐霉利-醚菌酯1∶2抑菌效果次之，EC50为0.008 9 mg/L；苯醚甲环唑-醚菌酯2∶1复配剂也表现较高的抑菌率，其EC50为0.013 2 mg/L；异菌脲-腐霉利1∶1、腐霉利-苯醚甲环唑1∶2、2∶1的抑菌效果较好，EC50分别为0.020 4、0.021 9、0.025 3 mg/L；异菌脲-苯醚甲环唑1∶2、2∶1、苯醚甲环唑-醚菌酯1∶1、1∶2抑菌效果较好，其EC50分别为0.049 1、0.036 3、0.031 5、0.040 2 mg/L；异菌脲-苯醚甲环唑1∶1、异菌脲-醚菌酯1∶1、1∶2、2∶1、腐霉利-苯醚甲环唑1∶1、腐霉利-醚菌酯2∶1抑菌效果一般，EC50分别为0.054 8、0.079 3、0.063 8、0.067 8、0.086 0、0.066 9 mg/L；其抑菌效果最差的是异菌脲-腐霉利1∶2配比，其EC50为0.107 7 mg/L（表4）。

根据各复配剂的共毒系数，复配剂异菌脲-腐霉利2∶1、腐霉利-醚菌酯1∶1，有特别明显的增效作用，共毒系数分别为1 685.455、2 513.836；腐霉利-苯醚甲环唑1∶2、腐霉利-醚菌酯1∶2、苯醚甲环唑-醚菌酯1∶1、2∶1、异菌脲-苯醚甲环唑1∶2有明显增效，共毒系数分别为237.468 1、351.722 4、294.053 5、987.179 2、187.341 9；异菌脲-苯醚甲环唑2∶1略有增效，共毒系数为135.515 8；异菌脲-腐霉利1∶1，腐霉利-苯醚甲环唑1∶1，异菌脲-苯醚甲环唑1∶1有相加作用，共毒系数分别为115.138 6、116.957 3、106.555 5；说明异菌脲-腐霉利1∶1、2∶1，腐霉利-苯醚甲环唑1∶1、1∶2、2∶1，腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2，苯醚甲环唑-醚菌酯1∶2、1∶2、2∶1，异菌脲-苯醚甲环唑1∶2，异菌脲-苯醚甲环唑1∶1、2∶1，抑制早疫病菌的效果明显好于单剂。异菌脲-腐霉利1∶2，腐霉利-苯醚甲环唑1∶1，腐霉利-醚菌酯2∶1，异菌脲-醚菌酯1∶1、1∶2、2∶1有拮抗作用（表5，表6，表7）。

3 小结与讨论

目前，对番茄早疫病的防治缺乏有效的抗病作物品种，主要依赖于化学药剂进行防治，使用的药剂主要有二硫代氨基甲酸酯类、芳烃类、二甲酰亚胺类等，常见的品种如代森锰锌、百菌清、菌核净、异菌脲、腐霉利等，但这些药剂如今的施用量已经达到原有用量的数倍，抗药性问题严重，这不仅提高了农业生产成本，而且由于过量用药导致环境污染严重，危害生物安全。因此，研究使用新型高效、广谱、作用机理不同的杀菌剂以及科学合理使用现有药剂防治番茄早疫病是番茄生产亟待解决的问题[9，14]。本研究中7种杀菌剂对番茄早疫病菌菌丝生长的有效抑制浓度（EC50）由低到高依次为腐霉利、烷基腈氧基醌、异菌脲、醚菌酯、苯醚甲环唑、丙森锌、氯溴异氰尿酸。

在复配剂中，异菌脲与醚菌酯复配有拮抗作用，而三唑类苯醚甲环唑与甲氧基丙烯酸酯类醚菌酯在复配时两者的作用机理不相互影响，复配都有明显的增效作用；异菌脲与苯醚甲环唑在复配时所使用的比例不同对其增效作用不同，但均未出现拮抗作用，说明二甲酰亚胺类与三唑类在混合使用时，不同浓度的配比其作用不同，但是两者混合使用不会彼此影响其作用机理，只是比例不同增效效果不同。根据杀菌剂的作用机理及交互抗性，设计不同组合的药剂复配，异菌脲-腐霉利2∶1，腐霉利-苯醚甲环唑1∶1、1∶2、2∶1，腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2，苯醚甲环唑-醚菌酯1∶2、1∶2、2∶1，异菌脲-苯醚甲环唑1∶1、1∶2、2∶1，异菌脲-腐霉利1∶1，都有相加作用；说明异菌脲-腐霉利1∶1、2∶1，腐霉利-苯醚甲环唑1∶1、1∶2、2∶1，腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2，苯醚甲环唑-醚菌酯1∶2、1∶2、2∶1，异菌脲-苯醚甲环唑1∶2、1∶1、2∶1，抑制早疫病菌的效果明显好于单剂。这些在试验条件下效果很好的复配剂及其复配比例，为早疫病菌田间药剂防治中杀菌剂选用、复配或混用提供了理论依据，对于番茄早疫病的田间防治具重要意义。

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